본 연구는 고욤잎 유래 EA 분획물의 항산화 및 항가려움 활성을 조사하였다. EA 분획물은 DPPH 라디칼 소거 활성이 수용성 및 MeOH 추출물보다 매우 우수하였을 뿐만 아니라 합성 항산화제인 BHT보다 현저히 높았다. 또한 ABTS 라디칼 소거 활성도 수용성과 MeOH 추출물뿐만 아니라 Trolox보다 현저히 높았다. 본 연구에 사용된 EA 분획물과 수용성 및 MeOH 추출물은 세포에 대한 독성이 없었다. 또한 EA 분획물은 농도에 의존적으로 활성화된 비만세포로부터 히스타민 방출 억제와 TNF-${\alpha}$ 생성 억제 효과가 있었으며, 같은 농도에서 수용성 및 MeOH 추출물보다 억제 효과가 우수하였다. 더욱이 EA 분획물은 농도 의존적으로 compound 48/80으로 유도된 가려움증을 효과적으로 억제하는 활성이 있었고, 같은 농도에서 항가려움 약제로 알려진 azelastine보다는 그 효과가 낮았지만 수용성 및 MeOH 추출물뿐만 아니라 methysergide보다 우수한 항가려움 효과를 발휘하였다. 앞으로 이러한 항가려움 효과에 대한 EA분획물의 분자적 작용기전을 규명해야 할 필요가 있으며, 고욤잎 유래 EA 분획물은 강력한 항산화 및 항가려움 활성을 지닌 우수한 소재라 사료된다.
본 연구는 고욤잎 유래 EA 분획물의 항산화 및 항가려움 활성을 조사하였다. EA 분획물은 DPPH 라디칼 소거 활성이 수용성 및 MeOH 추출물보다 매우 우수하였을 뿐만 아니라 합성 항산화제인 BHT보다 현저히 높았다. 또한 ABTS 라디칼 소거 활성도 수용성과 MeOH 추출물뿐만 아니라 Trolox보다 현저히 높았다. 본 연구에 사용된 EA 분획물과 수용성 및 MeOH 추출물은 세포에 대한 독성이 없었다. 또한 EA 분획물은 농도에 의존적으로 활성화된 비만세포로부터 히스타민 방출 억제와 TNF-${\alpha}$ 생성 억제 효과가 있었으며, 같은 농도에서 수용성 및 MeOH 추출물보다 억제 효과가 우수하였다. 더욱이 EA 분획물은 농도 의존적으로 compound 48/80으로 유도된 가려움증을 효과적으로 억제하는 활성이 있었고, 같은 농도에서 항가려움 약제로 알려진 azelastine보다는 그 효과가 낮았지만 수용성 및 MeOH 추출물뿐만 아니라 methysergide보다 우수한 항가려움 효과를 발휘하였다. 앞으로 이러한 항가려움 효과에 대한 EA분획물의 분자적 작용기전을 규명해야 할 필요가 있으며, 고욤잎 유래 EA 분획물은 강력한 항산화 및 항가려움 활성을 지닌 우수한 소재라 사료된다.
Diospyros lotus has been cultivated for its edible fruits, which are considered to have medicinal importance. The aim of this study was to evaluate the antioxidant and antipruritic activities of water-soluble, methanol extract, and ethyl acetate (EA) fractions from D. lotus leaves. The EA fraction s...
Diospyros lotus has been cultivated for its edible fruits, which are considered to have medicinal importance. The aim of this study was to evaluate the antioxidant and antipruritic activities of water-soluble, methanol extract, and ethyl acetate (EA) fractions from D. lotus leaves. The EA fraction showed the lowest $IC_{50}$ vale (DPPH: $5.3{\mu}g/mL$, ABTS: $53.8{\mu}g/mL$). Therefore, we further investigated anti-inflammatory and antipruritic effects of the EA fraction. TNF-${\alpha}$ production increased by PMA plus A23187 treatment was significantly inhibited by the EA fraction in a dose-dependent manner. The EA fraction also inhibited histamine release from rat peritoneal mast cells stimulated by compound 48/80, which promotes histamine release. Furthermore, EA fraction had inhibitory effects on scratching behavior induced by compound 48/80 in Balb/c mice. These results suggest that the EA fraction from D. lotus leaves has potential as ameliorative agent against oxidative stress and pruritus-related disease.
