본 연구에서는 다양한 식품원으로부터 7종류의 프로바이오틱스를 분리하여 16S rDNA 염기서열 분석을 통해 동정하였으며, 그 결과 Bacillus sp.와 Lactobacillus sp.로 확인되었다. 먼저 LPS로 활성화 된 RAW 264.7 세포주에 7종의 균주 배양액을 처리한 후, nitric oxide (NO) 생성을 측정하였다. 처리한 균주의 배양액 중 Bacillus sp. FG-1과 Lactobacillus sp. FG-6 균주의 배양액 처리군에서 현저하게 NO 생성이 저해되었다. 또한, 이들의 처리에 의해 COX-2, iNOS 그리고 TNF-α와 같은 pro-inflammatory 유전자의 발현이 감소되었다. 균주가 생산하는 여러 물질중 exopolysaccharide (EPS)가 항염증 활성과 관련이 있는지를 검증하기 위하여 두 균주로부터 EPS를 분리하여, 이들이 NO 생성에 미치는 영향을 연구하였다. 그 결과, 두 균주가 생산하는 EPS가 NO 생성을 농도의존적으로 저해하였고, pro-inflammatory 유전자의 발현도 현저하게 감소시켰다. 이러한 연구결과는 EPS가 프로바이오틱스가 생산하는 여러 물질 중 항염증 활성의 핵심물질 중의 하나가 될 수 있음을 시사한다.
본 연구에서는 다양한 식품원으로부터 7종류의 프로바이오틱스를 분리하여 16S rDNA 염기서열 분석을 통해 동정하였으며, 그 결과 Bacillus sp.와 Lactobacillus sp.로 확인되었다. 먼저 LPS로 활성화 된 RAW 264.7 세포주에 7종의 균주 배양액을 처리한 후, nitric oxide (NO) 생성을 측정하였다. 처리한 균주의 배양액 중 Bacillus sp. FG-1과 Lactobacillus sp. FG-6 균주의 배양액 처리군에서 현저하게 NO 생성이 저해되었다. 또한, 이들의 처리에 의해 COX-2, iNOS 그리고 TNF-α와 같은 pro-inflammatory 유전자의 발현이 감소되었다. 균주가 생산하는 여러 물질중 exopolysaccharide (EPS)가 항염증 활성과 관련이 있는지를 검증하기 위하여 두 균주로부터 EPS를 분리하여, 이들이 NO 생성에 미치는 영향을 연구하였다. 그 결과, 두 균주가 생산하는 EPS가 NO 생성을 농도의존적으로 저해하였고, pro-inflammatory 유전자의 발현도 현저하게 감소시켰다. 이러한 연구결과는 EPS가 프로바이오틱스가 생산하는 여러 물질 중 항염증 활성의 핵심물질 중의 하나가 될 수 있음을 시사한다.
The present study isolated seven different kinds of probiotics from various food sources and identified them with Bacillus sp. and Lactobacillus sp. by 16S rDNA sequencing. Their supernatants were prepared after a 24 hr culture, and their effects on nitric oxide (NO) production in mouse RAW 264.7 ce...
The present study isolated seven different kinds of probiotics from various food sources and identified them with Bacillus sp. and Lactobacillus sp. by 16S rDNA sequencing. Their supernatants were prepared after a 24 hr culture, and their effects on nitric oxide (NO) production in mouse RAW 264.7 cells were investigated. Among the treated samples, the culture supernatants of two strains (Bacillus sp. FG-1 and Lactobacillus sp. FG-6) significantly decreased NO production in LPS-activated RAW 264.7 cells. Moreover, they dramatically reduced the expression of pro-inflammatory genes such as COX-2, iNOS, and TNF-α. To examine whether exopolysaccharide (EPS) is responsible for the anti-inflammatory effects of probiotics, EPS was purified from the culture supernatants of Bacillus sp. FG-1 and Lactobacillus sp. FG-6 strains. The EPS treatment produced by FG-1 and FG-6 strains decreased NO production in a dose-dependent manner in LPS-stimulated RAW 264.7 cells without affecting cell viability, while also reducing pro-inflammatory gene expression. Overall, these results suggest that EPS might be one of the key molecules responsible for the anti-inflammatory effects of probiotics.
