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문제 정의
- 따라서 본 연구는 육계사료 내 항생제 및 quercetin과 methylated quercetin (각각 20과 200 ppm), Vit E를 각각 20과 200 IU 급여한 육계의 생산성, 혈액 생화학적 성상, 면역 및 혈액 항산화 활성을 조사하기 위하여 수행하였다.
- 본 연구는 육계사료 내 quercetin의 첨가가 육계의 생산성, 혈액 생화학적 성상, 면역 및 혈액 항산화 활성에 미치는 영향을 조사하기 위하여 수행하였다. 공시계는 1일령 육계 수평아리(Ross × Ross 308) 320수를 선별하여 육계초기(0∼3주령)와 육계후기(3∼5주령)의 35일 동안 시험을 실시하였다.
제안 방법
- 혈액 500 µL에 10% butylated hydroxyanisol(BHA) 50 µL 및 thiobarbituric acid(TBA)/trichloroacetic acid(TCA) 혼합 용액 4 mL를 넣어 혼합하고, 이를 90℃ 항온수조에 넣어 15분 동안 반응시켜 냉각한 후, 원심분리(3,000 rpm × 10분)하여 상등액을 회수하고, 532 nm에서 흡광도로 측정하였다. 1,1,3,3- tetra-ethoxyprophane로 제조한 MDA 표준용액을 이용하여 작성한 표준곡선으로 혈액 내 MDA 함량을 결정하였다.
- Creatinine, 요소질소(BUN), total protein, albumin, globulin, albumin/globulin, aspartate aminotransferase(AST) 및 alanine aminotransferase(ALT) 분석은 자동생화학분석기(Hitachi 747, Japan)을 이용하여 실시하였다.
- SOD 유사 활성 측정은 Marklund and Marklund(1974)의 방법을 변형하여 측정하였다. 일정 농도로 희석된 시료 0.
- 시험설계는 8처리구를 처리구당 4반복, 반복당 10수씩으로 나누어 완전 임의 배치하였다(Table 1). 기초사료는 NRC(1994)에서 근거하여 옥수수-대두박 위주의 육계사료를 초기(CP 22%, ME 3,100 kcal/kg)와 후기(CP 20%, ME 3,150 kcal/kg)로 나누어 급여하였다(Table 2).
- 분석용 시료를 채취하기 위하여 시험 종료 35일령 후, 각 시험구당 평균 체중에 가까운 8수씩을 선정하여 도살하였다. 도살 전에 체중을 측정한 후 익하정맥에서 채혈을 하여 혈장을 분리하였다.
- 시험기간 중 체중과 사료 섭취량을 매주 오전 10시에 측정하였다. 사료 섭취량은 사료잔량을 측정하여 사료급여량에서 제하여 계산하였다. 사료 요구율은 섭취량에서 증체량을 나누어 계산하였다.
- 사료 섭취량은 사료잔량을 측정하여 사료급여량에서 제하여 계산하였다. 사료 요구율은 섭취량에서 증체량을 나누어 계산하였다.
- 사료는 자유급이를 하였으며, 음수는 니플을 통하여 자유롭게 마실 수 있게 하였다. 점등시간은 24시간 연속점등으로 하였으며, 시험기간 중 계사 내 평균온도는 입추 시에 34℃로 조절하였으며, 온도를 점점 낮추어 5주령에는 24℃로 조절하였다.
- 시험기간 중 체중과 사료 섭취량을 매주 오전 10시에 측정하였다. 사료 섭취량은 사료잔량을 측정하여 사료급여량에서 제하여 계산하였다.
- 시험설계는 8처리구(C(—), 대조군; C(+), 항생제 처리군; T1, 비타민 E 20 ppm 처리군; T2, 비타민 E 200 ppm 처리군; T3, quercetin 20 ppm; T4, quercetin 200 ppm; T5, methoxylated quercetin 20 ppm; T6, methoxylated quercetin 200 ppm)를 처리구당 4반복, 반복당 10수씩으로 나누어 완전임의 배치하였다.
- 본 시험에 이용된 공시계는 1일령 육계 수평아리 (Ross × Ross 308) 320수를 선별하여 육계초기(0∼3주령)와 육계후기(3∼5주령)의 35일 동안 시험을 실시하였다. 시험설계는 8처리구를 처리구당 4반복, 반복당 10수씩으로 나누어 완전 임의 배치하였다(Table 1). 기초사료는 NRC(1994)에서 근거하여 옥수수-대두박 위주의 육계사료를 초기(CP 22%, ME 3,100 kcal/kg)와 후기(CP 20%, ME 3,150 kcal/kg)로 나누어 급여하였다(Table 2).
