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문제 정의
- 본 실험에서 사용한 약물과 도구가 부작용 및 스트 레스를 유발하는지 알아보기 위해 체중과 장기무게의 변화를 관찰했다. 장기적 반복적 스트레스 자극은 corticosterone의 증가와 체중의 감소를 유발하고31), 약물 의 독성은 장기무게의 변화를 가져올 수 있다.
- . 본 실험에서는 CON군과 비교시 MTS군 에서 발모에 유의한 결과를 얻었다. 이러한 점을 볼 때, 피부에 인위적으로 무수히 많은 미세한 구멍을 만드는 것이 새로운 콜라겐 섬유의 합성을 유도하여, 상처를 치유하는 동시에 모낭의 재생을 돕고, 기능을 활성화 시켜 발모에 영향을 끼침을 알 수 있었다.
- 영지는 임상에서 다용되는 재료이나 탈모관련 임상 증례만 보고되고 있고12), 실험적 연구는 보고된 바가 없 기에 새로운 탈모치료제 개발 및 미세다륜침과 같이 사 용했을 때의 효과를 알아보고자 본 연구를 진행하였다.
- 영지추출물은 임상에서 다용되는 재료이나 탈모 치료에 있어 그 효능 측정이나 치료기전 탐색과 같은 구체적인 연구는 현재까지 없었고, 특히 영지추출물의 효과를 극대화시키기 위해 사용되는 미세다륜침을 활용한 치료법에 대한 효과를 검정한 연구는 없었기에 본 연구를 진행하였고, 유효한 효과를 얻었기에 보고 하는 바이다.
제안 방법
- 또한 melanocyte가 모 낭에만 한정적으로 존재하며 melanin합성이 모발성장 주기와 잘 일치하므로 피부색으로 모발의 성장주기를 판정할 수 있다는 장점이 있어 모발생리 연구에 널리 이용되고 있다24). C57BL/6N 생쥐는 제모 후 6주째 휴 지기가 오기 때문에 체중 20 g 내외의 5주령 C57BL/6N 쥐를 일차적으로 마우스용 clipper를 이용하여 털을 깎 고, 이차적으로 제모제를 발라 모낭이 눈에 보이지 않 을 때까지 제거한 후, 24시간 동안 방치하여 미세상처 가 회복되도록 하였다.
- CON군은 50% EtOH를, MXD군 (MOBARIN 5% 용액, TAI GUK Pharm. co. LTD, Hwaseong, Korea)을 각각 100 ㎕씩, 일주일에 2번, 제모한 등 부위에 3주간 도포하였다. MTS군은 일주일에 2번, Derma-Q를 사용 하여 6회 롤링 하였으며, GLE + MTS군은 일차적으로 Derma-Q를 이용하여 3회 롤링 하고 GLE를 100 ㎕씩 도포한 후 Derma-Q로 3회 롤링 하여 약의 흡수를 촉진 시켰다.
- 실험그룹은 CON군, MXD군, MTS군, GLE + MTS군 총 4개 그룹으로 나누어 한 개 그룹당 5마리씩 실험하 였다. CON군은 50% EtOH를, MXD군은 5% Minoxidil 을 각각 100 ㎕씩, MTS군은 Derma-Q를 사용하여 6회 롤링 하였으며, GLE + MTS군은 일차적으로 Derma-Q 를 이용하여 3회 롤링하고 GLE를 100 ㎕씩 도포한 후 다시 Derma-Q로 3회 롤링 하여 약의 흡수를 촉진시켰 으며, 주 2회씩, 3주간 진행하였다.
- Primary antibody는 1 : 1000 으로 희석하여 4 ℃에서 overnight 하였고, TBST로 3회 세척하고, HRP-conjugated secondary antibody (1 : 1000 dilution)로 1시간 동안 실온에서 반응시켰다. ECL system을 이용하여 각 factor의 발현을 조사하였다.
- MTS군에서는 5마리 중 1마리에서 피부가 전체적으로 연한 회색으로 변하고, 2마리에서 피부가 부분적으로 회색으로 변하 는 현상을 관찰하였다. GLE + MTS군에서는 5마리에 서 피부가 전체적으로 회색으로 변하고 부분적인 발모 현상을 관찰하였으며 MXD군, GLE + MTS군, MTS군, CON군 순으로 발모현상이 촉진되는 것을 관찰하였다. 실험 21일째는 CON군에서는 5마리 모두 부분적인 발 모현상을 하였고, MXD군에서는 5마리 모두 전체적으 로 증가된 발모현상을 관찰하였다.