The present study isolated seven different kinds of probiotics from various food sources and identified them with Bacillus sp. and Lactobacillus sp. by 16S rDNA sequencing. Their supernatants were prepared after a 24 hr culture, and their effects on nitric oxide (NO) production in mouse RAW 264.7 cells were investigated. Among the treated samples, the culture supernatants of two strains (Bacillus sp. FG-1 and Lactobacillus sp. FG-6) significantly decreased NO production in LPS-activated RAW 264.7 cells. Moreover, they dramatically reduced the expression of pro-inflammatory genes such as COX-2, iNOS, and TNF-α. To examine whether exopolysaccharide (EPS) is responsible for the anti-inflammatory effects of probiotics, EPS was purified from the culture supernatants of Bacillus sp. FG-1 and Lactobacillus sp. FG-6 strains. The EPS treatment produced by FG-1 and FG-6 strains decreased NO production in a dose-dependent manner in LPS-stimulated RAW 264.7 cells without affecting cell viability, while also reducing pro-inflammatory gene expression. Overall, these results suggest that EPS might be one of the key molecules responsible for the anti-inflammatory effects of probiotics.
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문제 정의
균주 배양액 및 exopolysaccharide (EPS)가 lipopoly- saccharide (LPS)로 활성화된 대식세포 RAW 264.7 세포주의 nitric oxide (NO) 생성에 미치는 영향을 측정하기 위하여 NO assay를 수행하였다. 즉, RAW 264.
7 세포주에서 프로바이오틱스 배양액에 의한 항염증 활성을 확인하였다. 또한, 유용세균 배양액으로부터 EPS를 분리 및 정제하여 이들의 항염증 활성 및 활성 기전을 연구하였다.
본 연구에서는 다양한 식품원으로부터 프로바이오틱스를 분리 및 동정하고, 마우스 대식세포인 RAW 264.7 세포주에서 프로바이오틱스 배양액에 의한 항염증 활성을 확인하였다. 또한, 유용세균 배양액으로부터 EPS를 분리 및 정제하여 이들의 항염증 활성 및 활성 기전을 연구하였다.
제안 방법
EPS가 마우스 대식세포 RAW 264.7 세포주의 성장에 미치는 영향을 연구하기 위해 cell viability assay를 수행하였다. 먼저 96 well plate에 1×105개의 RAW 264.
EPS에 의한 항염증 활성을 유전자 발현 수준에서 확인하기위해 선별된 EPS 2종을 1 mg/ml의 농도로 처리한 후, pro-in- flammatory 유전자인 COX-2, iNOS그리고 TNF-alpha 유전자의 발현 변화를 확인하였다. 그 결과, 두 가지 EPS 처리군 모두유의적인 pro-inflammatory 유전자의 발현 감소를 확인하였으며, 특히 Lactobacillus sp.
3). LPS를 처리한 RAW 264.7 세포주에 EPS를 0.75, 1.0, 1.25, 1.5 mg/ml의 농도로 처리한 후, NO 생성 저해율 및 세포생존율을 측정하였다. 그 결과, 두 균주가 생산하는 EPS가 세포생존율에는 큰 영향 없이 농도 의존적으로 NO 생성을 억제하였다(Fig.
배양된 균주로부터 G-spin kit (iNtRON, Korea)를 이용하여 genomic DNA 를 추출하였으며, 8F (F: 5‘-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG- 3‘), 1492R (R: 5’-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3’) uni- versal primer를 사용하여 16S rDNA 부분을 polymerase chain reaction을 통하여 증폭하였다. PCR product는 pGEM T-easy vector로 cloning 한 후 16S rDNA염기서열을 분석하였다. 염기서열은 NCBI (National Center for Biotechnology Information)의 BLAST program을 이용하여 세균을 동정하였다.
PCR에 사용된 primer는 Table 2와 같고, primer는 Bioneer사 (Korea)에 주문 제작하였다. PCR은 TaKaRa Ex Taq (TaKaRa, Japan)을 이용하여 수행하였다.
