선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- (Horgen, 1991). 이러한 사실을 바탕으로 수집된 동핵균주의 단포자들에 대하여 균사생장 길이를 조사하였다. 한편, 동핵균주를 선발하기 위하여 operon 프라이머 세트 중 opc14(5’-TGCGTGCTTG-3’) 프라이머를 선발하고, 각 단포자의 DNA를 대상으로 PCR을 수행한 결과 ASI1164는 11점, ASI1175는 4점이 잠재적으로 밴드의 다형성이 적은 동핵균주로 확인되었다(Fig 1).
- 현재 ‘705’와 ‘다향’품종이 가장 많이 재배되고 있지만, 그 개발 품종수가 현재까지 3품종으로 13점의 백색 양송이 품종보다는 그 수가 부족하여 재배농가에서 신품종을 요구하고 있다. 이에 따라 본 연구는 기존 수집된 갈색균주 중 우수모본을 선발하여 동핵균주간 교잡 육종방법으로 품종을 개발하고자 하였다.
제안 방법
- 교잡주에 대한 재배는 종균 500 g/box에 볏짚퇴비배지 10 kg/box을 이용하여 모본선발과정과 동일하게 진행되었으며, 우수계통을 선발하기 위하여 3회에 걸쳐 실시하였다. 1차로 전체 교잡주를 1상자씩 재배하고, 2차로 선발된 10점의 교잡주를 3상자씩 재배하고, 3차로 선발된 6점의 교잡주를 3상자씩 재배하였다. 3차 재배에서 최종적으로 우수계통 1 계통을 선발하였다.
- 5 ml tube에 옮기고 48시간 동안 동결건조(오페론 FDU-7006, 6 L) 한 후 액체질소를 이용하여 막자사발로 갈았다. Genomic DNA추출은 Toyobo Mag Extracter(MTNPK-501)를 이용하여, 제공된 매뉴얼에 따라 genomic DNA를 추출하였다. PCR 반응은 Prime Taq Premix(Genetbio, G-3000)을 사용하여 GeneAmp PCR System 9700 기계로 operon primer set을 사용하여 95℃(5 min) 1 cycle, 94℃(30 sec), Tm값(30sec), 72℃(30 ec)에서 45 cycles, 4℃ 휴지조건의 프로그램으로 실시하였다(Table 1).
- Genomic DNA추출은 Toyobo Mag Extracter(MTNPK-501)를 이용하여, 제공된 매뉴얼에 따라 genomic DNA를 추출하였다. PCR 반응은 Prime Taq Premix(Genetbio, G-3000)을 사용하여 GeneAmp PCR System 9700 기계로 operon primer set을 사용하여 95℃(5 min) 1 cycle, 94℃(30 sec), Tm값(30sec), 72℃(30 ec)에서 45 cycles, 4℃ 휴지조건의 프로그램으로 실시하였다(Table 1). 전기영동은 1.
- SSI들 중 동핵균주를 선발하기 위해 RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) 분석을 실시하였다. DNA 추출을 위해 CDA배지에 균사체를 배양하여, 25℃ 배양기에서 15일 동안 배양하였다.
- 교잡주를 형성하기 위해 RAPD분석으로 선발된 잠재적인 동핵균주의 단포자(putative homokaryotic SSI)는 CDA배지에서 교잡되었다. 각 동핵균주의 SSI는 10mm정도 사이로 균사체를 서로 대치배양하고 균총이 만나는 부위를 떼어서 2차례 CDA배지에 계대배양 하였다. 교잡유무는 교배형 유전자(HD1 homeodomain transcription factor A mating type protein) a1-1-L3(5’-GTG AAC GAC GTG ATG GTG AC-3’), a1-1-R3(5’-TTC ACT CAT GGC TGA TCT CG-3’)의 특이유전자 마커를 이용하여 PCR로 밴드다형성을 비교하여 확인하였다.
- 교잡유무는 교배형 유전자(HD1 homeodomain transcription factor A mating type protein) a1-1-L3(5’-GTG AAC GAC GTG ATG GTG AC-3’), a1-1-R3(5’-TTC ACT CAT GGC TGA TCT CG-3’)의 특이유전자 마커를 이용하여 PCR로 밴드다형성을 비교하여 확인하였다.