Diospyros lotus has been cultivated for its edible fruits, which are considered to have medicinal importance. The aim of this study was to evaluate the antioxidant and antipruritic activities of water-soluble, methanol extract, and ethyl acetate (EA) fractions from D. lotus leaves. The EA fraction showed the lowest $IC_{50}$ vale (DPPH: $5.3{\mu}g/mL$, ABTS: $53.8{\mu}g/mL$). Therefore, we further investigated anti-inflammatory and antipruritic effects of the EA fraction. TNF-${\alpha}$ production increased by PMA plus A23187 treatment was significantly inhibited by the EA fraction in a dose-dependent manner. The EA fraction also inhibited histamine release from rat peritoneal mast cells stimulated by compound 48/80, which promotes histamine release. Furthermore, EA fraction had inhibitory effects on scratching behavior induced by compound 48/80 in Balb/c mice. These results suggest that the EA fraction from D. lotus leaves has potential as ameliorative agent against oxidative stress and pruritus-related disease.
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문제 정의
그 후 각 추출물 및 분획물을 대상으로 phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)와 calcium ionophore A23187(A23187)로 활성화된 랫트 복강 비만세포(rat peritoneal mast cells, RPMCs)에서 TNFα 생성 및 히스타민 방출량을 조사한 후 compound 48/80으로 유도한 가려움증 억제를 조사한 결과 매우 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
본 연구는 고욤잎 유래 EA 분획물이 피부 가려움증 억제에 미치는 영향을 알아보기 위하여 EA 분획물(2.5∼10 mg/ kg)과 수용성 및 MeOH 추출물(각각 10 mg/kg)을 Balb/c 마우스에 경구 투여하고 1시간 후에 가려움 유발 물질을 마우스 등의 양쪽 어깨 높이 사이에 피하 주사하였다.
본 연구는 고욤잎 유래 EA 분획물의 항산화 및 항가려움 활성을 조사하였다. EA 분획물은 DPPH 라디칼 소거 활성이 수용성 및 MeOH 추출물보다 매우 우수하였을 뿐만 아니라 합성 항산화제인 BHT보다 현저히 높았다.
제안 방법
본 연구는 고욤잎으로부터 수용성 추출물과 메탄올 추출 물을 얻고 메탄올 추출물에서 ethyl acetate(EA) 분획물을 얻어 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH) 및 2,2'- azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)(ABTS) 라디칼 소거 활성을 조사하였다.
사육환경은 낮과 밤의 주기를 12시간씩 하였고, 온도(20∼22℃)와 습도(50 ∼60%)는 일정하게 유지하였으며, 전주대학교 실험동물위원회의 규정에 준하여 실험하였다.
각 추출물과 Trolox의 최종 농도가 3.91, 7.81, 15.63, 31.25, 62.5, 125, 250, 500 및 1,000 μg/mL가 되도록 정량하여 50 μL에 준비된 ABTS 용액 950 μL를 첨가 하여 암소에서 30분간 반응시킨 후 732 nm에서 흡광도를 측정하였다.
시료를 MeOH로 녹여 최종 농도가 3.91, 7.81, 15.63,31.25, 62.5, 125, 250, 500 및 1,000 μg/mL가 되도록 정량하여 96 well plate에 각 시료를 100 μL 주입하고, 동시에 0.3 mM DPPH 100 μL를 넣어 총량이 200 μL가 되도록 하였다.
또한 건조된 고욤잎 600 g을 정량하여 메탄올 4,000 mL를 주입하고 7일간 방치한 다음 추출물은 0.45 μm 필터를 사용하여 여과하고 감압에 의해 유기용매를 제거한 뒤 최종적으로 동결건조 하여 70.3 g을 얻은 후 50 g을 취하여 ethyl acetate 분획물을 약 650 mg 얻고 -20℃에서 보관하면서 실험에 사용하였다.
EA 분획물(25∼100 μg/mL), 수용성 또는 MeOH 추출물(각각 100 μg/mL)은 RPMCs(5×105)에 10분 또는 2시간 동안 전 처리한 후 compound 48/80이나 PMA와 A23187로 자극하여 히스타민과 전염증성 사이토카인 측정에 사용하였다.
