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문제 정의
- 황련해독탕은 淸熱, 解毒, 항알레르기의 효능으로 實熱火毒, 上熱感, 頭痛, 項强, 不眠, 熱性 皮膚病 등에 효과가 있으며17-19), 황련해독탕 약침을 기능성 두통20), 胸部上熱感21), 慢性 結膜炎 또는 眼球乾燥症22), 지루피부염23)에 사용한 연구가 보고되어 있다. 또한 두피열감, 발적, 상열감을 호소하는 경우 황련해독탕 약침과 매선의 병행으로 호전된 임상보고11)도 있어 임상에서 탈모의 內因 중 血熱, 風熱, 濕熱, 火 등의 경우에 응용해 볼 수 있으며, 황련해독탕 약침액이 주로 熱感을 동반하는 탈모치료에 효과적일 것이라고 생각되어 본 연구를 진행하였다.
- 본 실험에서는 황련해독탕 약침액 도포의 효과를 극대화시키기 위해 피부에 다수의 microscopic channel을 이용하여 약물의 흡수를 도와주는 미세다륜침을 활용한 치료법을 적용하였고, MXD를 양성대조군으로 사용하여 모발성장에 미치는 영향을 조사하였으며, VEGF, IGF-1, PRL, PL의 유전자 발현 및 단백질 발현의 증가를 확인하여 이에 유효한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
제안 방법
- 실험그룹은 CON군, MXD군, MTS군, HRHDT+MTS군 총 4개 그룹으로 나누어 한 개 그룹당 3마리씩 실험하였다. CON군은 생리식염수를, MXD군은 3% Minoxidil을 각각 100㎕씩, MTS군은 Derma-Q를 사용하여 2회 롤링하였으며, HRHDT+MTS군은 HRHDT을 100㎕씩 도포한 후 Derma-Q로 왕복 2회 롤링하여 약의 흡수를 촉진시켰으며 주 2회씩, 17일간 진행하였다.
- CON군은 생리식염수를, MXD군은 3% minoxidil 용액을 각각 100㎕씩, 일주일에 2번, 제모한 등 부위에 17일간 도포하였다. MTS군은 일주일에 2번, Derma-Q를 사용하여 왕복 2회 롤링하였으며, HRHDT+MTS군은 일주일에 2번, HRHDT를 100㎕씩 도포한 후 Derma-Q로 왕복 2회 롤링하여 약의 흡수를 촉진시켰다.
- MTS와 HRHDT의 발모효과를 알아보기 위한 실험에서 H&E 염색을 시행하여 피부조직에서 모낭, 모근 및 발모상태를 광학현미경으로 관찰하였다
- MTS와 HRHDT의 발모효과를 알아보기 위한 실험에서 육안적으로 관찰한 결과 MXD군, HRHDT+MTS군, MTS군, CON군 순으로 발모현상이 촉진되는 것을 관찰하였다. MTS와 HRHDT의 발모효과를 알아보기 위해 제모한 mouse에서 Folliscope를 이용해 모발의 밀도, 굵기 및 길이를 관찰하였다. Folliscope 50, 100 배율에서 모발의 밀도와 굵기를 측정한 결과 시간이 지날수록 CON군에 비해 MXD군, HRHDT+MTS군과 MTS군 순으로 증가를 보였다.
- MXD, MTS, HRHDT의 자극이 스트레스로 작용하는지, 장기에 대한 독성영향을 미치는지 확인하기 위해 체중을 3~4일 주기로 측정하였고, 장기의 무게는 실험 종료 후 mouse를 희생시킨 후 비장, 췌장, 심장, 간, 신장을 적출하여 측정하였고, 적출 후 장기형태를 육안으로 관찰하였다.
- 모발의 성장과 관련된 cytokine인 IGF-1, VEGF의 단백질 발현을 관찰하여 HRHDT와 MTS가 모낭 및 모발의 단백질 발현까지 미치는 영향을 확인하였다.
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4. 미세 다륜침
미세다륜침(Microneedle Therapy System, MTS)은 Derma-Q (Dongbang Medi-Care Inc, Korea) 0.2㎜를 사용하여 단독 또는 HRHDT 도포와 병행하여 제모 부위에 상-하 방향으로 왕복 2회 롤링하였으며, MTS에 의해 발생하는 microscopic channel을 이용하여 HRHDT의 흡수율을 높이기 위해 사용하였다.
