삼채 추출물의 인슐린 저항성 개선 효과 및 기전 탐색 Allium hookeri Extract Improves Type 2 Diabetes Mellitus in C57BL/KSJ Db/db Obese Mouse via Regulation of Hepatic Lipogenesis and Glucose Metabolism원문보기
본 연구는 우리나라에서 재배한 삼채 추출물의 주요생리활성 물질을 2형 당뇨 쥐에 투여하였을 때 인슐린 저항성 개선효과와 췌장에서 β-cell의 형태 및 간 조직의 2형 당뇨 관련 단백질의 발현을 확인 함으로써 그 메카니즘을 확인코자 하였다. 특히 TZDS당뇨약 계열로 현재 시판중인 actoz와 활성을 비교 함으로써 그 유효성 정도를 살펴보고자 본 실험을 디자인하였다. 먼저 식이섭취량, 물 섭취량의 경우, Control군은 2형 당뇨 특징인 다식, 다뇨, 다갈의 형태로 증가하였으나, 삼채 추출물 투여로 식이 및 물 섭취량이 감소하는 경향을 보였다. 식이 투여 2시간 후 혈당변화와 OGTT 검사결과, 2형 당뇨인 Control군에서 혈당의 농도가 가장 높았으나 삼채 추출물 8주 경구투여로 인해 안정화되는 것을 확인할 수 있었으며, serum의 glucose농도 또한 삼채 추출물 투여로 2형당뇨 control군에 비해 혈당이 감소한 것을 확인할 수 있었다. HbA1c (당화혈색소)는 2형 당뇨군(control)에서 9% 수치 범위로 고혈당 범위였으나, 삼채 추출물 섭취로 인하여 Positive control군(actoz 투여군) 7% 수준으로 감소하는 경향을 확인할 수 있었으며, insulin농도는 2형 당뇨인 Control군에서 insulin 농도가 1 ng/ml로 가장 낮은 농도였으며, 삼채 추출물 및 SAC 1.5 ng/ml수준으로 insulin수치가 상승하는 것을 확인할 수 있었다. 혈중 triglyceride, total cholesterol 및 LDL-cholesterol 수치 모두 시료 투여군에서 혈중 지질관련 인자의 농도가 감소하는 것을 확인할 수 있었으며, 특히 AH 400군의 경우 triglyceride, total cholesterol 및 LDL-cholesterol 농도가 각각 482.86±13.40 mg/dl, 163.56±13.24 mg/dl, 142.04±3.24 mg/dl로 대조군에 비해 약 50% 감소한 결과를 나타내었다. 간장 조직 중 지질 과산화의 함량의 경우, 2형 당뇨인 Control군에서 467.74±1.12 MDA nmole/g of tissue로 삼채 추출물 투여(AH 400)로 319.61±26.98 MDA nmole/g of tissue 로 Normal군과 비슷한 수준으로 혈중 lipid peroxide의 함량이 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 간장조직을 H&E염색한 결과, Normal군에 비하여 2형 당뇨인 Control군의 간 조직에서 많은 지방적이 나타나 지방간이 확인되었으나, Positive control 및 삼채 추출물 투여에 의해 지방적의 크기와 수가 많이 줄어드는 결과를 얻어 조직학적 검사상 지방간의 소견이 현저히 호전되었으며, 췌장에서 insulin 면역화학 염색 결과 2형 당뇨로 췌도 세포가 거의 손상된 것과는 대조적으로, 삼채 추출물을 투여한 결과 정상군과 유사한 형태의 췌도 세포가 확인되었으며 췌도 세포의 형태가 다양한 정도의 과 형성을 보이는 것이 확인되었다. 또한 간장 조직의 PPARγ, PDK4, SREBP-1, FOX0 1의 발현을 확인한 결과, 발현이 2형 당뇨인 Control군에서 모두 발현이 증가하였으나, 삼채 추출물 투여로 인해 발현 정도가 낮게 나타나 앞서 확인하였던 glucose 및 HbA1c 및 insulin농도의 결과와 상통함을 확인하였다. 이들의 결과로 미루어 볼 때, 삼채 메탄올 추출물의 8주간 경구 투여로 인하여 2형 당뇨에 관여하는 PPARγ 단백질 및 비만 관련 단백질 인자를 조절하였으며, insulin농도 및 식후 혈당조절에도 도움을 주는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 췌장의 insulin 면역화학염색 결과, 췌도 세포 형태 및 insulin 합성에도 긍정적인 역할을 하는 것으로 미루어 보아 2형 당뇨에 대한 치료효과가 큰 것으로 사료 된다.