RT-PCR을 수행하기 위해 RAW 264.7 세포로부터 RNeasy mini kit (Qiagen, USA)을 이용하여 제조사의 매뉴얼에 따라수행하여 Total RNA를 분리하였다. 분리한 total RNA 2 µg을주형으로 PrimeScript™ RT-PCR Kit (TaKaRa, Japan)를 이용하여 제조사의 매뉴얼에 따라 cDNA를 합성하였다.
있어 중요한 지표물질로 이용될 수 있다. 따라서, 순수분리한 균주 배양액의 항염증 활성을 측정하기 위하여 LPS로염증이 유도된 RAW 264.7 세포주에 각 유산균 배양액을 100 μl/ml의 농도로 처린 한 후, NO 생성에 미치는 영향을 확인하였다. 그 결과, Fig.
선별된 균주는 Lactobacilli MRS (Difco, USA) 배지에서 순수 배양한 후 MRS 액체 배지에서 48시간 동안 현탁 배양 하였다. 배양된 균주로부터 G-spin kit (iNtRON, Korea)를 이용하여 genomic DNA 를 추출하였으며, 8F (F: 5‘-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG- 3‘), 1492R (R: 5’-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3’) uni- versal primer를 사용하여 16S rDNA 부분을 polymerase chain reaction을 통하여 증폭하였다. PCR product는 pGEM T-easy vector로 cloning 한 후 16S rDNA염기서열을 분석하였다.
2 μm micro filter (Sartorius Biotech, Germany) 로 여과하였다. 배양액으로부터 EPS의 분리는 선별된 균주가 EPS를 충분히 생산하도록 MRS 액체 배지에 1% Lactose와 1% Sucrose를 추가 첨가하였으며, OD660 값 0.6으로 조정된 유산균 배양액을 1% 첨가하여 48시간 배양하였다. 배양액은 2배 volume의 D.
7 세포로부터 RNeasy mini kit (Qiagen, USA)을 이용하여 제조사의 매뉴얼에 따라수행하여 Total RNA를 분리하였다. 분리한 total RNA 2 µg을주형으로 PrimeScript™ RT-PCR Kit (TaKaRa, Japan)를 이용하여 제조사의 매뉴얼에 따라 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA를 주형으로 하여 유전자 특이적인 oligo primer를 이용하여 PCR (polymerase chain reaction) 과정을 수행하였다.
2 μg/ml 농도로 한 시간 처리하고, 균주 배양액 혹은 EPS를 처리하여 16시간 동안 배양하였다. 생성된 NO의 양은 Griess 시약[1% sulfanilamide, 0.1% naphylethylenendiamine in 2.5% phosphoric acid]을 이용해측정하였다. 세포 배양 상등액 100 μl와 Griess 시약 100 μl를 1:1로 혼합하여 96 well plate에서 15분간 반응시키고 Nano- Quant Plate™ (Tecan Trading AG, Switzerland)를 사용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.
선별된 7종의 균주 가운데 NO 생성을 가장 높게 억제하는균주 2종(Bacillus sp. strain FG-1, Lactobacillus sp. strain FG-6) 의 배양 상층액을 100 μl/ml의 농도로 LPS로 활성화된 RAW 264.7세포주에 처리 한 후, pro-inflammatory 유전자인 COX- 2, iNOS 그리고 TNF-alpha 유전자의 발현 변화를 확인하였다. 그 결과, LPS에 의해 염증이 유도된 대조군의 경우 pro-in- flammatory 유전자들의 발현이 크게 증가한 반면 균주 배양액을 함께 처리한 실험군에서는 pro-inflammatory 유전자의 발현이 현저하게 감소됨을 확인하였다(Fig.
7 세포주를 사용하였고 American Type Culture Collection (ATCC, USA)에서 구입하였다. 세포주의 배양은 Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM, Gibco, USA)에 10% Fetal Bovine Serum (FBS, Gibco, USA), 1% penicillin 및 strepto- mycin (WelGene, Korea)을 첨가하여 사용하였다. 배양은 37 ℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 실시하였다.
프로바이오틱스는 막걸리 4종, 유산균 음료 2종, 김치 1종으로부터 Bromo Cresol Purple 및 MRS 배지를 이용하여 최종적으로 7종의 균주를 분리하였다. 순수 분리된 균주는 16S rDNA sequencing을 통해 얻은 염기서열을 NCBI BLAST DB 에서 검색한 결과 96±1%의 상동성을 보이는 Lactobacillus sp.