- 건조한 양파 1 kg을 3 mm 이하로 파쇄한 후, 에탄올 1,000 mL를 가해 72시간 동안 침지시킨 후 추출물을 여과하였다. 이후 핵산(n-hexane)과 증류수 혼합액(1:1, v/v)으로 3회 분배 추출한 후, 핵산 층을 제거한 증류수 층은 chloroform, ethyl-acetate 및 부탄올과 1:1로 3회 분배 추출하였다. Quercetin은 다수의 수산화기를 포함하고 있기 때문에 생체 내에서 빠르게 분해되어 배설되며, 세포가 이동률이 낮아서, 메틸기로 치환함으로써 지용성을 증가시킨다(Jang et al.
- 혈액 내 지질과산화물인 malondialdehyde(MDA) 함량은 Buege and Aust(1978)의 방법을 수정하여 측정하였다. 혈액 500 µL에 10% butylated hydroxyanisol(BHA) 50 µL 및 thiobarbituric acid(TBA)/trichloroacetic acid(TCA) 혼합 용액 4 mL를 넣어 혼합하고, 이를 90℃ 항온수조에 넣어 15분 동안 반응시켜 냉각한 후, 원심분리(3,000 rpm × 10분)하여 상등액을 회수하고, 532 nm에서 흡광도로 측정하였다.
대상 데이터
- 공시계는 1일령 육계 수평아리(Ross × Ross 308) 320수를 선별하여 육계초기(0∼3주령)와 육계후기(3∼5주령)의 35일 동안 시험을 실시하였다.
- 본 시험에 이용된 공시계는 1일령 육계 수평아리 (Ross × Ross 308) 320수를 선별하여 육계초기(0∼3주령)와 육계후기(3∼5주령)의 35일 동안 시험을 실시하였다.
데이터처리
- 처리 간 생산 능력, 혈액 생화학 지표, 면역글로불린 및 혈액 지질과산화물의 함량에 대한 모든 자료의 통계 분석은 SAS 프로그램(SAS, 2002)의 GLM 분산분석을 이용하여 5% 수준에서 유의성을 검정하였으며, 처리평균간 비교는 Duncan의 다중검정방법(Duncan, 1955)을 이용하였다.
이론/모형
- 따라서 본 시험에서는 Lee et al.(2011)의 방법으로 quercetin을 methoxylation(메톡시화)한 methylated quercetin을 이용하였다.
- IgA, IgG 및 IgM은 ELISA assay 키트(BETHYL, Montgomery, TX, USA)를 이용하여 측정하였다. 측정을 위한 흡광도는 Microplate reader를 이용하여 470 nm에서 결정되었다.
성능/효과
- AST는 비타민 및 quercetin 처리구에서 유의적으로 감소하였으며(P<0.05), ALT는 quercetin 처리구에서 무항생제 처리구에 비해 감소하는 경향이었으나, 유의적인 차이는 없었다.
- Creatinine은 대조구(항생제 및 무항생제 첨가구)에 비해 유의적으로 감소하였으며, 특히 methylated quercetin 처리구에서 낮게 나타났다(P<0.05).
- IgA는 비타민 처리구와 quercetin 처리구에서 무항생제 처리구에 비해 유의적으로 낮았으며(P<0.05), 항생제 처리구와는 유의적인 차이가 없었다.
- 본 시험에서 이용된 육계의 혈액 항산화 활성은 Table 6에 나타내었다. SOD 유사 활성은 quercetin 처리구에서 무항생체 첨가구에 비해 유의적으로 높아졌으며, 특히 quercetin 200 ppm에서 22.08%로 유의적으로 높았다. Malondialdehyde 함량은 처리구간 유의적인 차이가 없었다.
- (1999)은 흰쥐의 사료에 quercetin 첨가를 하였을 때 혈중 IgA, IgG 및 IgM의 함량은 대조구와 유의적인 차이가 없다고 보고하였다. 그러나 본 시험에서는 IgA 함량은 대조구에 비해 유의적으로 감소되었으며, IgM의 함량은 메틸화한 quercetin 처리구에서만 감소하였으며, IgG는 처리구 간 유의적인 차이가 없었다. Quercetin 첨가 유무에 따른 면역글로불린(IgA, IgG 및 IgM) 함량에 대한 연구가 부족하여 본 시험의 결과를 설명하기가 어려우며, 추후 추가적인 연구가 필요하다고 사료된다.