그 후 대조군은 생리식염수를 경구 투여하였고, 실험군은 EA 분획물 (2.5∼10 mg/kg), 수용성 또는 MeOH 추출물(각각 10 mg/ kg), 항가려움증 약제로 알려진 methysergide(10 mg/kg), azelastine(10 mg/kg)을 경구 투여하고, 60분 후에 compound 48/80(50 μg/site)을 100 μL씩 마우스 등의 양쪽 어깨 높이 사이에 피하 주사하였다.
즉 세포 상층액 또는 5배 희석 혈청 100 μL를 각각의 항체가 코팅된 plate에 주입하고 반응시킨 후 잘 세척한 다음 horseradish peroxidase가 부착된 2차 항체를 주입하고 반응시킨 후 발색 기질을 주입하고 반응시켜 ELISA reader로 측정하였으며, 각 물질에 대한 정량은 각각의 물질을 농도별로 처리하여 반응시켜 표준곡선을 작성하고 세포 상층액에 함유된 TNF-α의 양을 계산하였다.
RPMCs로부터 사이토카인의 측정은 EA 분획물(25∼ 100 μg/mL), 수용성 또는 MeOH 추출물(각각 100 μg/mL)을 2시간 동안 전 처리한 후 PMA(20 nM)와 A23187(1 μM) 로 동시에 자극한 다음 12시간 후에 세포 상층액으로부터 TNF-α를 측정하였다.
즉 RPMCs(5×105/mL)를 24 well plate에 접종하고 상기와 같이 EA 분획물(25∼100 μg/mL), 수용성 또는 MeOH 추출물(각각 100 μg/mL)을 처리한 후에 PMA(20 nM)와 A23187(1 μM)을 동시에 자극한 후 12시간 후에 MTT 용액(5 mg/mL)을 주입하고 4시간 동안 37℃에서 방치한 후 상층액을 제거하고 formazan 산물을 demethyl sulfate로 용해하여 96 well plate로 옮겨 540 nm ELISA reader로 흡광도를 측정하였다.
즉 anti-histamine antibody를 활용하여 상기와 같이 얻은 상층액 시료에 반응시키고, anti-histamine antibody에 특이적으로 작용하는 기질효소가 부착된 2차 항체를 주입한 후 발색시켜 R&D Systems Inc.가 제공하는 방법에 따라 ELISA reader(Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)로 측정하였으며, 히스타민의 정량은 농도 별로 히스타민을 처리하여 반응시킨 후 표준곡선을 작성하여 계산하였다.
고욤잎 유래 EA 분획물의 DPPH와 ABTS 라디칼 소거 활성을 알아보기 위하여 수용성 추출물과 메탄올 추출물 그리고 합성항산화제로 알려진 BHT 또는 Trolox와 비교하였다. 그 결과 Fig.
고욤잎 EA 분획물의 농도에 따른 세포 생존율에 미치는 영향을 조사하기 위하여, RPMCs을 활성화하기 위해 compound 48/80(0.5 μg/mL)을 처리하기 전에 고욤 EA 분획물(25∼100 μg/mL), 수용성 추출물 또는 MeOH 추출물을 2시간 동안 처리하여 MTT assay법으로 세포생존율을 비교 조사하였다.
한편 본 연구는 고욤잎 유래 EA 분획물이 가려움증 유발의 핵심 물질인 히스타민 방출에 대한 억제 효과를 알아보기 위하여 RPMCs를 접종하고 EA 분획물(25∼100 μg/mL)을 주입하고 37℃에서 10분간 전 처리한 다음 compound 48/ 80(0.5 μg/mL)으로 자극하여 히스타민의 양을 측정하였다.
본 연구는 고욤잎 유래 EA 분획물이 활성화된 RPMCs의 전염증성 사이토카인인 TNF-α의 생성 억제에 대한 효과를 알아보기 위하여 RPMCs를 접종하고 EA 분획물(25∼100μg/mL)을 2시간 전 처리한 다음 PMA와 A23187을 동시에 처리하고 12시간 후 배양액에 축척된 TNF-α 양을 측정하였다.
대상 데이터
특별히 본 실험 목적에 따라 충분한 세포를 확보하기 위해서 5∼10마리 랫트에서 얻은 RPMCs를 혼합하여 사용하였다.