분리한 total RNA 2 µg을주형으로 PrimeScript™ RT-PCR Kit (TaKaRa, Japan)를 이용하여 제조사의 매뉴얼에 따라 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA를 주형으로 하여 유전자 특이적인 oligo primer를 이용하여 PCR (polymerase chain reaction) 과정을 수행하였다. PCR에 사용된 primer는 Table 2와 같고, primer는 Bioneer사 (Korea)에 주문 제작하였다.
대상 데이터
각 미생물은 막걸리, 김치 및 시중에 유통되고 있는 유산균음료를 Bromo Cresol Purple 배지(Difco, USA)에 배양하여특징적인 변색을 나타내는 7종을 선별하였다. 선별된 균주는 Lactobacilli MRS (Difco, USA) 배지에서 순수 배양한 후 MRS 액체 배지에서 48시간 동안 현탁 배양 하였다.
본 연구에 사용된 세포주는 마우스 대식세포 RAW 264.7 세포주를 사용하였고 American Type Culture Collection (ATCC, USA)에서 구입하였다. 세포주의 배양은 Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM, Gibco, USA)에 10% Fetal Bovine Serum (FBS, Gibco, USA), 1% penicillin 및 strepto- mycin (WelGene, Korea)을 첨가하여 사용하였다.
변색을 나타내는 7종을 선별하였다. 선별된 균주는 Lactobacilli MRS (Difco, USA) 배지에서 순수 배양한 후 MRS 액체 배지에서 48시간 동안 현탁 배양 하였다. 배양된 균주로부터 G-spin kit (iNtRON, Korea)를 이용하여 genomic DNA 를 추출하였으며, 8F (F: 5‘-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG- 3‘), 1492R (R: 5’-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3’) uni- versal primer를 사용하여 16S rDNA 부분을 polymerase chain reaction을 통하여 증폭하였다.
데이터처리
NO assay와 세포생존율 실험은 3회 반복실험을 실시 하였으며, 실험결과는 평균±표준편차로 나타내었고, 각 실험결과의 유의성 검토는 시료가 포함되지 않은 대조구와 비교하여 Student’s t-test에 의해 판정하였으며 p값이 0.05 미만일 때유의성이 있다고 판단하였다.
세포 배양 상등액 100 μl와 Griess 시약 100 μl를 1:1로 혼합하여 96 well plate에서 15분간 반응시키고 Nano- Quant Plate™ (Tecan Trading AG, Switzerland)를 사용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 실험결과 수치는 4개의 독립적인 well에서 수행한 값을 Microsoft EXCEL program을이용하여 분석한 후 mean±SD 값과 그래프로 나타내었다.
세포 배양 상등액 100 μl와 Griess 시약 100 μl를 1:1로 혼합하여 96 well plate에서 15분간 반응시키고 Nano- Quant Plate™ (Tecan Trading AG, Switzerland)를 사용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 실험결과 수치는 4개의 독립적인 well에서 수행한 값을 Microsoft EXCEL program을이용하여 분석한 후 mean±SD 값과 그래프로 나타내었다.
이론/모형
PCR product는 pGEM T-easy vector로 cloning 한 후 16S rDNA염기서열을 분석하였다. 염기서열은 NCBI (National Center for Biotechnology Information)의 BLAST program을 이용하여 세균을 동정하였다.
성능/효과
4). Fig. 4A에서 보는 바와 같이, 두 균주가 생산한 EPS의 처리 농도가 증가할 수록 NO 생성 억제 효과가 증가함을 확인하였다. 또한 두 균주가 생산하는 EPS는 세포 생존율에 큰 영향을 미치지 않았으며(Fig.
strain FG-1 배양 상층액과 Lactobacillus sp. strain FG-6의 배양 상층액에 의한 NO 생성량 감소가 가장 두드러지게 나타났으며, NO 생성 억제율은 LPS 만 처리한 대조군과비교하여 FG-1과 FG-6처리군에서 각각 34.2%와 38.9%로 가장높은 억제율을 보여주었다(Fig. 1). 최근 Kawahara et al.