본 연구는 우리나라에서 재배한 삼채 추출물의 주요생리활성 물질을 2형 당뇨 쥐에 투여하였을 때 인슐린 저항성 개선효과와 췌장에서 β-cell의 형태 및 간 조직의 2형 당뇨 관련 단백질의 발현을 확인 함으로써 그 메카니즘을 확인코자 하였다. 특히 TZDS당뇨약 계열로 현재 시판중인 actoz와 활성을 비교 함으로써 그 유효성 정도를 살펴보고자 본 실험을 디자인하였다. 먼저 식이섭취량, 물 섭취량의 경우, Control군은 2형 당뇨 특징인 다식, 다뇨, 다갈의 형태로 증가하였으나, 삼채 추출물 투여로 식이 및 물 섭취량이 감소하는 경향을 보였다. 식이 투여 2시간 후 혈당변화와 OGTT 검사결과, 2형 당뇨인 Control군에서 혈당의 농도가 가장 높았으나 삼채 추출물 8주 경구투여로 인해 안정화되는 것을 확인할 수 있었으며, serum의 glucose농도 또한 삼채 추출물 투여로 2형당뇨 control군에 비해 혈당이 감소한 것을 확인할 수 있었다. HbA1c (당화혈색소)는 2형 당뇨군(control)에서 9% 수치 범위로 고혈당 범위였으나, 삼채 추출물 섭취로 인하여 Positive control군(actoz 투여군) 7% 수준으로 감소하는 경향을 확인할 수 있었으며, insulin농도는 2형 당뇨인 Control군에서 insulin 농도가 1 ng/ml로 가장 낮은 농도였으며, 삼채 추출물 및 SAC 1.5 ng/ml수준으로 insulin수치가 상승하는 것을 확인할 수 있었다. 혈중 triglyceride, total cholesterol 및 LDL-cholesterol 수치 모두 시료 투여군에서 혈중 지질관련 인자의 농도가 감소하는 것을 확인할 수 있었으며, 특히 AH 400군의 경우 triglyceride, total cholesterol 및 LDL-cholesterol 농도가 각각 482.86±13.40 mg/dl, 163.56±13.24 mg/dl, 142.04±3.24 mg/dl로 대조군에 비해 약 50% 감소한 결과를 나타내었다. 간장 조직 중 지질 과산화의 함량의 경우, 2형 당뇨인 Control군에서 467.74±1.12 MDA nmole/g of tissue로 삼채 추출물 투여(AH 400)로 319.61±26.98 MDA nmole/g of tissue 로 Normal군과 비슷한 수준으로 혈중 lipid peroxide의 함량이 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 간장조직을 H&E염색한 결과, Normal군에 비하여 2형 당뇨인 Control군의 간 조직에서 많은 지방적이 나타나 지방간이 확인되었으나, Positive control 및 삼채 추출물 투여에 의해 지방적의 크기와 수가 많이 줄어드는 결과를 얻어 조직학적 검사상 지방간의 소견이 현저히 호전되었으며, 췌장에서 insulin 면역화학 염색 결과 2형 당뇨로 췌도 세포가 거의 손상된 것과는 대조적으로, 삼채 추출물을 투여한 결과 정상군과 유사한 형태의 췌도 세포가 확인되었으며 췌도 세포의 형태가 다양한 정도의 과 형성을 보이는 것이 확인되었다. 또한 간장 조직의 PPARγ, PDK4, SREBP-1, FOX0 1의 발현을 확인한 결과, 발현이 2형 당뇨인 Control군에서 모두 발현이 증가하였으나, 삼채 추출물 투여로 인해 발현 정도가 낮게 나타나 앞서 확인하였던 glucose 및 HbA1c 및 insulin농도의 결과와 상통함을 확인하였다. 이들의 결과로 미루어 볼 때, 삼채 메탄올 추출물의 8주간 경구 투여로 인하여 2형 당뇨에 관여하는 PPARγ 단백질 및 비만 관련 단백질 인자를 조절하였으며, insulin농도 및 식후 혈당조절에도 도움을 주는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 췌장의 insulin 면역화학염색 결과, 췌도 세포 형태 및 insulin 합성에도 긍정적인 역할을 하는 것으로 미루어 보아 2형 당뇨에 대한 치료효과가 큰 것으로 사료 된다.
