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문제 정의
- 예를 들어 단백질의 혼입 시 폴리페놀류의 F-C시약과의 반응에 의한 발색도의 감소 및 증가 여부, 발색반응 패턴, 페놀성 물질 구조에 따른 단백질의 영향 및 발색도의 변화 양상 등은 지금까지 보고된 바 없다. 따라서 본 연구에서는 각종 식품소재 중 총 페놀 함량 측정에 가장 널리 사용되는 Folin-Denis 방법에서 단백질의 존재에 의한 페놀성 물질의 발색도 변화를 측정하였고, F-C시약과의 반응 시 총 9종의 페놀성 물질의 구조에 따른 단백질의 간섭정도 및 반응성 차이를 조사하여, 페놀성 물질 정량에 단백질이 미치는 영향에 대한 기본정보를 제공하고자 하였다.
- 본 연구는 기능성 소재 등의 페놀성 성분 함량 분석에 널리 이용되는 Folin-Denis 정량반응에서 단백질이 미치는 영향을 조사하였다. BSA와 SMP는 Folin-Denis 페놀정량반응에서 농도의존적인 발색반응을 나타내었고 BSA가 SMP보다 더 민감한 반응성을 나타내었다.
제안 방법
- 단백질과 페놀성 물질들 간의 상호작용을 조사하기 위하여, BSA의 형광 특성과 페놀성 물질 존재 시의 변화를 분석하였다(16-18). BSA 단독(0.125-0.5 mg/mL) 또는 각 페놀성 물질을 증류수에 녹여 혼합물을 제조한 후, 이를 280 nm에서 excitation시키 고 350-500 nm에서의 emission spectrum을 fluoro-microplate reader (SpectraMax M3, Molecular device, Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 분석하였다. 또한 페놀성 물질 정량 시의 환경 조건이 단백질과 페놀성 물질의 상호작용에 미치는 영향을 조사하기 위하여, 먼저 BSA 단독 또는 페놀성 물질과 혼합한 후, F-C시약의 산성조건과 유사하도록 0.
- BSA 단백질 존재 하에 페놀성 물질의 농도 변화에 따른 반응성 변화 양상을 계량화하기 위해, Folin-Denis 반응계에서의 페놀성 물질 당량 당 흡광도의 증가도를 기울기로 계산하여 나타내었다(Table 1). 모든 페놀성 화합물에서 BSA 존재 시 기울기의 유의적인 감소현상이 나타났으며 전반적으로 0.
- Folin-Denis 정량반응계에 각 페놀성 물질의 농도(페놀산류 0-400 µM, 플라보노이드류 0-200 µM, TA 0-100 µM) 및 BSA 단백질 농도(0, 0.25 및 0.5 mg/mL)를 변화시키면서 F-C시약과의 반응성을 조사하였다.
- 단백질과 페놀성 물질들 간의 상호작용을 조사하기 위하여, BSA의 형광 특성과 페놀성 물질 존재 시의 변화를 분석하였다(16-18). BSA 단독(0.
- 이 후, 상온의 암소에서 30분간 추가로 반응시키고, microplate reader (SpectraMax 250, Molecular device, Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 750 nm에서 흡광도를 측정하였다. 단백질이 각종 페놀성 물질 또는 실 시료로서 함초 종자 추출물과 F-C시약과의 반응성에 미치는 영향을 조사하기 위하여, 이들 시료와 BSA 및 SMP 단백질을 각각 농도를 달리하여 혼합한 다음, 상기의 방법으로 반응시킨 후, 750 nm에서 흡광도를 측정하였다.