- Anjaneyulu and Chopra(2004)는 흰쥐에서 creatinine의 함량은 quercetin 첨가에 따라 개선된다고 보고하였다. 본 시험에서 quercetin을 첨가한 처리구에서는 대조구와 creatinene의 함량은 유의적인 차이를 보이지 않았으나, 메틸화된 quercetin을 첨가한 처리구에서는 유의차를 보였다. Blood urea nitrogen(BUN)은 단백질 대사의 최종산물로 주로 간에서 urea cycle에 의해서 혈중에 방출된다(Cho et al.
- Hwang(2009)은 흰쥐에 대한 quercetin 첨가구에서 AST와 ALT 함량이 대조구에 비해 낮게 나타났으나, 유의적인 차이가 없다고 보고하였다. 본 시험에서는 비타민이나 quercetin 처리구가 대조구에 비해 유의적으로 낮아졌다. 이런 결과는 축종에 따른 차이 때문이라고 사료된다.
- Malondialdehyde(MDA)는 실험동물의 노화 및 세포파괴에 따라 조직에서 발생하는 물질 중의 하나로 알려져 있다(Cho and Oh, 2013). 본 시험에서는 처리구 사이에서 MDA 함량에 대한 유의적인 차이가 보이지 않았다. 이것은 quercetin 자체가 실험동물에 악영향을 미치지 않는 원료라는 것을 입증하는 것이라 사료된다.
- (2010)은 흰쥐에서 포도당, 총단백질, 알부민 및 글로불린 농도를 조사한 결과, quercetin 첨가에 따른 유의적인 차이가 없다고 하였으며, Hwang(2009)도 총단백질, 알부민 및 글로불린 농도는 각각의 처리구에서 유의적인 차이를 보이지 않는다고 하였다. 본 시험의 결과에서도 총단백질이나 알부민 및 글로불린의 함량은 처리구 사이에서 유의차를 보이지 않았다. 이는 quercetin 급여가 육계 혈청의 단백질 농도에 영향을 미치지 않음을 보여주는 것이라 사료된다.
- , 2003). 본 실험에서 대조구를 제외한 모든 처리구에서 SOD 유사활성이 높게 나타나 quercetin에 대한 효과가 있음을 나타내었다.
- (2004)은 흰쥐에서 quercetin 첨가 유무에 따른 BUN 값이 차이가 없다고 보고하였다. 본 연구에서는 비타민 E 200 IU와 quercetin 200 ppm 처리구에서 유의적으로 높게 나타났다. Quercetin의 첨가가 creatinine이나 BUN에 미치는 영향에 대해서는 명확히 제시한 연구는 아직 부족한 실정이다.
- 6 g, 35일 최종 체중은 평균 2,054 g으로 처리구 간 유의적인 차이가 없었으며, 사료 섭취량과 사료 요구율도 체중과 마찬가지로 quercetin 첨가에 따른 유의차가 없었다. 증체량은 quercetin 첨가구를 무항생제 첨가구와 비교시에 개선되는 경향을 보였으며, 특히 quercetin 200 ppm 처리구에서 높게 나타났으나, 처리구 간의 유의적인 차이는 보이지 않았다.
- 혈액 내 immunglobulin인 IgA, IgG 및 IgM 농도는 quercetin이나 methoxylated quercetin 첨가구가 무항생제 첨가구에 비해 유의적으로 감소하였다(P<0.05).
- 혈액 내 항산화 인자를 조사한 결과, quercetin 및 methoxylated quercetin 첨가구에 따라 SOD 활성이 높았으며, 특히, quercetin 200 ppm 처리구에서 가장 높게 나타났다(P<0.05).
후속연구
- 그러나 본 시험에서는 IgA 함량은 대조구에 비해 유의적으로 감소되었으며, IgM의 함량은 메틸화한 quercetin 처리구에서만 감소하였으며, IgG는 처리구 간 유의적인 차이가 없었다. Quercetin 첨가 유무에 따른 면역글로불린(IgA, IgG 및 IgM) 함량에 대한 연구가 부족하여 본 시험의 결과를 설명하기가 어려우며, 추후 추가적인 연구가 필요하다고 사료된다.
- Quercetin의 첨가가 creatinine이나 BUN에 미치는 영향에 대해서는 명확히 제시한 연구는 아직 부족한 실정이다. 따라서 본 연구의 결과를 중심으로 quercetin 첨가에 대한 추가적인 연구가 필요하다고 사료된다.
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