Diabetes has been one of major health risks in industrialized countries. Allium hookeri is a wild herb distributed in India and Myanmar. The root of the plant has been used as food and medicine in Southeast Asia. We investigated Allium hookeri extract improves type 2 diabetes mellitus in C57BL/KSJ d...
Diabetes has been one of major health risks in industrialized countries. Allium hookeri is a wild herb distributed in India and Myanmar. The root of the plant has been used as food and medicine in Southeast Asia. We investigated Allium hookeri extract improves type 2 diabetes mellitus in C57BL/KSJ db/db obese mouse. C57BL/KSJ db/db obese mouse arise out of Type 2 diabetes and we treated Allium hookeri methanol extract 400 mg/kg (AH 400), 800 mg/kg (AH 800), positive control group (thiazolidinedine;TZDs) were administered orally for 8weeks. AH treated group normalized lipid enzyme system (triglyceride, total cholesterol, HDL-cholesterol and LDL-cholesterol) and serum glucose, HbA1c and plasma insulin level. AH treated group recovered β-cell damage by hyperglycemia and fatty liver disease. AH treated group significantly up regulated expression of Peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPAR-γ), pyruvate dehydrogenase kinase4 (PDK4), Sterol regulatory element-binding protein 1c (SREBP 1) and fork head box O1 (FOX 01) proteins in C57BL/KSJ db/db obese mouse liver. And we found that AH treated group decreased hepatic malondialdehyde formation in C57BL/KSJ db/db obese mouse liver. These results indicate that Allium hookeri methanol extract might be a potential anti-diabetic agent and could be useful in the treatment of type 2 diabetes mellitus.
Diabetes has been one of major health risks in industrialized countries. Allium hookeri is a wild herb distributed in India and Myanmar. The root of the plant has been used as food and medicine in Southeast Asia. We investigated Allium hookeri extract improves type 2 diabetes mellitus in C57BL/KSJ db/db obese mouse. C57BL/KSJ db/db obese mouse arise out of Type 2 diabetes and we treated Allium hookeri methanol extract 400 mg/kg (AH 400), 800 mg/kg (AH 800), positive control group (thiazolidinedine;TZDs) were administered orally for 8weeks. AH treated group normalized lipid enzyme system (triglyceride, total cholesterol, HDL-cholesterol and LDL-cholesterol) and serum glucose, HbA1c and plasma insulin level. AH treated group recovered β-cell damage by hyperglycemia and fatty liver disease. AH treated group significantly up regulated expression of Peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPAR-γ), pyruvate dehydrogenase kinase4 (PDK4), Sterol regulatory element-binding protein 1c (SREBP 1) and fork head box O1 (FOX 01) proteins in C57BL/KSJ db/db obese mouse liver. And we found that AH treated group decreased hepatic malondialdehyde formation in C57BL/KSJ db/db obese mouse liver. These results indicate that Allium hookeri methanol extract might be a potential anti-diabetic agent and could be useful in the treatment of type 2 diabetes mellitus.
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문제 정의
본 연구에서는 앞의 연구결과를 토대로 우리나라에서 재배한 삼채 뿌리 메탄올 추출물을 2형 당뇨 쥐에 8주간 경구투여하였을 때 췌장에서 β-cell의 형태 관찰 및 간 조직에서 2형 당뇨 관련 단백질의 발현을 확인 함으로서 인슐린 저항성 개선 효과를 확인코자 하였다.
제안 방법
2형 당뇨의 내당능에 미치는 영향을 검토하기 위해, 시료투여 3주째 포도당(1 g/kg body weight) 용액을 경구투여 한 후, 꼬리 정맥으로부터 채혈하여 혈당치를 측정하였다(Fig. 1). 모든 시료 투여군에서 포도당 투여 후 30분~60분 사이 가장 높은 혈당치를 보였으며, 포도당 투여 30분 뒤 정상군의 혈당은 149.
9% 생리식염수로 관류시켜 조직 내 혈액을 제거하고, 장기를 적출하여 생리식염수에 세척한 후, 여지로 수분을 제거하고 무게를 측정하였다. Glucose, Total cholesterol, Triglycer- ide, HDL-cholesterol, LDL-cholesterol 의 경우 혈청 생화학기 (Roche Ltd., Basel, Switzerland)로 분석하였으며, HbA1C의 경우 서울 의과학 연구소에 의뢰하여 값을 얻었다. Insulin의 경우 ultra sensitive mouse insulin ELISA Kit (Crystal Chem Inc.