고욤잎은 전라북도 진안군 부귀면 수항리 신기마을에서 2013년 7월 10일에 채취한 후 우석대학교 한의과대학 본초 방제학교실 김홍준 교수님으로부터 동정을 받았다. 고욤잎 표본(#2013-07-10)은 전주대학교 의과학대학 보건관리 연구실에 보관하고 있다.
무균환경에서 사육된 7주령의 수컷 Balb/c 마우스와 10 주령의 Sprague Dawley 랫트는 중앙실험동물(주)(Seoul, Korea)에서 구입하였고, 사료와 물을 충분히 공급하면서 1 주일간 순화시킨 후 실험에 사용하였다. 사육환경은 낮과 밤의 주기를 12시간씩 하였고, 온도(20∼22℃)와 습도(50 ∼60%)는 일정하게 유지하였으며, 전주대학교 실험동물위원회의 규정에 준하여 실험하였다.
DPPH 라디칼 소거 활성은 Blois(13)의 방법으로 측정하 였다. 시료를 MeOH로 녹여 최종 농도가 3.
ABTS 라디칼 소거능은 Re 등(14)의 방법에 의하여 측정 하였다. ABTS 7.
RPMCs의 분리는 Martynova 등(15)의 방법에 따라 분리 하였다. 즉 에테르(ether)로 마취시킨 다음 calcium-free HEPES-Tyrode buffer(10 mM Hepes, 113 mM NaCl, 4.
RPMCs의 분리는 Martynova 등(15)의 방법에 따라 분리 하였다. 즉 에테르(ether)로 마취시킨 다음 calcium-free HEPES-Tyrode buffer(10 mM Hepes, 113 mM NaCl, 4.7 mM KCl, 2.13 mM MgCl2, 0.6 mM NaH2PO4, 10 mM glucose, pH 7.4) 10 mL를 복강에 주입시켜 약 90초간 복강을 부드럽게 마사지 한 후 복강을 주의 깊게 열어 Pasteur pipette을 사용하여 세포부유액을 얻어 percoll density gradient법으로 RPMCs를 얻었다. 특별히 본 실험 목적에 따라 충분한 세포를 확보하기 위해서 5∼10마리 랫트에서 얻은 RPMCs를 혼합하여 사용하였다.
RPMCs 세포 생존율은 MTT assay 방법에 의해 측정하였다. 즉 RPMCs(5×105/mL)를 24 well plate에 접종하고 상기와 같이 EA 분획물(25∼100 μg/mL), 수용성 또는 MeOH 추출물(각각 100 μg/mL)을 처리한 후에 PMA(20 nM)와 A23187(1 μM)을 동시에 자극한 후 12시간 후에 MTT 용액(5 mg/mL)을 주입하고 4시간 동안 37℃에서 방치한 후 상층액을 제거하고 formazan 산물을 demethyl sulfate로 용해하여 96 well plate로 옮겨 540 nm ELISA reader로 흡광도를 측정하였다.
5∼10 mg/kg), 수용성 또는 MeOH 추출물(각각 10 mg/ kg), 항가려움증 약제로 알려진 methysergide(10 mg/kg), azelastine(10 mg/kg)을 경구 투여하고, 60분 후에 compound 48/80(50 μg/site)을 100 μL씩 마우스 등의 양쪽 어깨 높이 사이에 피하 주사하였다. 가려움증 유발 물질을 주사한 마우스는 곧바로 Mihara 등(16)의 방법을 따라 micro-camera(ONCCTV, 서울, 대한민국)를 사용하여 60분 동안 녹화하였으며, 뒷발로 가려움증 유발 물질이 주입된 부위를 긁는 횟수를 이중맹검법으로 계수하여 평가하였다. 각 유발 물질에 따른 실험은 각각 다른 날에 진행되었으며 매 실험에 사용된 마우스는 1회 사용되었다.
5 μg/mL). Histamine assay was performed by ELISA method on supernatant from RPMCs. A: effect of a various concentration of EA fraction, B: effect of water soluble extract (WS), MeOH extract and EA fraction at the same concentration (100 μg/mL).