- 교잡이 확인된 균주들 중에서 우수계통을 선발하기 위해 교잡주형태적 특성을 살펴보았다. 교잡주에 대한 재배는 종균 500 g/box에 볏짚퇴비배지 10 kg/box을 이용하여 모본선발과정과 동일하게 진행되었으며, 우수계통을 선발하기 위하여 3회에 걸쳐 실시하였다.
- 교잡이 확인된 균주들 중에서 우수계통을 선발하기 위해 교잡주형태적 특성을 살펴보았다. 교잡주에 대한 재배는 종균 500 g/box에 볏짚퇴비배지 10 kg/box을 이용하여 모본선발과정과 동일하게 진행되었으며, 우수계통을 선발하기 위하여 3회에 걸쳐 실시하였다. 1차로 전체 교잡주를 1상자씩 재배하고, 2차로 선발된 10점의 교잡주를 3상자씩 재배하고, 3차로 선발된 6점의 교잡주를 3상자씩 재배하였다.
- 재배적 특성으로는 균배양기간, 초발이일수와 재배기간이 조사되었고, 형태적 특성으로는 개체중, 수확량, 갓의 직경 및 높이, 대의 길이 및 두께를 측정하였다. 마지막으로 자실체의 품질을 조사하기 위해 자실체의 물리성 중 갓과 대의 경도(TA1 Texture Analyzer, LLOYD, UK), 갓과 대의 명도값(Chromameter(CR-400), Minolta Co, Japan)이 측정되었다.
- DNA 추출을 위해 CDA배지에 균사체를 배양하여, 25℃ 배양기에서 15일 동안 배양하였다. 배양 후 scraper를 이용하여 배지를 제외한 균사를 회수하여, 1.5 ml tube에 옮기고 48시간 동안 동결건조(오페론 FDU-7006, 6 L) 한 후 액체질소를 이용하여 막자사발로 갈았다. Genomic DNA추출은 Toyobo Mag Extracter(MTNPK-501)를 이용하여, 제공된 매뉴얼에 따라 genomic DNA를 추출하였다.
- 도말된 배지는 25℃ 조건에서 배양하면서 단포자(Single spore isolate, SSI)로부터 균사가 자라면 새로운 배지에 계대하여 다시 배양하였다. 분리된 SSI은 2주 동안 25℃에서 배양되어 1주일 간격으로 균사 생장길이와 균총의 특징을 조사하였다.
- 수집된 갈색양송이버섯 12개 균주에서 갓의 직경과 두께, 대의 길이와 두께, 수확량과 개체중을 측정하였고, 각 균주들의 포자를 수집하였다(Table 2). 데이터를 분석한 결과 ASI1164와 ASI1175균주가 형태적으로 우수하고, 다수확 균주로 조사되어 우수모본으로 선발되었다.
- 신품종 ‘호감’에 대한 재배적 및 형태적 특성을 조사하기 위하여 기존에 육성된 ‘다향’ 품종을 대조품종으로 하여 재배시험을 실시하였다.
- 수집된 갈색양송이 12개 중 우수모본을 선발하기 위해 재배를 실시하였다. 우선 모균주들은 접종원을 만들기 위해 CDA(compost dextrose agar, compost dextrose agar, 4% dried compost, 0.7% Malte extract, 1% sucrose, 2% agar)배지에서 14일 동안 배양되고, 곡립배지(20 kg wheat, 0.6 kg gypsum, 0.3 kg calcium carbonate/100 bottles)에 접종원을 접종한 후, 균주에 따라 15~30일정도 배양 후 종균을 만들었다. 배지는 발효볏짚퇴비배지로 야외발효된 배지를 충남 부여에서 구입하여 후발효를 배지 온도 65℃에서 6시간, 55℃에서 약 7일 발효한 배지를 이용하였다.
- 복토 15일 뒤 발이유도를 위하여 온도 16±2℃, 습도 85% 조건으로 변화를 주었다. 자실체는 갓이 완전히 피기 전, 농가에서 주로 생산되는 형태로 1~2주기 동안 수확하여 수확량, 개체중, 갓의 직경 및 두께, 대의 두께 및 길이를 측정하였다.