- MTS군에서는 5마리 중 1마리에서 피부가 전체적으로 연한 회색으로 변하고, 2마리에서 피부가 부분적으로 회색으로 변하는 현상을 관찰하였다. GLE + MTS군에서는 5마리에서 피부가 전체적으로 회색으로 변하고 부분적인 발모현상을 관찰하였으며 MXD군, GLE + MTS 군, MTS군, CON군 순으로 발모현상이 촉진되는 것을 관찰하였다 (Fig. 3).
- MXD군 에서는 5마리 모두 전체적으로 증가된 발모현상을 관찰하였다. MTS군에서는 5마리 가운데 4마리에서 전체 적으로 증가된 발모현상을, 1마리에서 부분적인 발모 현상을 관찰하였다. GLE + MTS군에서는 5마리 모두 전체적으로 증가된 발모현상을 관찰하였으며 MXD군, GLE + MTS군, MTS군, CON군 순으로 발모현상이 촉 진되는 것을 관찰하였다 (Fig.
- MXD군 에서는 5마리 모두 전체적으로 증가된 발모현상을 관찰하였다. MTS군에서는 5마리 가운데 4마리에서 전체 적으로 증가된 발모현상을, 1마리에서 부분적인 발모 현상을 관찰하였다. GLE + MTS군에서는 5마리 모두 전체적으로 증가된 발모현상을 관찰하였으며 MXD군, GLE + MTS군, MTS군, CON군 순으로 발모현상이 촉 진되는 것을 관찰하였다 (Fig.
- MXD군에서는 5마리 모두 피부가 전체적으로 회색으로 변하고 발모현상이 모두 관찰되었다. MTS군에서는 5마리 중 1마리에서 피부가 전체적으로 연한 회색으로 변하고, 2마리에서 피부가 부분적으로 회색으로 변하는 현상을 관찰하였다. GLE + MTS군에서는 5마리에서 피부가 전체적으로 회색으로 변하고 부분적인 발모현상을 관찰하였으며 MXD군, GLE + MTS 군, MTS군, CON군 순으로 발모현상이 촉진되는 것을 관찰하였다 (Fig.
- MXD군에서는 5마리 모두 피부가 전체적으로 회색으로 변하고 발모현상이 모두 관찰되었다. MTS군에서는 5마리 중 1마리에서 피부가 전체적으로 연한 회색으로 변하고, 2마리에서 피부가 부분적으로 회색으로 변하는 현상을 관찰하였다. GLE + MTS군에서는 5마리에서 피부가 전체적으로 회색으로 변하고 부분적인 발모현상을 관찰하였으며 MXD군, GLE + MTS 군, MTS군, CON군 순으로 발모현상이 촉진되는 것을 관찰하였다 (Fig.
- LTD, Hwaseong, Korea)을 각각 100 ㎕씩, 일주일에 2번, 제모한 등 부위에 3주간 도포하였다. MTS군은 일주일에 2번, Derma-Q를 사용 하여 6회 롤링 하였으며, GLE + MTS군은 일차적으로 Derma-Q를 이용하여 3회 롤링 하고 GLE를 100 ㎕씩 도포한 후 Derma-Q로 3회 롤링 하여 약의 흡수를 촉진 시켰다.
- RT-PCR은 one-step RT-PCR PreMix kit를 사용하여 45 ℃에서 30분, 94 ℃에서 5분간 반응시킨 후 94 ℃에 서 30초간 denaturation시키고, 적정온도에서 30초간 annealing시킨 다음, 72 ℃에서 1분간 extension시키는 cycle을 30회 반복한 뒤, 마지막 extension은 72 ℃에서 5분간 PCR machine (GeneAmp, PCR system 9700, USA) 에서 수행하였다. 각 PCR products는 2% agarose gel에 loading하여 100 V 조건에서 30분간 전기영동을 통하여 분석하였다.
- 미세다륜침과 영지추출물의 발모효과를 알아보기 위한 실험에서 H&E 염색을 시행하여 피부조직에서 모 낭, 모근 및 발모상태를 광학현미경으로 관찰하였다.
- 미세다륜침과 영지추출물의 발모효과를 알아보기 위해 제모한 생쥐에서 Filloscope를 이용해 모발의 밀도 굵기 및 길이를 관찰하였다. Filloscope 50 배율에서 모 발의 밀도를 측정한 결과 CON군은 153.