RPMCs cells (5×10 5 /mL) were pre-treated with or without each extraction and EA fraction at indicated concentrations for 2 hr, and then stimulated with or without PMA (30 ng/mL) plus A23187 (10 μM) for 12 hr. Cytokine concentrations were measured in cell supernatants using the ELISA method. A: effect of a various concentration of EA fraction, B: effect of water soluble extract (WS), MeOH extract and EA fraction at the same concentration (100 μg/mL).
성능/효과
더불어 EA 분획물의 DPPH 라디칼 소거 활성에 대한 IC50은 5.3 μg/mL로 수용성 수출물 (37.9 μg/mL), MeOH 추출물(41.2 μg/mL)과 BHT(50.3 μg/ mL)보다 약 5∼7배 낮은 농도에서 그 활성을 보여주었다.
수용성 추출물과 MeOH 추출물의 경우도 31.3 μg/mL 이하의 저농도에서는 BHT와 DPPH 라디칼 소거 활성이 유사하였지만, 그 이상의 농도에서는 BHT보다 DPPH 라디칼 소거 활성이 우수하였다.
고욤잎 유래 EA 분획물의 DPPH와 ABTS 라디칼 소거 활성을 알아보기 위하여 수용성 추출물과 메탄올 추출물 그리고 합성항산화제로 알려진 BHT 또는 Trolox와 비교하였다. 그 결과 Fig. 1A에서 보여준 바와 같이 고욤잎 유래 EA 분획물은 모든 농도에서 수용성 추출물과 MeOH 추출물뿐만 아니라 BHT보다 DPPH 라디칼 소거 활성이 매우 우수하였다. 수용성 추출물과 MeOH 추출물의 경우도 31.
1B에서 나타낸 바와 같이 ABTS 라다칼 소거 활성의 경우에서도 고욤잎 유래 EA 분획물은 모든 농도에서 수용성 추출물과 MeOH 추출물뿐만 아니라 Trolox보다 ABTS 라디칼 소거 활성이 매우 우수하였다. 수용성 추출물과 MeOH 추출물은 Trolox보다 각 농도에서 ABTS 라디칼 농도가 낮았지만 농도가 증가할수록 그 활성이 증가하는 효과가 있었다. EA 분획물의 ABTS 라디칼 소거 활성에 대한 IC50은 53.
그 결과 Fig. 3과 같이 RPMCs를 compound 48/80으로 자극할 경우 히스타민 방출량은 63.49±5.67 ng/mL로 정상 대조군(10.17±1.40 ng/mL)에 비해서 현저히 증가하였다(P<0.001).
5 μg/mL)을 처리하기 전에 고욤 EA 분획물(25∼100 μg/mL), 수용성 추출물 또는 MeOH 추출물을 2시간 동안 처리하여 MTT assay법으로 세포생존율을 비교 조사하였다. 그 결과 Fig. 2에서 보여준 바와 같이 compound 48/80을 처리한 대조군은 정상군에 비해 세포독성이 있었지만, 사용된 EA 분획물의 모든 농도에서 정상군과 유사한 세포생존율을 보였고, 더불어 수용성 추출물과 MeOH 추출물에서도 유사한 결과를 얻었다(Fig. 2). 따라서 본 연구에서 사용한 모든 EA 분획물과 수용성 및 MeOH 추출물은 세포독성이 없었다.
2). 따라서 본 연구에서 사용한 모든 EA 분획물과 수용성 및 MeOH 추출물은 세포독성이 없었다.
또한 본 연구는 EA 분획물과 고욤잎 수용성 및 MeOH 추출물의 히스타민 방출 억제에 대한 효과를 비교하기 위해서 100 μg/mL 농도로 고정하여 실험한 결과 Fig. 3B에서 나타낸 바와 같이 고욤잎 수용성 추출물과 MeOH 추출물은 각각 48.97±3.70 ng/mL와 46.87±3.54 ng/mL로 유사하게 히스타민 방출 억제 효과가 있었고(P<0.05), EA 분획물은 고욤잎 수용성 및 MeOH 추출물보다 히스타민 방출 억제 효과가 우수하였다.
이러한 비만세포에서 분비되는 물질로 인해 유발되는 가려움증은 아토피 피부염 등 알레르기성 피부질환 환자에서 흔히 발견되는 가려움증과 유사한 증상을 유발한다. 그러므로 저자들은 전 연구에서 고욤잎 추출물을 전 처리할 경우 compound 48/80으로 자극하였을 때 히스타민을 억제하는 효과를 규명하여 보고한 바 있으며(11), 본 연구에서는 고욤잎 EA 분획물의 히스타민 방출 억제 효과에 있어 우수한 소재임을 확인하였다.