- 따라서 단백질 등 간섭물질의 제거 후 정량반응을 실시하는 것이 추천되지만, 대부분의 실험에서는 이 영향요인의 제거가 쉽지 않아 다양한 물질이 혼합된 추출물 상태에서 페놀성 물질의 정량을 실시하는 경우가 빈번하다. 따라서 본 실험에서는 단백질이 Folin-Denis 방법을 이용한 페놀성 물질의 정량에 미치는 영향을 조사하였고, FeA, SiA 등의 mono-hydroxy phenolic acid류, CaA, DHC와 같은 dihydroxy phenolic acid류, Qct, Ctc, EGCG 등의 플라보노이드(flavonoid)류 및 GA, TA 등의 구조적으로 다양한 페놀성 물질을 사용하여 각 화합물의 정량반응에 미치는 단백질 영향의 차이를 분석하였다.
- Folin-Denis 방법에서 단백질에 의한 페놀성 물질들의 발색도 변화는 단백질이 페놀성 물질들과 결합하여 F-C시약과의 반응성을 저하시키기 때문으로 사료된다. 따라서 페놀성 물질들의 단백질과의 결합양상을 형광변화를 통해 간접적으로 조사하였다. BSA를 비롯한 단백질은 트립토판 등의 아미노산 잔기로 인해 나타나는 형광특성을 가지며, 폴리페놀류들이 BSA 단백질과의 결합 등의 상호작용을 통해 BSA의 형광특성을 변화시키고 emission형광을 감소시킨다는 결과가 보고된 바 있다(17,18).
- 5 mg/mL) 또는 각 페놀성 물질을 증류수에 녹여 혼합물을 제조한 후, 이를 280 nm에서 excitation시키 고 350-500 nm에서의 emission spectrum을 fluoro-microplate reader (SpectraMax M3, Molecular device, Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 분석하였다. 또한 페놀성 물질 정량 시의 환경 조건이 단백질과 페놀성 물질의 상호작용에 미치는 영향을 조사하기 위하여, 먼저 BSA 단독 또는 페놀성 물질과 혼합한 후, F-C시약의 산성조건과 유사하도록 0.1 N HCl와 1% Na2CO3가 되도록 가하여 상기와 동일한 방법으로 BSA의 형광 특성과 페놀성 화합물에 의한 변화를 조사하였다.
- 서로 다른 페놀성 화합물의 F-C시약과의 발색반응에 미치는 단백질의 영향을 평가하기 위해, 9종의 페놀성 화합물과 BSA 또는 SMP를 함께 섞어 Folin-Denis 방법에 의한 발색반응을 진행시켰다. 두 물질이 함께 존재하는 상태에서 단백질과 페놀성 화합물 모두 F-C시약과 반응하기 때문에 두 물질 각각의 반응성만큼 흡광도 값이 증가할 것으로 예상했으나, 오히려 FeA를 제외한 대부분의 경우에 BSA와 혼합 시 페놀성 물질 단독으로 존재할 때 보다 발색도가 유의적으로 감소하였다(Fig.
- 이들 산화물과 F-C시약과의 반응성에 미치는 BSA의 영향을 평가하기 위하여 페놀성 화합물의 각 시간별 산화물에 BSA를 첨가하여 Folin-Denis 정량법에 의한 발색도의 변화를 측정하였다. 산화에 의해 가장 흡광도 감소의 변화가 컸던 GA, TA, EGCG로 실험을 진행한 결과, BSA 존재 시 각 페놀성 물질 산화물의 반응성(BSA가 없을 때와 비교한 상대적 발색도)도 유의적으로 감소하는 것으로 나타났다(Fig.
- 증류수에 희석하여 농도를 달리한 BSA 또는 SMP용액 80 µL에 50% F-C시약 20 µL를 첨가하여 암소에서 3분간 반응시킨 다음, 2% Na2CO3 용액을 100 µL씩 가하였다.
- 한편 천연물 연구에 빈번하게 수행되는 실험으로서 실제 시료 추출물 중의 페놀 함량 측정에 미치는 BSA 단백질의 영향을 조사하였다. 함초 종자 추출물 중 페놀성 물질의 함량이 가장 높았던 아세트산에틸 분획에 BSA를 첨가하여 Folin-Denis 방법으로 발색도를 조사한 결과, 시료 농도에 따라 단백질에 의한 간섭도가 변화하는 것으로 나타났다(Fig.