- 미세다륜침은 Derma-Q (DONGBANG Medi-Care Inc, Korea) 0.2 ㎜를 사용하여 단독 또는 영지추출물 도포와 병행하여 탈모 부위에 좌-우, 상-하, 대각선 방향으로 각 1회 롤링 하였다.
- 0 ㎜의 바늘 192개가 장착된 롤러를 피부 표면에서 굴리면서 기계적 인 구멍에 의해 피부에 다수의 microscopic channel을 만 들도록 고안된 장비25-26)로 처음에는 약물 전달을 증가시 키기 위한 방법으로 사용되었으나, 유효 약물성분의 도 포 없이 기계적으로 구멍을 만들어주는 자체만으로도 각종 흉터와 주름 개선에 효과가 있다는 연구들이 보고 되고 있다27). 본 실험에서는 Derma-Q (DONGBANG Medi-Care Inc, Korea) 0.2 ㎜를 사용하여 단독 또는 영지 추출물 도포와 병행하여 탈모 부위에 6회 동안 좌-우, 상-하, 대각선 방향으로 롤링 하였다.
- 시료 처치 7일, 14일, 21일째에 동물을 희생시켜 얻어진 피부 조직에 Trizol을 넣어 homogenizer로 분쇄시켜 RNA를 추출하였다.
- 시료와 미세다륜침 처치를 시작한 날을 실험 1 일째로 정하여 피부에서 일어나는 발모와 관련된 특징들을 관찰하면서 7일 간격으로 디지털카메라를 이용하여 촬영하였고, 핀셋을 사용하여 털을 뽑아 털 길이를 측정하였으며, 더욱 세밀한 관찰을 위하여 Folliscope (Lead M, Seoul, Korea)를 이용하여 모낭이 형성된 부위와 발모부위를 촬영함으로써 털의 밀도와 굵기를 관찰 하였다.
- 실험 21일째는 50% EtOH을 도포한 CON군에서는 5마리 모두 부분적인 발모현상을 관찰하였다. MXD군 에서는 5마리 모두 전체적으로 증가된 발모현상을 관찰하였다.
- GLE + MTS군에서는 5마리에 서 피부가 전체적으로 회색으로 변하고 부분적인 발모 현상을 관찰하였으며 MXD군, GLE + MTS군, MTS군, CON군 순으로 발모현상이 촉진되는 것을 관찰하였다. 실험 21일째는 CON군에서는 5마리 모두 부분적인 발 모현상을 하였고, MXD군에서는 5마리 모두 전체적으 로 증가된 발모현상을 관찰하였다. MTS군에서는 5마 리 가운데 4마리에서 전체적으로 증가된 발모현상을, 1마리에서 부분적인 발모현상을 관찰하였다.
- 실험군은 제모 후 50% EtOH을 도포한 대조군 (CON), 5% Minoxidil 도포군 (MXD), 미세다륜침 처치 군 (MTS) 및 GLE와 미세다륜침 처치군 (GLE + MTS)으로 나누었다.
- 실험동물들은 일차적으로 마우스용 clipper를 이용 하여 등 부위의 털을 깎고, 피부 속에 남아있는 모낭과 미세한 털을 제거하기 위하여 이차적으로 제모제 Bikiro (태극제약, 화성, 한국)를 발라 모낭이 눈에 보이지 않을 때까지 제거하고 24시간 동안 방치하여 미세 상처가 회복 되도록 하였다.
- 영지추출물과 미세다륜침의 발모효과에 대한 실험 의 결과를 세가지 측면으로 나누어 살펴보았다. 육안 및 현미경으로 관찰한 결과 모발성장을 촉진하였고, 모 발의 밀도와 굵기를 증가시키는 효과를 나타내었으나 체중과 장기의 무게에 변화를 나타내지 않았다.
- 제모 후 7일, 14일, 21일째 H&E 염색을 시행하여 피부조직에서 모낭, 모근 및 발모상태를 광학현미경으로 관찰하였다. 제모 7일째 CON군은 모근의 발달이 미약하 였으며, 이에 비하여 MXD군, MTS군과 GLE + MTS군은 모근의 발달이 촉진 된 것을 관찰하였다. 제모 14일째에 는 모든 군에서 모낭의 발달을 관찰할 수 있었고, MXD군, MTS군과 GLE + MTS군은 CON군에 비하여 모낭의 수와 크기가 현저히 증가하였다.
- 제모 후 7일, 14일, 21일째 H&E 염색을 시행하여 피부조직에서 모낭, 모근 및 발모상태를 광학현미경으로 관찰하였다.