- 시료와 MTS 처치를 시작한 날을 실험 1일째로 정하여 피부에서 일어나는 발모와 관련된 특징들을 관찰하면서 디지털카메라를 이용하여 촬영하였고, 핀셋을 사용하여 털을 뽑아 길이를 측정하였으며, 더욱 세밀한 관찰을 위하여 Folliscope (Lead M, Korea)를 이용하여 모낭이 형성된 부위와 발모부위를 촬영함으로써 모발의 밀도와 굵기를 관찰하였다.
- 실험군은 제모 후 생리식염수를 도포한 대조군(CON), 3% minoxidil 도포군(MXD), MTS 처치군(MTS) 및 HRHDT와 MTS 처치군(HRHDT+MTS)으로 나누었고, 한 군에 3마리씩 배정하였다.
- 실험그룹은 CON군, MXD군, MTS군, HRHDT+MTS군 총 4개 그룹으로 나누어 한 개 그룹당 3마리씩 실험하였다. CON군은 생리식염수를, MXD군은 3% Minoxidil을 각각 100㎕씩, MTS군은 Derma-Q를 사용하여 2회 롤링하였으며, HRHDT+MTS군은 HRHDT을 100㎕씩 도포한 후 Derma-Q로 왕복 2회 롤링하여 약의 흡수를 촉진시켰으며 주 2회씩, 17일간 진행하였다.
대상 데이터
- Louis, MO, USA)로부터, RT-PCR kit (one-step RT-PCR premix kit)는 Intron Biotechnology, Inc. (Sungnam, Korea)로부터, insulin-like growth factor type 1 (IGF-1), vascular endothelial growth factor (VEGF), prolactin (PRL), placenta lactogen (PL) primer는 Bioneer (Daejeon, Korea)로 부터, VEGF와 IGF-1 primary antibody는 Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA)로부터, goat anti-mouse IgG (HRP)-conjugated secondary antibody는 Enzo Life Sciences, Inc (Farmingdale, NY, USA)로부터, nitrocellulose membrane은 Bio-RAD Laboratories, Inc (Munich, Germany), supersignal west pico trial kit는 Thermo Scientific (Meridian, Rockford, USA)로부터, paraformaldehyde와 ammonia solution은 Samchun Pure Chemical (Pyeongtaek, Korea)로부터, chromium potassium sulfate는 Kanto Chemical (Tokyo, Japan)로부터 구입하여 사용하였다.
- 이러한 효능을 이용하여 탈모환자 중 상열감 및 두피열감을 느끼는 경우, 지루피부염과 같이 소양감이 있는 경우, 두피의 발적이 있는 경우에 응용해 볼 수 있을 것이다. 본 실험에 사용된 HRHDT는 대한약침학회에서 조제하여 실온에서 냉각시킨 뒤 감압필터를 사용하여 불순물을 제거하고 고압·멸균하여 20℃에 보관하였다가 실험직전 사용하였다.
- 본 실험에 사용된 황련해독탕(Hwangryeonhaedoktang, HRHDT) 약침액은 대한약침학회에서 조제하여 사용하였다. 실온에서 냉각시킨 뒤 감압필터를 사용하여 불순물을 제거하고 고압·멸균하여 20℃에 보관하였다가 실험직전 사용하였다.
- 실험동물은 6주령의 C57BL/6N male mouse를 (주)Samtako (Osan, Korea)로부터 구입하여, 온도 23±3℃, 상대습도 50±10%, 12시간 조명주기 조건하에서 식이와 식수를 자유롭게 섭취하도록 하였으며 7일간의 적응기간을 거친 후 실험에 사용하였다. 실험동물의 관리와 모든 실험과정은 Guide for the care and use of laboratory animals (8th edition, The National Academies Press, Washington, D.
이론/모형
- 실험동물은 6주령의 C57BL/6N male mouse를 (주)Samtako (Osan, Korea)로부터 구입하여, 온도 23±3℃, 상대습도 50±10%, 12시간 조명주기 조건하에서 식이와 식수를 자유롭게 섭취하도록 하였으며 7일간의 적응기간을 거친 후 실험에 사용하였다. 실험동물의 관리와 모든 실험과정은 Guide for the care and use of laboratory animals (8th edition, The National Academies Press, Washington, D.C.)에 준하여 시행하였다.