대상 데이터
- (St. Louis, MO, USA)에서 구입하였고, (−)-epigallocatechin-3-gallate (EGCG)는 Rutgers university의 Dr. Chung S. Yang (Piscataway, NJ, USA)으로부터 제공받았다.
- 각 페놀성 화합물들은 200 mM의 농도로 dimethyl sulfoxide (DMSO)에 녹여 분취(aliquot)한 후, −80℃ 초저온 냉동고(DF8520, IlShinBioBase, Dongduchen, Korea)에 저장하여 사용하였다. 실 시료로 사용된 함초종자는 산들함초(Shinan, Korea)에서 구입하여 전보의 방법에 따라 추출 분획하였다(14). 그 중 함초 종자의 아세트산에틸(ethyl acetate) 분획물을 200 mg/mL 농도로 DMSO에 용해한 다음, −80o C 초저온 냉동고에 보관하여 사용하였다.
- F-C시약과 bovine serum albumin (BSA)은 Sigma-Aldrich Co.에서 구입하였으며, 탈지우유 단백질(skim milk protein, SMP)은 Bio Basic Inc. (Markham, Ontario, Canada)에서 구하였다. 각 페놀성 화합물들은 200 mM의 농도로 dimethyl sulfoxide (DMSO)에 녹여 분취(aliquot)한 후, −80℃ 초저온 냉동고(DF8520, IlShinBioBase, Dongduchen, Korea)에 저장하여 사용하였다.
데이터처리
- Different letters indicate a significant difference (p<0.05) among different period incubation products based on one way ANOVA and the Tukey’s HSD test (B-D).
- 모든 실험결과는 평균±표준편차로 나타내었고, 각 실험군별 유의차 분석은 SAS 프로그램(SAS Institute, Cary, NC, USA)을 이용하여 Student’s t-test 또는 일원분산분석(one-way ANOVA)과 Tukey’s HSD test를 실시하였고 95와 99%의 유의수준에서 검정하였다.
이론/모형
- Concentration-dependent color responses of BSA or SMP (A) and time-dependent color development of BSA at different concentration (B) in Folin-Denis assay were analyzed. The result represents the mean±SD (n=6-9).
- Reactivity of the oxidized phenolic compounds formed at different incubation periods was analyzed by the Folin-Denis assay (A). Effects of BSA (0.
- Folin-Denis 방법에서 페놀성 화합물의 정량이 이들의 환원성에 근거하여 이루어지는 바, 페놀성 화합물의 산화가 진행되면서 F-C시약과의 반응성이 현저하게 감소할 것으로 예상되었다. 따라서 각 페놀성 화합물을 PBS (pH 7.4)에 저장하면서 산화를 유도하여 각 시간별 산화물에 대해 Folin-Denis 정량법 상에서의 반응성 변화를 측정하였다. 그 결과 FeA 및 SiA와 같은 monophenolic acid를 제외한 모든 페놀성 물질의 24시간 산화물에서 20% 이상의 유의적인 흡광도 감소현상이 나타났으며(자료 미제시), 특히 TA, GA, EGCG와 같은 벤젠고리구조에 3개 이상의 hydroxyl기를 가진 폴리페놀류의 반응성 감소가 두드러지게 나타났다.
- 먼저 총 페놀성 물질 정량을 위해 가장 빈번히 사용되는 FolinDenis 방법으로 단백질의 반응성을 조사하였다(15). 증류수에 희석하여 농도를 달리한 BSA 또는 SMP용액 80 µL에 50% F-C시약 20 µL를 첨가하여 암소에서 3분간 반응시킨 다음, 2% Na2CO3 용액을 100 µL씩 가하였다.