- 체중은 매주 1회 측정하였고, 장기의 무게는 실험 종료후 동물을 희생시킨 후 비장, 흉선, 심장, 간, 신장을 적출하여 측정하였다.
- 포매된 조직을 5 ㎛의 박절편을 만들어 hematoxylin and eosin (H&E) 염색한 후 광학현미경으로 모낭 크기와 수, 모근의 길이를 관찰하였다.
- 피부조직의 조직학적 관찰을 위해 약 처리 7일, 14 일, 21일째에 동물을 희생시켜 적출한 등쪽 피부조직을 10% 중성포르말린에 고정한 다음 24시간 후 흐르는 물에 수세하고 alcohol, xylene, paraffin으로 탈수, 투명, 침투과정을 거쳐 파라핀에 포매하였다. 포매된 조직을 5 ㎛의 박절편을 만들어 hematoxylin and eosin (H&E) 염색한 후 광학현미경으로 모낭 크기와 수, 모근의 길이를 관찰하였다.
대상 데이터
- 본 실험에 사용된 영지 (Ganoderma lucidum)는 국내 자연산으로, 갓부분 500 g을 증류수로 세척한 후, 4 L의 25% ethanol을 첨가하여 10시간 동안 실온에서 추 출 (Ganoderma lucidum extract, GLE)하였다. 추출된 용액을 원심분리하여 상층액을 분리하고, 0.
- 또한 polysaccharide, tritepene, nucleoside, steroid, fatty acid, alkaloid, 단백질 아미노산 무기염류 등이 포함 되어 있어 이뇨작용 (利尿作用), 해독작용 (解毒作用), 보간작용 (補肝作用), 조압작용 (調壓作用)이 뛰어나며 강심 (强心), 강장 (强壯), 강정 (强精) 작용에 탁월한 효 능이 있는 것으로 알려져 있으며 항균작용, 항염증작 용과 면역작용 뿐만 아니라 항암작용 등의 약리효과가 우수한 것으로 밝혀져 오고 있다29). 본 실험에 사용한 영지 (Ganoderma lucidum)는 국내 자연산으로, 갓부분 500 g을 세척 후 25% ethanol에서 10시간동안 추출하 여, 원심분리기로 돌리고 여과하여 감압농축하였다.
- 실험그룹은 CON군, MXD군, MTS군, GLE + MTS군 총 4개 그룹으로 나누어 한 개 그룹당 5마리씩 실험하 였다. CON군은 50% EtOH를, MXD군은 5% Minoxidil 을 각각 100 ㎕씩, MTS군은 Derma-Q를 사용하여 6회 롤링 하였으며, GLE + MTS군은 일차적으로 Derma-Q 를 이용하여 3회 롤링하고 GLE를 100 ㎕씩 도포한 후 다시 Derma-Q로 3회 롤링 하여 약의 흡수를 촉진시켰 으며, 주 2회씩, 3주간 진행하였다.
- 실험동물은 5 주령의 C57BL/6N male mice를 (주)SAM TAKO (Osan, Kyungki-Do, Korea)로부터 구입하여, 온도 23 ± 3 ℃, 상대습도 50 ± 10%, 12시간 조명주기 조 건하에서 식이와 식수를 자유롭게 섭취하도록 하였으 며 7일간의 적응기간을 거친 후 실험에 사용하였다.
데이터처리
- 05 로 하였다. 각 실험군 간의 통계학적 분석은 one way-ANOVA와 Dunett test 검정을 실시하였다.
- 통계처리 성적은 통계 프로그램 패키지 SPSS (17.0 K for Windows)를 사용하여 평균치 ± 표준편차로 나타내었고 유 의수준은 p<0.05 로 하였다.
성능/효과
- 1. 육안적 관찰결과 GLE + MTS군에서 전체적으로 증가 된 발모현상이 있었다.
- 14 일째 CON군, MXD군, MTS군과 GLE + MTS군의 모발의 길이는 각각 0.78 ± 0.24 ㎜, 2.50 ± 0.53 ㎜, 1.20 ± 0.48 ㎜와 2.80 ± 0.71 ㎜로 CON군에 비해 MXD군과 GLE + MTS군에서 유의한 증가를 보였다.
- 14일째 CON군, MXD군, MTS군 과 GLE + MTS군의 모발의 길이는 각각 0.78 ± 0.24 ㎜, 2.50 ± 0.53 ㎜, 1.20 ± 0.48 ㎜와 2.80 ± 0.71 ㎜ 로 CON 군에 비해 MXD군과 GLE + MTS군에서 유의한 증가를 보였다.