성능/효과
- HRHDT와 MTS의 발모효과에 대한 실험 결과 육안 및 현미경으로 관찰한 결과 모발성장을 촉진하였고, 모발의 밀도, 굵기 및 길이를 증가시키는 효과를 나타내었으며, 피부조직에서 모낭과 모발의 성장과 관련된 인자의 유전자 및 단백질 발현을 증가시켰다
- MTS와 HRHDT의 발모효과를 알아보기 위한 실험에서 육안적으로 관찰한 결과 MXD군, HRHDT+MTS군, MTS군, CON군 순으로 발모현상이 촉진되는 것을 관찰하였다. MTS와 HRHDT의 발모효과를 알아보기 위해 제모한 mouse에서 Folliscope를 이용해 모발의 밀도, 굵기 및 길이를 관찰하였다.
- 제모 후 7일, 14일째 IGF-1, VEGF, PRL, PL의 유전자 발현과 IGF-1, VEGF의 단백질 발현에서 MXD군, HRHDT+MTS군, MTS군 순으로 발현이 증가하는 것을 관찰하였다. MTS의 단독사용보다는 HRHDT와 MTS의 병용이 MXD와 함께 유의한 결과를 보였으므로, HRHDT가 발모를 촉진시키는 효능이 있음을 확인하였다.
- 이러한 점으로 볼 때, MTS만으로도 피부 진피층에 상처를 만들어 자연적 상처치유 작용을 유도하여 콜라겐의 생성을 촉진하고 발모에 영향을 미치는 것을 알 수 있다42). 또한 MTS군에 비해 HRHDT+MTS군에서 육안적인 관찰과 Folliscope를 이용한 모발 밀도, 굵기 및 길이의 관찰에 있어 HRHDT가 MTS의 단독사용보다 발모를 촉진시키는 효능이 있음을 확인하였다.
- 연구 결과로부터 C57BL/6N 마우스 탈모모델에서 HRHDT와 MTS 처치가 모발성장을 촉진하는 효과가 있음을 확인할 수 있었다
- 반복되는 스트레스 노출은 체중증가를 유의하게 저하시켜 신체발달을 지연시킬 수 있으며43), 약물의 독성에 대한 해독작용으로 인하여 장기무게의 변화를 초래할 수 있는데44) 체중과 장기무게를 측정한 결과 각 실험군 간의 유의한 차이는 없었고, 장기형태를 육안으로 관찰한 결과 이상이 없었다. 이상의 결과로 볼 때 MXD, MTS, HRHDT의 자극이 스트레스로 작용하지 않고, 독성을 띄지 않음을 알 수 있었다. 다만 실험기간이 짧았던 점을 감안해 볼 때, 장기간 사용이 신체발달 및 해독작용에 어떠한 영향을 미치는지는 추가적인 연구가 필요할 것으로 보인다.
- 제모 후 7일, 14일째 IGF-1, VEGF, PRL, PL의 유전자 발현과 IGF-1, VEGF의 단백질 발현에서 MXD군, HRHDT+MTS군, MTS군 순으로 발현이 증가하는 것을 관찰하였다. MTS의 단독사용보다는 HRHDT와 MTS의 병용이 MXD와 함께 유의한 결과를 보였으므로, HRHDT가 발모를 촉진시키는 효능이 있음을 확인하였다.
후속연구
- 그러나 C57BL/6N 마우스 탈모모델이 열증으로 인한 모발탈모가 아니라는 점이 아쉬우며, 이런 탈모형태에 대한 추가연구가 이루어져야 할 것이다
- 이상의 결과로 볼 때 MXD, MTS, HRHDT의 자극이 스트레스로 작용하지 않고, 독성을 띄지 않음을 알 수 있었다. 다만 실험기간이 짧았던 점을 감안해 볼 때, 장기간 사용이 신체발달 및 해독작용에 어떠한 영향을 미치는지는 추가적인 연구가 필요할 것으로 보인다.
- 또한 본 실험의 기간이 짧은 점을 고려할 때 3개월 이상의 장기치료에서 어떠한 효과를 나타내는지에 대한 연구관찰이 더 필요할 것으로 생각된다.
- 이러한 효능을 이용하여 탈모환자 중 상열감 및 두피열감을 느끼는 경우, 지루피부염과 같이 소양감이 있는 경우, 두피의 발적이 있는 경우에 응용해 볼 수 있을 것이다. 본 실험에 사용된 HRHDT는 대한약침학회에서 조제하여 실온에서 냉각시킨 뒤 감압필터를 사용하여 불순물을 제거하고 고압·멸균하여 20℃에 보관하였다가 실험직전 사용하였다.
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