, Basel, Switzerland)로 분석하였으며, HbA1C의 경우 서울 의과학 연구소에 의뢰하여 값을 얻었다. Insulin의 경우 ultra sensitive mouse insulin ELISA Kit (Crystal Chem Inc., Downers Grove, USA)을 이용하여 plate reader기 (BioRad, Hercules, USA)를 사용하여 측정하였다.
1× PBST buffer로 10 min, 3회 washing 하였다. Western Blot de- tection kit (Biorad, hercules, USA)을 이용하여 membrane과 반응시킨 후 X-Ray film에 감광시켜 발현 정도를 관찰하였으며, GAPDH로 보정하여 비교하였다.
혈액으로부터 실온에 30분간 응고시킨 후 3, 000 rpm, 4℃ 에서 15분간 원심분리 처리하여 혈청을 회수하였으며, 이를 혈청 생화학 검사의 분석시료로 사용하였다. 간장 및 췌장은 0.9% 생리식염수로 관류시켜 조직 내 혈액을 제거하고, 장기를 적출하여 생리식염수에 세척한 후, 여지로 수분을 제거하고 무게를 측정하였다. Glucose, Total cholesterol, Triglycer- ide, HDL-cholesterol, LDL-cholesterol 의 경우 혈청 생화학기 (Roche Ltd.
고형사료와 물을 총 8주간 공급하면서 ㈜동남의 화학연구원 동물사에서 일정한 조건(온도: 22±1℃, 습도: 55±3%, 명암: 12 시간 light/ dark cycle)으로 1주일간 적응시킨 후, 식이를 8주간, 매일 같은 시간, 경구 투여하였다.
군 구성은 정상군(Wild type마우스(C57BL/KSJ-m+/ m+)), control군(C57BL/KSJ db/db obese mouse)은 생리식염수를 투여하였으며, positive control군은 현재 당뇨 치료제로 사용하고 있는 actoz (성분명:pioglitazone, 동아에스티, 서울, 한국) 0.06 ㎎/㎏로 경구 투여하였다. 시료 투여군은 삼채 메탄올 추출물을 각각 400, 800 ㎎/㎏용량으로 8주간 경구 투여하였다.
그 다음 2% goat serum을 30분간 처리하여 Ig G의 비특이적 결합을 차단시켰다.
단백질 분해효소에 의한 항원성의 부활과 열처리에 의한 항원성의 회복 방법[10]을 이용하여 항원성을 충분히 부활시킨 후, 메탄올에 3% 농도가 되게 과산화수소를 넣은 혼합용액을 만들어 절편에 처리함으로써 내인성 효소활성을 제거하였다. 그 다음 2% goat serum을 30분간 처리하여 Ig G의 비특이적 결합을 차단시켰다.
06 ㎎/㎏로 경구 투여하였다. 시료 투여군은 삼채 메탄올 추출물을 각각 400, 800 ㎎/㎏용량으로 8주간 경구 투여하였다. 본 연구는 ㈜동남의화학연구원 동물실험위원회 (Southest Medi-Chem Institue, Institutional Animal Care and Use Committee)의 방침 및 범규에 따라 진행되었다(윤리승인번호: IKSE- 14-06).
식이 섭취량은 공급량에서 잔량을 감하여 계산하였다. 식이효율(Food efficiency ratio, FER) 은 체중증가량을 같은 기간 내 식이 섭취량을 나누어 환산하였다.
실험식이 투여 3주 후, 12시간 이상 절식시킨 후 꼬리 정맥에서 채혈하여 공복 시 혈당을 측정하였다. 이후 glucose (1 mg/ kg, B.
실험식이 투여 8주 후 최종일에 실험동물을 12시간 이상 절식시킨 후, CO2로 마취시켜 복부 대동맥으로부터 채혈하였다. 혈액으로부터 실온에 30분간 응고시킨 후 3, 000 rpm, 4℃ 에서 15분간 원심분리 처리하여 혈청을 회수하였으며, 이를 혈청 생화학 검사의 분석시료로 사용하였다.
파라핀에 포매 하고 block을 만들었다. 이것을 rotary microtome을 사용하여 5 μm의 두께로 조직절편을 만들어 hematoxylin-eosin으로 염색 한 후 광학현미경(Nikon Co., Tokyo, Japan)으로 관찰하였다.