- 14일째 CON군, MXD군, MTS군과 GLE + MTS군의 체중은 각각 23.73 ± 1.27 g, 24.06 ± 0.70 g, 23.13 ± 1.08 g과 22.77 ± 1.03 g으로 각 실험군 간의 유 의한 차이는 없었다.
- 2. Filloscope를 이용한 모발의 밀도, 굵기 및 길이를 관찰한 결과, 밀도에 있어서 CON군과 비교시 GLE + MTS군 은 약 1.5배 증가했다. 굵기에 있어서 CON군과 비교시 GLE + MTS군은 2배가량 굵어졌다.
- 21일째 CON군, MXD군, MTS군과 GLE + MTS 군의 모발의 길이는 각각 3.90 ± 0.57 ㎜, 7.90 ± 0.57 ㎜, 4.35 ± 0.58 ㎜와 6.20 ± 0.63 ㎜ 로 CON군에 비해 MXD군과 GLE + MTS군에서 유의한 증가를 보였다.
- 21일째 CON군, MXD군, MTS군과 GLE + MTS군의 모발의 길이는 각각 3.90 ± 0.57 ㎜, 7.90 ± 0.57 ㎜, 4.35 ± 0.58 ㎜와 6.20 ± 0.63 ㎜로 CON군에 비해 MXD군과 GLE + MTS군에서 유의한 증가를 보였 다 (Fig. 6).
- 21일째 CON군, MXD군, MTS군과 GLE + MTS군의 체중은 각각 25.48 ± 0.59 g, 25.83 ± 0.98 g, 24.85 ± 1.14 g과 24.74 ± 0.85 g으로 각 실험군 간의 유의한 차이는 없었다 (Fig. 8).
- 21일째 TGF-α와 TGF-β1의 RNA 발현량은 MXD군, GLE + MTS군, MTS군, CON군순으로 발현하였다.
- 3. 모낭 및 모발의 성장 조절 유전자 발현에 미치는 영향을 알아보기 위해 유전자의 발현량을 관찰한 결과 CON 에 비해 GLE + MTS군은 TGF-α, TGF-β1, IGF-1 의 발현량이 CON군에 비해 발현이 증가하였고, 시간이 자날수록 발현량이 증가하였다.
- 4. 피부조직의 VEGF와 IGF-1 단백질 발현을 조사한 결과 GLE + MTS군은 시간이 지날수록 발현량이 증가하여 21 일째 MXD군과 유사하였다.
- 5. 모낭, 모근 및 발모상태를 광학 현미경으로 관찰한 결과 MXD군, MTS군, GLE + MTS군은 제모 7일째부터 모 근이 발달하는 것이 관찰되었으며, 제모 21일째에는 MXD군, MTS군과 GLE + MTS군은 CON군에 비하여 모낭과 모근의 수와 크기가 발달하였고, 굵은 털의 수가 증가하여 보다 잘 발달된 발모상태를 나타내었다.
- 7일째 CON군, MXD군, MTS군과 GLE + MTS 군의 체중은 각각 21.52 ± 1.09 g, 21.43 ± 1.12 g, 20.55 ± 1.38 g과 20.28 ± 1.06 g으로 각 실험군 간의 유의한 차이는 없었다.
- Filloscope 100 배율에서 모 발의 굵기를 측정한 결과 CON군은 12.63 ± 5.38 ㎛ 이 었으며, MXD군은 28.65 ± 4.09 ㎛ 로 CON군에 비해 유의한 증가를 보였다.
- Filloscope 100 배율에서 모발의 굵기를 측정한 결과 CON군은 12.63 ± 5.38 ㎛이었으며, MXD군은 28.65 ± 4.09 ㎛로 CON군에 비해 유의한 증가를 보였다.
- Filloscope 50 배율에서 모 발의 밀도를 측정한 결과 CON군은 153.72 ± 39.83 number of hair/㎠ 이었으며, MXD군은 351.25 ± 32.93 number of hair/㎠ 으로 CON군에 비해 유의한 증가를 보였다.
- Filloscope 50배율에서 모발의 밀도를 측정한 결과 CON군은 153.72 ± 39.83 number of hair/㎠ 이었으며, MXD군은 351.25 ± 32.93 number of hair/㎠ 으로 CON 군에 비해 유의한 증가를 보였다.