7세포주에 처리 한 후, pro-inflammatory 유전자인 COX- 2, iNOS 그리고 TNF-alpha 유전자의 발현 변화를 확인하였다. 그 결과, LPS에 의해 염증이 유도된 대조군의 경우 pro-in- flammatory 유전자들의 발현이 크게 증가한 반면 균주 배양액을 함께 처리한 실험군에서는 pro-inflammatory 유전자의 발현이 현저하게 감소됨을 확인하였다(Fig. 2). Pro-inflammatory 유전자인 COX-2, iNOS 그리고 TNF-alpha등은 MAPK path- way 및 NF-kappa B에 의해 조절되며 NO 및 PGE2 생성 등을포함하는 염증반응을 매개하는 것으로 알려져 있다[7, 21].
발현 변화를 확인하였다. 그 결과, 두 가지 EPS 처리군 모두유의적인 pro-inflammatory 유전자의 발현 감소를 확인하였으며, 특히 Lactobacillus sp. strain FG-6 균주가 생성한 EPS를처리한 경우 pro-inflammatory 유전자의 발현이 전반적으로크게 감소되는 것을 확인 할 수 있었다(Fig.
5 mg/ml의 농도로 처리한 후, NO 생성 저해율 및 세포생존율을 측정하였다. 그 결과, 두 균주가 생산하는 EPS가 세포생존율에는 큰 영향 없이 농도 의존적으로 NO 생성을 억제하였다(Fig. 4). Fig.
Pro-inflammatory 유전자인 COX-2, iNOS 그리고 TNF-alpha등은 MAPK path- way 및 NF-kappa B에 의해 조절되며 NO 및 PGE2 생성 등을포함하는 염증반응을 매개하는 것으로 알려져 있다[7, 21]. 따라서, 이러한 결과는 프로바이오틱스 배양 상층액에 포함된생리활성물질이 NO 생성을 억제하고 염증 반응의 신호전달체계에 관여하고 있음을 시사한다.
4A에서 보는 바와 같이, 두 균주가 생산한 EPS의 처리 농도가 증가할 수록 NO 생성 억제 효과가 증가함을 확인하였다. 또한 두 균주가 생산하는 EPS는 세포 생존율에 큰 영향을 미치지 않았으며(Fig. 4B), 이러한 연구 결과는 균주가 생산하는 EPS 및 EPS와 결합된 형태의 생리활성물질이 항염증 활성을 나타내는 것임을 알 수 있다. 최근 연구에 의하면 Bacillus sp.
본 연구에서는 다양한 식품원으로부터 7종의 프로바이오틱스를 분리 및 동정하고 이들의 배양액 및 균주가 생산하는 EPS가 항염증 활성을 가지고 있음을 보여주었다. 프로바이오틱스는 균주마다 다양한 종류의 EPS를 생산하고, 이들의 구성이나 구조에 따라 다양한 생리활성을 보여준다.
후속연구
프로바이오틱스는 균주마다 다양한 종류의 EPS를 생산하고, 이들의 구성이나 구조에 따라 다양한 생리활성을 보여준다. 따라서, 본연구에서 분리한 EPS의 구성성분과 구조를 규명하는 추가적인 연구가 필요할 것으로 생각된다.
참고문헌 (22)
Chae, O. W., Shin, K. S., Chung, H. K. and Choe, T. B. 1998. Immuneostimulation effects of mice fed with cell lysate of Lactobacillus plantarum isolated from Kimchi. Kor. J. Biotechnol. Bioeng. 13, 424-430.
Cho, Y. H. and Oh, S. J. 2010. Casein phosphopeptide (CPP)-producing activity and proteolytic ability by some lactic acid bacteria. Kor. J. Food Sci. Ani. Resour. 30, 443-448.
Goldin, B. R. and Gorbach, S. L. 1980. Effect of Lactobacillus acidophilus dietary supplements on 1,2-dimethylhydrazine dihydrocholoride-induced intestinal cancer in rats. J. Natl. Cancer Inst. 64, 263-265.
Guzik, T. J., Korbut, T. and Adamek-Guzik, T. 2003. Nitric oxide and superoxide in inflammation and immune regulation. J. Physiol. Pharmacol. 54, 469-487.