- 4)에 용해한 후, 37℃ 배양기에서 저장 시간을 달리하여 산화시켰다. 이 후, 각 시간별 저장한 페놀성 시료를 단독 또는 0.25와 0.5 mg/mL 농도의 BSA와 혼합하여 상기의 Folin-Denis 정량법을 이용하여 반응성 변화를 측정하였다.
성능/효과
- 1A). BSA에 대한 농도별 발색반응 속도를 측정한 결과 농도에 관계없이 초기 5분 이내에 발색이 신속하게 진행되었으며, 30분 이후에는 현저하게 반응속도가 지연되었으나 8시간 이후까지도 여전히 발색도는 계속해서 증가하였다(Fig. 1B). 폴리페놀 정량에 사용되는 F-C시약은 단백질 정량을 위한 Lowry법에도 사용되며, 단백질과 반응하여 발색을 나타낸다(11).
- 5 mg/mL의 BSA 농도에서 더 저하된 발색도를 유도하였다. BSA에 의한 서로 다른 페놀성 물질 간의 반응성 차이는 크게 나타나지 않았으나, SiA, Ctc, 및 EGCG 등에서 물질 당량 당 흡광도 증가의 기울기가 비교적 크게 감소하였다. 이들은 BSA가 없을 때에 비해 0.
- 본 연구는 기능성 소재 등의 페놀성 성분 함량 분석에 널리 이용되는 Folin-Denis 정량반응에서 단백질이 미치는 영향을 조사하였다. BSA와 SMP는 Folin-Denis 페놀정량반응에서 농도의존적인 발색반응을 나타내었고 BSA가 SMP보다 더 민감한 반응성을 나타내었다. 그러나 BSA는 각종 페놀성 물질과 같이 존재할 경우 페놀성 물질 자체에 의한 발색도 이하로 반응성을 감소시켰으며, 0.
- 한편, 페놀성 화합물들의 산화를 유도하여 F-C시약과 반응시킨 결과, TA, GA 및 EGCG에서 반응성의 감소가 크게 나타났으며, BSA 존재시 이들 산화물의 상대적 발색도는 산화시간의 증가 및 BSA 농도 증가에 따라 감소하는 경향을 나타내었다. BSA의 형광강도가 TA, EGCG에 의해 유의적으로 감소하는 것으로 보아, BSA에 의한 페놀성 물질의 F-C시약과의 반응성 감소는 페놀성 물질과 BSA의 결합특성에 의한 것으로 사료된다. 이상의 결과는 단백질이 페놀성 물질과의 상호작용을 통해 이들의 정량에 간섭할 뿐만 아니라 페놀성 물질의 다양한 생리활성에도 영향을 미칠 수 있다는 것으로 시사하며, 보다 정확한 기작검토를 위하여 관련 연구가 지속적으로 수행 되어야 할 것으로 보인다.
- 4B). EGCG와 TA의 경우에도 산화유도시간의 증가에 따라 BSA 존재 하에 점진적인 F-C시약과의 반응성 감소양상을 나타내었고, EGCG에서는 유의적인 차이가 발견되지 않았으나 TA의 8, 24시간 산화물에서 유 의적인 상대적 반응성의 감소양상을 보였다(Fig. 4C and D). 이러한 현상은 폴리페놀류의 산화가 진행됨에 따라 상호 친화력 증가 등 단백질과의 상호작용이 증가하며, 이에 따라 F-C시약과의 반응성이 감소하기 때문으로 사료된다.
- 4)에 저장하면서 산화를 유도하여 각 시간별 산화물에 대해 Folin-Denis 정량법 상에서의 반응성 변화를 측정하였다. 그 결과 FeA 및 SiA와 같은 monophenolic acid를 제외한 모든 페놀성 물질의 24시간 산화물에서 20% 이상의 유의적인 흡광도 감소현상이 나타났으며(자료 미제시), 특히 TA, GA, EGCG와 같은 벤젠고리구조에 3개 이상의 hydroxyl기를 가진 폴리페놀류의 반응성 감소가 두드러지게 나타났다. GA 24시간 산화물의 경우 70%이상 반응성이 감소하였고, TA와 EGCG의 경우에도 처음 상태와 비교했을 때 각각 64 및 52% 정도의 발색도를 보였다(Fig.