더불어 본 연구는 EA 분획물과 고욤잎 수용성 및 MeOH 추출물의 TNF-α 생성 억제에 대한 효과를 비교하기 위해서 100 μg/mL 농도로 고정하여 실험한 결과 Fig. 4B에서 나타낸 바와 같이 고욤잎 수용성 추출물과 MeOH 추출물은 각각 430.45±31.87 ng/mL와 450.45± 27.74 ng/mL로 유사하게 TNF-α 생성 억제 효과가 있었고 (P<0.05), EA 분획물은 고욤잎 수용성 및 MeOH 추출물보다 TNF-α 생성 억제 효과가 우수하였다(P<0.001).
항가려움증 효과가 우수한 약물로 알려진 azelastine(177.5± 55.7회/60 min) 및 methysergide와 같은 농도로 비교하였을 때 EA 분획물의 효과는 azelastine보다 낮았을지라도 methysergide보다는 효과가 높았다(Fig. 5B).
그러나 EA 분획물을 처리한 실험군은 compound 48/80이 유도하는 가려움증을 농도에 의존적으로 억제하는 효과가 있었다.
그 결과 Fig. 5와 같이 compound 48/80을 피하에 주입한 대조군은 255.3±39.5회/60 min으로 정상 대조군(32.3±4.9회/60 min)에 비해서 긁는 횟수가 현저히 증가하였다(P<0.001).
그러므로 염증반응을 완화하기 위해서는 TNF-α를 효과적으로 제어할 수 있는 물질이 필요한 바, 본 고욤잎 유래 EA 분획물은 이러한 관점에서 염증반응을 제어할 수 있는 효과적인 물질이라 사료된다.
본 연구는 고욤잎 유래 EA 분획물의 항산화 및 항가려움 활성을 조사하였다. EA 분획물은 DPPH 라디칼 소거 활성이 수용성 및 MeOH 추출물보다 매우 우수하였을 뿐만 아니라 합성 항산화제인 BHT보다 현저히 높았다. 또한 ABTS 라디칼 소거 활성도 수용성과 MeOH 추출물뿐만 아니라 Trolox보다 현저히 높았다.
EA 분획물은 DPPH 라디칼 소거 활성이 수용성 및 MeOH 추출물보다 매우 우수하였을 뿐만 아니라 합성 항산화제인 BHT보다 현저히 높았다. 또한 ABTS 라디칼 소거 활성도 수용성과 MeOH 추출물뿐만 아니라 Trolox보다 현저히 높았다. 본 연구에 사용된 EA 분획물과 수용성 및 MeOH 추출물은 세포에 대한 독성이 없었다.
또한 EA 분획물은 농도에 의존적으로 활성화된 비만세포로부터 히스타민 방출 억제와 TNF-α 생성 억제 효과가 있었으며, 같은 농도에서 수용성 및 MeOH 추출물보다 억제 효과가 우수하였다.
또한 EA 분획물은 농도에 의존적으로 활성화된 비만세포로부터 히스타민 방출 억제와 TNF-α 생성 억제 효과가 있었으며, 같은 농도에서 수용성 및 MeOH 추출물보다 억제 효과가 우수하였다. 더욱이 EA 분획물은 농도 의존적으로 compound 48/80으로 유도된 가려움증을 효과적으로 억제하는 활성이 있었고, 같은 농도에서 항가려움 약제로 알려진 azelastine보다는 그 효과가 낮았지만 수용성 및 MeOH 추출물뿐만 아니라 methysergide 보다 우수한 항가려움 효과를 발휘하였다. 앞으로 이러한 항가려움 효과에 대한 EA 분획물의 분자적 작용기전을 규명해야 할 필요가 있으며, 고욤잎 유래 EA 분획물은 강력한 항산화 및 항가려움 활성을 지닌 우수한 소재라 사료된다.