- MTS군에서는 5마 리 가운데 4마리에서 전체적으로 증가된 발모현상을, 1마리에서 부분적인 발모현상을 관찰하였다. GLE + MTS군에서는 5마리 모두 전체적으로 증가된 발모현 상을 관찰하였으며 MXD군, GLE + MTS군, MTS군, CON군 순으로 발모현상이 촉진되는 것을 관찰하였다.
- MTS군에서는 5마리 가운데 4마리에서 전체 적으로 증가된 발모현상을, 1마리에서 부분적인 발모 현상을 관찰하였다. GLE + MTS군에서는 5마리 모두 전체적으로 증가된 발모현상을 관찰하였으며 MXD군, GLE + MTS군, MTS군, CON군 순으로 발모현상이 촉 진되는 것을 관찰하였다 (Fig. 4).
- 반면 MTS군 은 CON군과 유사한 발현을 보였다. GLE + MTS군은 MXD군에 비해 발현량이 적었으나 CON군에 비해 발 현이 증가하였고 PRL의 발현은 14일 이후에 증가하였 다 (Fig. 11).
- 반면 MTS군은 CON군과 유사한 발현을 보였다. GLE + MTS군은 MXD군에 비해 발현량이 적었으나 CON군에 비해 발현이 증가하였고 PRL의 발현은 14일 이후에 증가하였다.
- . IGF-1의 RNA 발현량은 제모 후 7일 째 MXD군, GLE + MTS군, MTS군, CON군순으로 발 현량이 증가하였고 14일째, 21일째 시간이 흐름에 따 라 MXD군, GLE + MTS군과 CON군의 발현량이 서서 히 증가하였으나, MTS군의 변화는 적었다.
- MTS 군은 14.30 ± 3.29 ㎛로 CON군에 비해 유의한 차이가 없었고 GLE + MTS군은 23.20 ± 4.23 ㎛로 CON군에 비해 유의한 증가를 보였다 (Fig. 6).
- 제모 후 7일, 14일, 21일째 피부조직의 TGF-α, TGFβ1과 IGF-1의 발현량을 조사한 결과 MXD군은 모두 CON군에 비해 TGF-α, TGF-β1과 IGF-1 발현이 현저 히 증가하였다. MTS군과 GLE + MTS군은 MXD군에 비해 발현량이 적었으나 GLE + MTS군, MTS군 순으로 CON군에 비해 발현이 증가하였다. 또한 시간이 지날수록 발현량이 증가하였다 (Fig.
- MTS군은 14.30 ± 3.29 ㎛ 로 CON군에 비해 유의한 차이가 없었고 GLE + MTS군은 23.20 ± 4.23 ㎛ 로 CON군에 비해 유의한 증가를 보였 다.
- MTS군은 192.23 ± 17.75 number of hair/㎠ 으 로 CON군에 비해 유의한 차이가 없었고 GLE + MTS 군은 237.87 ± 46.85 number of hair/㎠ 로 CON군에 비 해 유의한 증가를 보였다.
- MTS군은 192.23 ± 17.75 number of hair/㎠ 으로 CON군에 비해 유의한 차이가 없었고 GLE + MTS군은 237.87 ± 46.85 number of hair/㎠ 로 CON군에 비해 유의한 증가를 보였다 (Fig. 5).
- TGF-α와 TGF-β1의 RNA 발현량은 제모 후 7일째, 14일째, 21 일째 시간이 흐름에 따라 발현량이 서서히 증가하였다.
- 이상의 실험 결과로 볼 때 피부조직의 VEGF와 IGF-1의 단백질 발현에서 영지추출물과 미세다륜침의 병용이 Minoxidil과 유사한 효과를 보이는 것을 알 수 있었다. 그러나, 21일째 MTS군에서 IGF-1의 RNA발현은 CON에 비해 증가하지 않았으나 단백질 발현은 CON 에 비해 증가하는 것으로 보아 유전자의 전사와 번역 단계에서 조절을 통해 유전자의 발현에 영향을 미치는 것으로 생각된다.
- 또한 MTS군에 비해 GLE + MTS군에서 육안적으로 발모가 많이 되었고, Filloscope로 관찰시 모발의 밀도, 길이, 굵기가 유의한 증가를 보였기에 영지가 발모를 촉진시키는 효능이 있음을 확인하였다.