- 최종적으로 선발된 계통은 ‘다향’을 대조품종으로 하여 재배적, 형태적 특성비교를 위하여 재배되었다. 재배적 특성으로는 균배양기간, 초발이일수와 재배기간이 조사되었고, 형태적 특성으로는 개체중, 수확량, 갓의 직경 및 높이, 대의 길이 및 두께를 측정하였다. 마지막으로 자실체의 품질을 조사하기 위해 자실체의 물리성 중 갓과 대의 경도(TA1 Texture Analyzer, LLOYD, UK), 갓과 대의 명도값(Chromameter(CR-400), Minolta Co, Japan)이 측정되었다.
- PCR 반응은 Prime Taq Premix(Genetbio, G-3000)을 사용하여 GeneAmp PCR System 9700 기계로 operon primer set을 사용하여 95℃(5 min) 1 cycle, 94℃(30 sec), Tm값(30sec), 72℃(30 ec)에서 45 cycles, 4℃ 휴지조건의 프로그램으로 실시하였다(Table 1). 전기영동은 1.5% agarose gel에서 50 V로 90분간 수행하였고, 전기영동은 ImageQuant 400(GE healthcare Bio-sciences) 기계의 IQuant Capture 400프로그램을 이용하여 확인하였다.
- 종균 완성 후 한 상자(523×366×183 mm, 26 L)에 후발효된 퇴비배지 10 kg/box를 담아 종균 500 g/box으로 접종을 실시하였다.
- 종균 완성 후 한 상자(523×366×183 mm, 26 L)에 후발효된 퇴비배지 10 kg/box를 담아 종균 500 g/box으로 접종을 실시하였다. 종균이 접종된 배지는 온도 25℃, 습도 65% 조건에서 15일정도 배양하고 균이 80% 배양되었을때, 복토를 실시하였다. 복토 15일 뒤 발이유도를 위하여 온도 16±2℃, 습도 85% 조건으로 변화를 주었다.
대상 데이터
- 1차로 전체 교잡주를 1상자씩 재배하고, 2차로 선발된 10점의 교잡주를 3상자씩 재배하고, 3차로 선발된 6점의 교잡주를 3상자씩 재배하였다. 3차 재배에서 최종적으로 우수계통 1 계통을 선발하였다.
- 3 kg calcium carbonate/100 bottles)에 접종원을 접종한 후, 균주에 따라 15~30일정도 배양 후 종균을 만들었다. 배지는 발효볏짚퇴비배지로 야외발효된 배지를 충남 부여에서 구입하여 후발효를 배지 온도 65℃에서 6시간, 55℃에서 약 7일 발효한 배지를 이용하였다. 종균 완성 후 한 상자(523×366×183 mm, 26 L)에 후발효된 퇴비배지 10 kg/box를 담아 종균 500 g/box으로 접종을 실시하였다.
- 이 중 수확량, 개체중 및 형태순으로 우수한 특성을 보이는 7점의 교잡 주를 선발하였다. 선발된 7점의 교잡주의 교잡유무는 교배형 유전자를 이용한 a1-1-L3, a1-1-R3의 특이유전자 마커를 이용하여 Fig. 2과 같이 교잡이 안 된 C13 교잡주를 제외하고 Table 4과 같이 6점을 선발하였다. 선발된 균주에서 최종적으로 동핵균주 ASI1164-37과 ASI1175-66의 교잡주인 C34을 수확량 및 형태적으로 우수한 계통으로 육성하고, 품종명으로 ‘감색을 띄는 버섯이 좋다(好)’는 의미로 ‘호감’이라 명명하였다.
- 수집된 갈색양송이 12개 중 우수모본을 선발하기 위해 재배를 실시하였다. 우선 모균주들은 접종원을 만들기 위해 CDA(compost dextrose agar, compost dextrose agar, 4% dried compost, 0.
- 교잡주에 대한 교잡을 확인하기 위하여 먼저 44점의 교잡주 모두를 대상으로 재배시험을 수행한 결과 모두에서 자실체가 형성된다는 사실을 확인하였다. 이 중 수확량, 개체중 및 형태순으로 우수한 특성을 보이는 7점의 교잡 주를 선발하였다. 선발된 7점의 교잡주의 교잡유무는 교배형 유전자를 이용한 a1-1-L3, a1-1-R3의 특이유전자 마커를 이용하여 Fig.