Hellenbach, E., Vieth, M., Roessner, A., Neumann, M., Malfertheiner, P. and Naumann, M. 2005. Inhibition of RICK/nuclear facter-kappaB and p38 signaling attenuates the inflammatory response in a murine model of Crohndisease. J. Biol. Chem. 280, 14981-14988.
Kang, H. J., Baick, S. C. and Yu, J. H. 2005. Studies on the properties of the stirred yogurt manufactured by exopolysaccharide producing lactic acid bacteria. Kor. J. Food Sci. Ani. Resour. 25, 84-91.
Kawahara, M., Nemoto, M., Nakata, T, Kondo, S, Takahashi, H, Kimura, B. and Kuda, T. 2015. Anti-inflammatory properties of fermented soy milk with Lactococcus lactis subsp. lactis S-SU2 in murine macrophage RAW264.7 cells and DSS-induced IBD model mice. Int. Immunopharmacol. 26, 295-303.
Kim, H. J. and Lee, S. Y. 2001. Isolation of exopolysaccharide producing Enterobacter sp. and physicochemical properties of the polysaccharide produced by this strain. Kor. J. Biotechnol. Bioeng. 16, 370-375.
Kim, S. Y., Kim, J. D., Son, J. S., Lee, S. K., Park, K. J. and Park, M. S. 2011. Biochemical and molecular identification of antibacterial lactic acid bacteria isolated from Kimchi. Kor. J. Food Sci. Technol. 43, 446-452.
Ko, K. H., Liu, W., Lee, H. H., Yin, J. and Kim, I. C. 2013. Biological and Functional characteristics of lactic acid bacteria in different kimchi. J. Kor. Soc. Food. Sci. Nutr. 42, 89-95.
Lee, H. S., Park, S. H., Chung, H. K. and Choe, T. B. 1993. Antitumor effect of cell wall component purified from Lactobacillus plantarum. KK. J. Gen. Eng. 5, 22-28.
Lee, H., Yang, S. G., Park, S. N. and Jeon, D. Y. 1992. Effect of Lactobacilli on reactive oxygen scavenging and immune stimulation. Kor. J. Biotechnol. Bioeng. 7, 290-295.
Marklund, S. and Marklund, G. 1974. Involvement of superoxide anion radical in the oxidation of pyrogallol and a convenient assay for superoxide dismutase. Eur. J. Biochem. 47, 469-474.
Marzinzig, M., Nussler, A. K., Stadler, J., Marzinzig, E., Barthlen, W., Nussler, N. C., Beger, H. G., Morris, S. M. and Bruckner, U. B. 1997. Improved methods to measure end products and nitric oxide in biological fluids: Nitrite, Nitrate, and S-Nitrosothiols. Nitric Oxide 2, 177-189.
Nuria, S., Patricia, L., Pablo, G., Javier, M., Esterfania, C., Miguel, G., Ana, S., Celestino, G., Reyes, G. and Patricia, R. M. 2014. Immune modulating capability of two exopolysaccharide-producing Bifidobacterium strains in a Wistar rat model. Biomed. Res. Int. 2014, Article ID 106290.
Shahani, K. M. and Avebo, A. D. 1980. Role of dietary Lactobacilli in gastrointestinal microecology. Am. J. Clin. Nutr. 33, 2448-2457.
Snoeyenbos, G. H. 1979. Role of native intestinal microflora in protection against pathogens. Proc. Annu. Meet. US Anim. Health Assoc. 1979, 388-393.
Sutherland, I. W. 1972. Bacterial exopolysaccharides. Adv. Microb. Physiol. 8, 143-213.
Waetzig, G. H., Seegert, D., Rosenstiel, P., Nikolaus, S. and Schreiber, S. 2002. P38 mitogen-activated protein kinase is activated and linked to TNF-alpha signaling in inflammatory bowel disease. J. Immunol. 168, 5342-5351.
Yeo, M. H., Kim, D. M., Kim, Y. H., Kim, J. H., Baek, H. and Chung, M. J. 2008. Antitumor activity of CBT-AK5 purified from Lactobacillus casei against sarcoma-180 infected ICR Mice. Kor. J. Dairy Sci. Technol. 26, 23-30.
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