- 분자생 물학적 관찰결과 피부조직에서 모낭과 모발의 성장과 관련된 인자의 유전자 및 단백질 발현을 증가시켰다. 마지막으로 광학현미경적 관찰 결과 진피층에서 모낭 과 모근의 성장을 관찰할 수 있었다. 이러한 결과로부터 영지추출물과 미세다륜침이 모발성장을 촉진하고 유도 하는 효과가 있음을 확인할 수 있었으며, 따라서 장기간 사용시 다모증, 가려움증, 홍반 등의 부작용이 있는 미 녹시딜의 대체 치료법으로 영지추출물과 미세다륜침의 병용치료가 효과가 있는 것으로 생각한다.
- 굵기에 있어서 CON군과 비교시 GLE + MTS군은 2배가량 굵어졌다. 밀도에 있어서 CON군과 비교시 GLE + MTS군은 1.5배 증가하였다.
- 육안 및 현미경으로 관찰한 결과 모발성장을 촉진하였고, 모 발의 밀도와 굵기를 증가시키는 효과를 나타내었으나 체중과 장기의 무게에 변화를 나타내지 않았다. 분자생 물학적 관찰결과 피부조직에서 모낭과 모발의 성장과 관련된 인자의 유전자 및 단백질 발현을 증가시켰다. 마지막으로 광학현미경적 관찰 결과 진피층에서 모낭 과 모근의 성장을 관찰할 수 있었다.
- 영지추출물과 미세다륜침의 발모효과에 대한 실험 의 결과를 세가지 측면으로 나누어 살펴보았다. 육안 및 현미경으로 관찰한 결과 모발성장을 촉진하였고, 모 발의 밀도와 굵기를 증가시키는 효과를 나타내었으나 체중과 장기의 무게에 변화를 나타내지 않았다. 분자생 물학적 관찰결과 피부조직에서 모낭과 모발의 성장과 관련된 인자의 유전자 및 단백질 발현을 증가시켰다.
- 마지막으로 광학현미경적 관찰 결과 진피층에서 모낭 과 모근의 성장을 관찰할 수 있었다. 이러한 결과로부터 영지추출물과 미세다륜침이 모발성장을 촉진하고 유도 하는 효과가 있음을 확인할 수 있었으며, 따라서 장기간 사용시 다모증, 가려움증, 홍반 등의 부작용이 있는 미 녹시딜의 대체 치료법으로 영지추출물과 미세다륜침의 병용치료가 효과가 있는 것으로 생각한다.
- 본 실험에서는 CON군과 비교시 MTS군 에서 발모에 유의한 결과를 얻었다. 이러한 점을 볼 때, 피부에 인위적으로 무수히 많은 미세한 구멍을 만드는 것이 새로운 콜라겐 섬유의 합성을 유도하여, 상처를 치유하는 동시에 모낭의 재생을 돕고, 기능을 활성화 시켜 발모에 영향을 끼침을 알 수 있었다.
- 제모 후 21일째 장기무게를 측정한 결과 비장, 흉선, 심장, 간, 신장 모두에서 유의 한 차이는 없었다. 이상의 결과로 볼 때 Minoxidil, 영 지추출물, 미세다륜침 자극이 스트레스로 작용하지 않 았음을 알 수 있고, Minoxidil과 영지추출물이 독성을 띄지 않음을 알 수 있었다. 다만 실험기간이 짧았던 점 을 감안해 볼 때, 3개월 이상의 장기간 사용이 어떠한 영향을 미치는지는 추후 실험이 더 필요해 보인다.
- GLE + MTS군은 시간이 지날수록 발현량 이 증가하여 21일째 발현량이 MXD군과 유사하였다. 이상의 실험 결과로 볼 때 피부조직의 VEGF와 IGF-1의 단백질 발현에서 영지추출물과 미세다륜침의 병용이 Minoxidil과 유사한 효과를 보이는 것을 알 수 있었다. 그러나, 21일째 MTS군에서 IGF-1의 RNA발현은 CON에 비해 증가하지 않았으나 단백질 발현은 CON 에 비해 증가하는 것으로 보아 유전자의 전사와 번역 단계에서 조절을 통해 유전자의 발현에 영향을 미치는 것으로 생각된다.
- 제모 후 7일, 14일, 21일째 H&E 염색을 시행하여 피부조직에서 모낭, 모근 및 발모상태를 광학현미경으로 관찰하였다. 제모 7일째 CON군은 모근의 발달이 미약하 였으며, 이에 비하여 MXD군, MTS군과 GLE + MTS군은 모근의 발달이 촉진 된 것을 관찰하였다. 제모 14일째에 는 모든 군에서 모낭의 발달을 관찰할 수 있었고, MXD군, MTS군과 GLE + MTS군은 CON군에 비하여 모낭의 수와 크기가 현저히 증가하였다.