성능/효과
- ‘호감’ 품종은 ‘다향’에 비해 초발이일수와 수확기간이 3일 더 길었지만, 개체중은 1.35배 증수되었으며, 이 품종은 국내 양송이품종의 다양화에 기여할 것으로 여겨진다.
- 동핵균주들의 균사생장과 밀도, 균총의 특성은 Table 3와 같다. ASI1164균주에서 선발된 동핵균주들의 균사밀도가 전반적으로 낮았고, ASI1175균주는 동핵균주의 균사생장이 느렸다. 선발된 균주들은 교잡을 통해 44점의 교잡주를 형성하였다.
- 데이터를 분석한 결과 ASI1164와 ASI1175균주가 형태적으로 우수하고, 다수확 균주로 조사되어 우수모본으로 선발되었다. 각 균주의 수집된 포자수는 ASI1040은 98점, ASI1086은 220점, ASI1159는 178점, ASI1164는 150점, ASI1175는 100점, ASI1191은 120점, ASI1325는 37점 수집되었다. ASI1039, ASI1041, ASI1167, ASI1177은 포자가 수집되지 않았다.
-
동핵균주 교잡
교잡주를 형성하기 위해 RAPD분석으로 선발된 잠재적인 동핵균주의 단포자(putative homokaryotic SSI)는 CDA배지에서 교잡되었다. 각 동핵균주의 SSI는 10mm정도 사이로 균사체를 서로 대치배양하고 균총이 만나는 부위를 떼어서 2차례 CDA배지에 계대배양 하였다.
- 교잡주에 대한 교잡을 확인하기 위하여 먼저 44점의 교잡주 모두를 대상으로 재배시험을 수행한 결과 모두에서 자실체가 형성된다는 사실을 확인하였다. 이 중 수확량, 개체중 및 형태순으로 우수한 특성을 보이는 7점의 교잡 주를 선발하였다.
- 수집된 갈색양송이버섯 12개 균주에서 갓의 직경과 두께, 대의 길이와 두께, 수확량과 개체중을 측정하였고, 각 균주들의 포자를 수집하였다(Table 2). 데이터를 분석한 결과 ASI1164와 ASI1175균주가 형태적으로 우수하고, 다수확 균주로 조사되어 우수모본으로 선발되었다. 각 균주의 수집된 포자수는 ASI1040은 98점, ASI1086은 220점, ASI1159는 178점, ASI1164는 150점, ASI1175는 100점, ASI1191은 120점, ASI1325는 37점 수집되었다.
- 선발된 균주에서 최종적으로 동핵균주 ASI1164-37과 ASI1175-66의 교잡주인 C34을 수확량 및 형태적으로 우수한 계통으로 육성하고, 품종명으로 ‘감색을 띄는 버섯이 좋다(好)’는 의미로 ‘호감’이라 명명하였다.
- 수확량은 ‘호감’ 품종에서 약간 우수하였으며 개체중은 ‘호감’ 품종이 36.6g으로 ‘다향’ 품종보다 1.4배 증수되었다.
- 신품종 ‘호감’의 균사생장은 CDA배지에서 25℃ 조건이 가장 좋았으며, 버섯발생온도와 버섯생육온도는 14~18℃가 최적온도였다.
- 이 품종의 ‘호감’품종의 CDA배지에서 균사생장은 25℃에서 가장 좋았으며, 버섯발생온도와 버섯생육온도는 14~18℃가 최적온도였다.
- 최종적으로 선발된 계통은 ‘다향’을 대조품종으로 하여 재배적, 형태적 특성비교를 위하여 재배되었다.
- 한편, 동핵균주를 선발하기 위하여 operon 프라이머 세트 중 opc14(5’-TGCGTGCTTG-3’) 프라이머를 선발하고, 각 단포자의 DNA를 대상으로 PCR을 수행한 결과 ASI1164는 11점, ASI1175는 4점이 잠재적으로 밴드의 다형성이 적은 동핵균주로 확인되었다(Fig 1).
- 형태적 차이로는 갓과 대의 두께가 ‘다향’보다 두꺼웠으며, 물리성에서 경도는 ‘호감’이 약간 무르고, 갓과 대의 명도 값이 높아 밝은 갈색을 보였다(Table 6).
- 형태적 차이로는 갓과 대의 두께가 2010년도에 육성된 ‘다향’보다 두꺼웠으며, 갓은 밝은 갈색을 보였다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.