4)를 가한 후, 조직을 마쇄하고 이 10% 마쇄액에 동일한 buffer를 동량 가하여 3시간 pre-incubation 시켰다. 이후 8.1% sodium dodecyl sulfate 와 20% acetate buffer (pH 3.5)및 발색의 목적으로 0.8% thio- barbituric acid 를 가한 후, 95℃에서 1시간 동안 반응시켜 실온에서 냉각 후에 n-BuOH : Pyridine (15:1)을 첨가하여 15분간 원심 분리하여 생성된 홍색의 n-BuOH : Pyridine층을 취하여, 파장 532nm에서 그 흡광도를 측정하였다. Lipid peroxidase 함량은 간장조직 1 g당 malondialdehyde nmole로 표시하였다.
채혈하여 공복 시 혈당을 측정하였다. 이후 glucose (1 mg/ kg, B.W.) 용액을 경구투여기로 투여하고 30, 60, 90, 120 및 150분에 꼬리 정맥에서 채혈하여 혈당측정계(Roche Diagnos- tics Ltd., Basel, Switzerland)를 이용하여 혈당을 측정하였다.
적출한 췌장 조직의 주변의 림프절 또는 지방조직들을 깨끗이 제거한 후 Biotin 용액에 고정하고 에탄올을 이용하여 탈수시킨 후, 투명과정을 거쳐 파라핀을 침투시켰다. 준비된 조직을 파라핀에 포매 하여 순차적으로 박절(4 μm)하였다.
체중의 변화는 주 1회, 같은 요일, 같은 시간대에 무게를 측정하여 나타내었다. 식이 섭취량은 공급량에서 잔량을 감하여 계산하였다.
췌장조직에서 췌도 세포 관찰을 위하여 인슐린항체(DAKO, Glostrup, Denmark)와 4℃에서 하루 밤 반응시킨 후 PBS로 5분씩 3회 수세하고, peroxidase가 결합되어 있는 anti-IgG로 반응시킨 후 다시 수세과정을 거쳐 3.3'-diaminobenzidine tet- rahydrochloride (DAB)로 발색시켰다. Hematoxylin으로 대조 염색을 실시하고 탈수과정을 거친 후 커버 슬라이드를 덮어 봉입하였다.
혈당은 실험식이투여 4주차~8주차까지 주 2회, 식후 2시간 후, 꼬리 정맥에서 채혈하여 혈당측정기(Roche Diagnostics Ltd., Basel, Switzerland)로 혈당을 측정하였다.
혈액으로부터 실온에 30분간 응고시킨 후 3, 000 rpm, 4℃ 에서 15분간 원심분리 처리하여 혈청을 회수하였으며, 이를 혈청 생화학 검사의 분석시료로 사용하였다. 간장 및 췌장은 0.
대상 데이터
본 실험에 사용한 삼채(Allium hookeri)는 2013년 10월 지리산 하동촌 농장(하동, 한국) 으로부터 구매하여 사용하였다. 삼채(Allium hookeri)의 뿌리 500 g을 methanol (Sigma Chemi- cal Co.
사용하였다. 삼채(Allium hookeri)의 뿌리 500 g을 methanol (Sigma Chemi- cal Co., St. Louis, Mo. USA)로 3회 추출한 뒤 여과하고, rotary evaporator로 감압농축 한 결과 약 10.2%의 수율을 얻었으며, 이를 시료로 사용하였다.
실험동물은 5주령의 수컷 db/db 마우스(C57BL/KSJ db/ db obese mouse)와 Wild type마우스(C57BL/KSJ-m+/m+)을 중앙실험동물(서울, 한국)에서 제공받아 사용하였다.
데이터처리
Data followed by different superscript are statistically significant by Duncan’s multiple range test (p<0.05).
Data followed by different superscript are statistically significant by Duncan’s multiple range test (p<0.05).
Data followed by different superscript are statistically significant by Duncan’s multiple range test (p<0.05).
Data followed by different superscript are statistically significant by Duncan’s multiple range test (p<0.05).
05 이하일 경우 통계적으로 유의한 것으로 검정하였다. 각 항목에 대한 유의한 차이를 나타내는지의 비교분석은 Student’s t-test one-way ANOVA (Duncan’s multiple range test)를 이용하여 통계적 유의성을 검증하였다.