- 5 mg/mL)를 변화시키면서 F-C시약과의 반응성을 조사하였다. 그 결과 전반적으로 BSA 존재 시에 페놀성 물질 단독으로 존재할 때보다 반응성이 감소하였으며, BSA 농도가 증가함에 따라 반응성의 감소 양상이 더 크게 나타났다(Fig.3). 한편 그래프 상에서 페놀성 물질의 농도구간별로 보았을 때, 높은 농도영역에서 발색의 민감도가 더 낮아졌으며 따라서 고농도 페놀성 물질에 의한 반응성이 단백질에 의한 간섭에 더 크게 영향 받는 것으로 보인다(Fig.
- 서로 다른 페놀성 화합물의 F-C시약과의 발색반응에 미치는 단백질의 영향을 평가하기 위해, 9종의 페놀성 화합물과 BSA 또는 SMP를 함께 섞어 Folin-Denis 방법에 의한 발색반응을 진행시켰다. 두 물질이 함께 존재하는 상태에서 단백질과 페놀성 화합물 모두 F-C시약과 반응하기 때문에 두 물질 각각의 반응성만큼 흡광도 값이 증가할 것으로 예상했으나, 오히려 FeA를 제외한 대부분의 경우에 BSA와 혼합 시 페놀성 물질 단독으로 존재할 때 보다 발색도가 유의적으로 감소하였다(Fig. 2A). 또 다른 단백질인 SMP를 첨가하여 각 페놀성 화합물의 반응성을 조사한 결과 BSA만큼 현저한 발색도의 감소현상은 나타나지 않았으나, 역시 FeA를 제외한 페놀성 화합물에서 여전히 SMP에 의한 부가적인 흡광도 상승효과는 볼 수 없었다(Fig.
- BSA 단백질 존재 하에 페놀성 물질의 농도 변화에 따른 반응성 변화 양상을 계량화하기 위해, Folin-Denis 반응계에서의 페놀성 물질 당량 당 흡광도의 증가도를 기울기로 계산하여 나타내었다(Table 1). 모든 페놀성 화합물에서 BSA 존재 시 기울기의 유의적인 감소현상이 나타났으며 전반적으로 0.5 mg/mL BSA에서 0.25 mg/mL 보다 더 저하된 기울기를 보였다. 특히 SiA, Ctc, EGCG 등에서 크게 감소하였고, BSA가 없을 때에 비해 0.
- BSA를 비롯한 단백질은 트립토판 등의 아미노산 잔기로 인해 나타나는 형광특성을 가지며, 폴리페놀류들이 BSA 단백질과의 결합 등의 상호작용을 통해 BSA의 형광특성을 변화시키고 emission형광을 감소시킨다는 결과가 보고된 바 있다(17,18). 본 실험에서도 BSA를 증류수에 녹여 형광특성을 조사한 결과, 280 nm에서 excitation시켰을 때 370 nm 부근에서 emission의 피크(peak)를 보이며 전체적으로 형광강도가 농도 의존적으로 증가하는 것으로 나타났다(Fig. 5A). 그러나 TA와 EGCG의 존재 시, BSA의 형광 강도는 현저하게 감소하였으며 특히 TA는 50 µM 이하에서 대부분의 형광을 소거시켰다(Fig.
- 본 연구에서 나타난 단백질에 의한 페놀성 물질의 반응성 감소는 이들이 단백질과 같이 존재 시, 결합 등의 다양한 형태로 상호작용할 수 있음을 의미하며, 이러한 현상을 통해 페놀류의 생리활성이나 생체 이용률에도 영향을 미칠 수 있다는 것을 의미한다. 따라서 향후 페놀성 물질의 정량에 있어서 단백질에 의한 간섭 등에 대한 연구뿐만 아니라 페놀성 물질의 구조에 따른 단백질과의 상호작용 패턴 등이 다양한 접근방법을 통해 면밀히 검토되어야 할 것으로 사료된다.