그 결과 Fig. 4A와 같이 PMA와 A23187을 처리한 대조군은 정상 대조군에 비해서 TNF-α의 생성이 594.51 ± 28.99 pg/mL로 현저히 증가(P<0.001)한 반면, EA 분획물을 처리한 실험군은 농도 의존적으로 TNF-α 생성이 억제되었으며 모든 농도에서 유의한 효과가 있었다(각각 P<0.05, P<0.01, P<0.001).
후속연구
또한 methysergide도 compound 48/80 유도 가려움증을 완화시킬 수 있는 약물로 잘 알려져 있다(21). 앞으로 EA 분획물을 대상으로 가려움 억제에 대한 분자적 기전을 규명할 필요가 있으며, 본 연구 결과 고욤잎 유래 EA 분획물의 우수한 항가려움증 효과는 아토피 피부질환과 같은 피부 가려움증에 사용될 수 있는 매우 우수한 소재라 사료된다.
더욱이 EA 분획물은 농도 의존적으로 compound 48/80으로 유도된 가려움증을 효과적으로 억제하는 활성이 있었고, 같은 농도에서 항가려움 약제로 알려진 azelastine보다는 그 효과가 낮았지만 수용성 및 MeOH 추출물뿐만 아니라 methysergide 보다 우수한 항가려움 효과를 발휘하였다. 앞으로 이러한 항가려움 효과에 대한 EA 분획물의 분자적 작용기전을 규명해야 할 필요가 있으며, 고욤잎 유래 EA 분획물은 강력한 항산화 및 항가려움 활성을 지닌 우수한 소재라 사료된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
가려움증 유도 물질은?
아토피 피부염(atopic dermatitis)은 만성 피부염증과 함께 심한 가려움증(pruritus)을 동반한다(1,2). 긁고 싶은 감정을 불러일으키는 가려움증은 히스타민과 같은 가려움 매개 물질에 의해서 유도되는데, 정상인의 경우 긁으면 그 증상이 쉽게 완화되지만 아토피 환자의 경우 긁으면 긁을수록 더욱 긁고 싶은 감정이 형성되어 심하게 긁게 된다(3). 그러 므로 아토피 환자의 경우 긁는 행동으로 인해 피부장벽이 붕괴되면서 2차 감염을 유발하여 염증이 더욱 악화된다 (1-3).
아토피 피부염에 동반되는 것은?
아토피 피부염(atopic dermatitis)은 만성 피부염증과 함께 심한 가려움증(pruritus)을 동반한다(1,2). 긁고 싶은 감정을 불러일으키는 가려움증은 히스타민과 같은 가려움 매개 물질에 의해서 유도되는데, 정상인의 경우 긁으면 그 증상이 쉽게 완화되지만 아토피 환자의 경우 긁으면 긁을수록 더욱 긁고 싶은 감정이 형성되어 심하게 긁게 된다(3).
아토피 환자에게 가려움증 억제가 요구되는 이유는 무엇인가?
긁고 싶은 감정을 불러일으키는 가려움증은 히스타민과 같은 가려움 매개 물질에 의해서 유도되는데, 정상인의 경우 긁으면 그 증상이 쉽게 완화되지만 아토피 환자의 경우 긁으면 긁을수록 더욱 긁고 싶은 감정이 형성되어 심하게 긁게 된다(3). 그러 므로 아토피 환자의 경우 긁는 행동으로 인해 피부장벽이 붕괴되면서 2차 감염을 유발하여 염증이 더욱 악화된다 (1-3). 아토피 피부염은 일시적으로 완화될 수 있지만 환경및 식품 등 자극원에 의해서 재발되어 악화되며 악화와 완화가 반복되는 현상으로 그 원인은 아직까지 명확하게 알려지지 않았다(2). 이와 같이 아토피 피부염에 동반되는 염증은 과도한 면역세포 작용으로 인해서 tumor necrosis-α(TNFα)와 interleukin-1β(IL-1β) 등의 염증성 사이토카인과 하이드록시 라디칼(・OH), 슈퍼옥사이드 라디칼(・O2-), 과산화수소(H2O2) 등의 활성산소류(reactive oxygen species, ROS)를 대량 생산하기 때문에 주변 조직의 손상을 야기한 다(4,5). 그러므로 아토피 피부염과 같은 피부질환을 개선하기 위해서는 가려움증을 완화시키고 ROS를 효과적으로 제거할 수 있는 소재가 필요하다(6).
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