- 제모 후 0일, 7일, 14일, 21일째 체중을 측정한 결과 0일째 CON군, MXD군, MTS군과 GLE + MTS군의 체 중은 각각 19.84 ± 0.90 g, 19.26 ± 0.51 g, 19.36 ± 1.05 g과 19.47 ± 1.21 g으로 각 실험군 간의 유의한 차이는 없었다.
- 3 g 안팎으로 각 실험군 간 의 유의한 차이는 없었다. 제모 후 21일째 장기무게를 측정한 결과 비장, 흉선, 심장, 간, 신장 모두에서 유의 한 차이는 없었다. 이상의 결과로 볼 때 Minoxidil, 영 지추출물, 미세다륜침 자극이 스트레스로 작용하지 않 았음을 알 수 있고, Minoxidil과 영지추출물이 독성을 띄지 않음을 알 수 있었다.
- 제모 후 21일째 장기무게를 측정한 결과 비장의 무게 는 CON군, MXD군, MTS군과 GLE + MTS군이 각각 0.07 ± 0.01 g, 0.07 ± 0.02 g, 0.06 ± 0.02 g과 0.07 ± 0.01 g으 로 각 실험군 간의 유의한 차이는 없었다.
- 제모 후 7 일, 14 일, 21 일째 모발의 길이를 측정할 결과 7일째 CON군, MXD군, MTS군과 GLE + MTS군 의 모발의 길이는 각각 0.21 ± 0.04 ㎜, 0.23 ± 0.03 ㎜, 0.21 ± 0.03 ㎜ 와 0.21 ± 0.03 ㎜ 로 각 실험군 간의 유 의한 차이는 없었다.
- 제모 후 7일, 14일, 21일째 모발의 길이를 측정한 결 과 7일째 CON군, MXD군, MTS군과 GLE + MTS군의 모발의 길이는 각각 0.21 ± 0.04 ㎜, 0.23 ± 0.03 ㎜, 0.21 ± 0.03 ㎜와 0.21 ± 0.03 ㎜로 각 실험군 간의 유의 한 차이는 없었다.
- PL 역시 모발의 성장을 촉진하고 모발세포의 세포사를 방 지한다. 제모 후 7일, 14일, 21일째 피부조직의 PRL과 PL의 RNA 발현량을 조사한 결과 MXD군은 모두 CON군에 비해 PRL과 PL의 발현이 현저히 증가하였 다. 반면 MTS군은 CON군과 유사한 발현을 보였다.
- 제모 후 7일, 14일, 21일째 피부조직의 PRL과 PL의 발현량을 조사한 결과 MXD군은 모두 CON군에 비해 PRL과 PL의 발현이 현저히 증가하였다. 반면 MTS군 은 CON군과 유사한 발현을 보였다.
- 제모 후 7일, 14일, 21일째 피부조직의 TGF-α, TGFβ1과 IGF-1의 발현량을 조사한 결과 MXD군은 모두 CON군에 비해 TGF-α, TGF-β1과 IGF-1 발현이 현저 히 증가하였다.
- 제모 후 7일, 14일, 21일째 피부조직의 VEGF와 IGF-1 의 단백질 발현을 조사한 결과 MXD군은 모두 CON군에 비해 VEGF와 IGF-1 발현이 현저히 증가하 였다. 반면 MTS군은 VEGF와 IGF-1 발현이 7일과 14 일째에 CON군과 유사한 발현을 보였으나 21일째 발 현이 증가하였다.
- 제모 후 7일, 14일, 21일째 피부조직의 VEGF와 IGF-1 의 단백질 발현을 조사한 결과 MXD군은 모두 CON군에 비해 VEGF와 IGF-1 발현이 현저히 증가하 였다. 반면 MTS군은 VEGF와 IGF-1 발현이 7일과 14 일째에 CON군과 유사한 발현을 보였으나 21일째 발 현이 증가하였다.
후속연구
- 이상의 결과로 볼 때 Minoxidil, 영 지추출물, 미세다륜침 자극이 스트레스로 작용하지 않 았음을 알 수 있고, Minoxidil과 영지추출물이 독성을 띄지 않음을 알 수 있었다. 다만 실험기간이 짧았던 점 을 감안해 볼 때, 3개월 이상의 장기간 사용이 어떠한 영향을 미치는지는 추후 실험이 더 필요해 보인다.
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