- 이들 산화물과 F-C시약과의 반응성에 미치는 BSA의 영향을 평가하기 위하여 페놀성 화합물의 각 시간별 산화물에 BSA를 첨가하여 Folin-Denis 정량법에 의한 발색도의 변화를 측정하였다. 산화에 의해 가장 흡광도 감소의 변화가 컸던 GA, TA, EGCG로 실험을 진행한 결과, BSA 존재 시 각 페놀성 물질 산화물의 반응성(BSA가 없을 때와 비교한 상대적 발색도)도 유의적으로 감소하는 것으로 나타났다(Fig. 4). GA의 경우 24시간 산화물에서 현저한 흡광도의 감소반응을 나타내었고, 8시간 이내의 산화물 간에는 유의적 차이가 나타나지 않았다(Fig.
- 우선 BSA와 SMP 단백질을 단독으로 첨가하여 Folin-Denis 방법에서의 반응성을 조사한 결과, 두 단백질 모두 농도에 비례하여 발색도가 증가하였으며 SMP보다 BSA가 더 민감하게 반응하는 것으로 나타났다(Fig. 1A). BSA에 대한 농도별 발색반응 속도를 측정한 결과 농도에 관계없이 초기 5분 이내에 발색이 신속하게 진행되었으며, 30분 이후에는 현저하게 반응속도가 지연되었으나 8시간 이후까지도 여전히 발색도는 계속해서 증가하였다(Fig.
- 1 N HCl용액과 2% Na2CO3를 반응조건과 같은 비율로 섞은 환경에서 BSA의 형광스펙트럼을 조사한 결과 증류수에서와 유사한 경향을 나타내었다. 이 반응계에 TA 또는 EGCG를 첨가하여 BSA의 형광도를 평가하였을 때, EGCG에 의해 BSA 형광이 대부분 소거되었으며, TA 존재 시에도 이 반응환경에서의 BSA 형광성이 더 감소되는 것으로 나타났다(Fig. 5C and D). 하지만 이러한 BSA 형광성의 감소는 TA나 EGCG의 농도변화에 따른 명백한 의존성 효과를 나타내지 않았으며(Fig.
- 5 mg/mL BSA 존재 시 각각 80%대 및 70%대의 기울기 감소율을 나타내었다(Table 1). 이상의 결과는 단백질 자체가 F-C시약과 반응하여 발색할 수 있음에도 불구하고, 단백질이 페놀성 물질들과 같이 존재할 경우 페놀류와 F-C시약 간의 반응의 간섭을 통해 전체적인 발색도를 감소시키는 것을 나타낸다. BSA와 같은 단백질과 페놀성 물질과의 다양한 상호작용을 고려해볼 때, 이들 간의 직접적인 결합(binding)이 페놀성 물질의 F-C시약과의 반응성 감소에 주요 원인으로 보이며(17,18,20) 이에 대한 면밀한 검토가 진행되어야 할 것으로 사료된다.
- 2C). 즉, 저농도 시료(0.125와 0.25 mg/mL)에서는 단백질과 시료의 혼합에 의해 시료 자체의 발색도 보다 증가하였으나 고농도(1 mg/mL)에서는 단일 페놀류 화합물에서 나타난 바와 같이 시료 자체에 의한 발색보다도 BSA 혼합에 의해 전체적인 반응성이 감소하였다.
- 25 mg/mL 보다 더 저하된 기울기를 보였다. 특히 SiA, Ctc, EGCG 등에서 크게 감소하였고, BSA가 없을 때에 비해 0.25와 0.5 mg/mL BSA 존재 시 각각 80%대 및 70%대의 기울기 감소율을 나타내었다(Table 1). 이상의 결과는 단백질 자체가 F-C시약과 반응하여 발색할 수 있음에도 불구하고, 단백질이 페놀성 물질들과 같이 존재할 경우 페놀류와 F-C시약 간의 반응의 간섭을 통해 전체적인 발색도를 감소시키는 것을 나타낸다.
- 5 mg/mL BSA 존재 시 각각 80%대 및 70%대의 기울기 감소율을 나타내었다. 한편, 페놀성 화합물들의 산화를 유도하여 F-C시약과 반응시킨 결과, TA, GA 및 EGCG에서 반응성의 감소가 크게 나타났으며, BSA 존재시 이들 산화물의 상대적 발색도는 산화시간의 증가 및 BSA 농도 증가에 따라 감소하는 경향을 나타내었다. BSA의 형광강도가 TA, EGCG에 의해 유의적으로 감소하는 것으로 보아, BSA에 의한 페놀성 물질의 F-C시약과의 반응성 감소는 페놀성 물질과 BSA의 결합특성에 의한 것으로 사료된다.
- 한편 천연물 연구에 빈번하게 수행되는 실험으로서 실제 시료 추출물 중의 페놀 함량 측정에 미치는 BSA 단백질의 영향을 조사하였다. 함초 종자 추출물 중 페놀성 물질의 함량이 가장 높았던 아세트산에틸 분획에 BSA를 첨가하여 Folin-Denis 방법으로 발색도를 조사한 결과, 시료 농도에 따라 단백질에 의한 간섭도가 변화하는 것으로 나타났다(Fig. 2C). 즉, 저농도 시료(0.
후속연구
- 이상의 결과는 단백질 자체가 F-C시약과 반응하여 발색할 수 있음에도 불구하고, 단백질이 페놀성 물질들과 같이 존재할 경우 페놀류와 F-C시약 간의 반응의 간섭을 통해 전체적인 발색도를 감소시키는 것을 나타낸다. BSA와 같은 단백질과 페놀성 물질과의 다양한 상호작용을 고려해볼 때, 이들 간의 직접적인 결합(binding)이 페놀성 물질의 F-C시약과의 반응성 감소에 주요 원인으로 보이며(17,18,20) 이에 대한 면밀한 검토가 진행되어야 할 것으로 사료된다.
- 본 연구에서 나타난 단백질에 의한 페놀성 물질의 반응성 감소는 이들이 단백질과 같이 존재 시, 결합 등의 다양한 형태로 상호작용할 수 있음을 의미하며, 이러한 현상을 통해 페놀류의 생리활성이나 생체 이용률에도 영향을 미칠 수 있다는 것을 의미한다. 따라서 향후 페놀성 물질의 정량에 있어서 단백질에 의한 간섭 등에 대한 연구뿐만 아니라 페놀성 물질의 구조에 따른 단백질과의 상호작용 패턴 등이 다양한 접근방법을 통해 면밀히 검토되어야 할 것으로 사료된다.
- BSA의 형광강도가 TA, EGCG에 의해 유의적으로 감소하는 것으로 보아, BSA에 의한 페놀성 물질의 F-C시약과의 반응성 감소는 페놀성 물질과 BSA의 결합특성에 의한 것으로 사료된다. 이상의 결과는 단백질이 페놀성 물질과의 상호작용을 통해 이들의 정량에 간섭할 뿐만 아니라 페놀성 물질의 다양한 생리활성에도 영향을 미칠 수 있다는 것으로 시사하며, 보다 정확한 기작검토를 위하여 관련 연구가 지속적으로 수행 되어야 할 것으로 보인다.
- 5C and D). 하지만 이러한 BSA 형광성의 감소는 TA나 EGCG의 농도변화에 따른 명백한 의존성 효과를 나타내지 않았으며(Fig. 5D), GA에 의해서도 농도와 관계없이 최대 20% 내외의 감소에 그쳐(자료미제시) BSA 형광도 측정에 의한 폴리페놀류 결합양상의 정량적 파악은 한계가 있을 것으로 판단된다.
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