통계적 검정은 SPSS통계 프로그램을 이용하여 수행하였으며, p<0.05 이하일 경우 통계적으로 유의한 것으로 검정하였다. 각 항목에 대한 유의한 차이를 나타내는지의 비교분석은 Student’s t-test one-way ANOVA (Duncan’s multiple range test)를 이용하여 통계적 유의성을 검증하였다.
이론/모형
Bradford assay [19]를 이용하여 단백질을 정량 한 후, 단백질의 SDS-PAGE (Polyacryl Amide Gel Electrophoresis, Biorad, hercules, USA)를 이용하여 size 별로 분리하였다. Semi-dry transfer system (Biorad, hercules, USA)을 이용하여 NC (nitro cellulose) membrane에 이동시킨 후 5% skim milk 를 함유한 Blocking buffer (0.
단백질의 함량은 Lowry 등의 방법[15]에 준하여 bovine se- rum albumin (Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo. USA)를 표준품으로 하여 측정하였다.
성능/효과
2형 당뇨 Control군에서 혈중 triglyceride 농도는 840.30±15.21 mg/dl로 정상군의 58.85±2.24 mg/dl에 비하여 월등하게 높게 나타났으나, 삼채 추출물 400㎎/㎏, 800㎎/㎏ 투여로 인하여 각각 482.86±13.40 mg/dl, 593.66±21.11 mg/dl의 농도로 감소 효과를 확인할 수 있었다. Total cholesterol 및 LDL-cho- lesterol 농도 또한, 2형 당뇨인 Control 군에서 각각 289.
4와 같다. Normal군에 비하여 2형 당뇨인 Control군의 간 조직에서 많은 지방적이 나타나 지방간이 확인되었으나 Positive control 및 삼채 추출물 투여에 의해 지방적의 크기와 수가 많이 줄어드는 결과를 얻었다.
11 mg/dl의 농도로 감소 효과를 확인할 수 있었다. Total cholesterol 및 LDL-cho- lesterol 농도 또한, 2형 당뇨인 Control 군에서 각각 289.10± 21.22 mg/dl, 270.69±3.14 mg/dl이었으나, 삼채 추출물 및 ac- toz약물의 8주 투여로 혈중 지질관련 인자 농도가 모두 감소하는 것을 확인할 수 있었다.
강 등[11]의 보고에서와 같이, 간 조직내 PPARγ (A), PDK4 (B), SREBP-1 (C), Forkhead box protein O1 (FOX0 1) (D) 의 단백질 발현은 2형 당뇨인 Control군에서 모두 증가하는 것을 확인할 수 있었으며, Positive control인 actoz 투여로 발현이 상대적을 감소하는 경향을 확인할 수 있었다.
확인하였다. 결과를 종합하여 볼 때, 삼채 메탄올 추출물 8주간의 경구투여로 2형 당뇨 쥐의 간 조직 내 PPARγ, PDK4, SREBP-1, Forkhead box protein O1 (FOX0 1) 단백질 발현을 저해함으로써 지방 및 인슐린 저항성에 영향을 미치는 것으로 사료된다.
결과를 종합해 볼 때, 삼채 추출물 400, 800 ㎎/㎏의 8주 경구 투여에 의해 혈당수치, 당화혈색소 및 insulin 수치에 긍정적인 역할을 하는 것으로 사료된다.
73 mg/dl로 Con- trol군의 혈당에 비해 약 100~130 mg/dl 혈당이 낮았다. 또한 포도당 을 투여한 시간이 지남에 따라, actoz투여한 positive control군과 삼채 추출물 투여군의 감소 경향이 유사한 것을 확인할 수 있었다.
1). 모든 시료 투여군에서 포도당 투여 후 30분~60분 사이 가장 높은 혈당치를 보였으며, 포도당 투여 30분 뒤 정상군의 혈당은 149.33±4.16 mg/dl이었으며, 2형당뇨인 Control군의 혈당은 559.67±18.45 mg/dl로 혈당이 현저히 차이나는 것을 확인할 수 있었다.
5배 감소한 것을 확인할 수 있었다. 물 섭취량 또한, 2형 당뇨인 Control군의 경우28.014±5.470 g/ day였으나, 삼채 추출물 투여로 각각 18.936±3.298 ml/day, 20.147±3.787 ml/day로 감소한 것을 확인할 수 있었다. 이는 2형 당뇨에 의해 다음, 다식 증상을 나타낸 Control군이 삼채 추출물 투여로 인하여 체중증가 및 식이, 물 섭취량이 감소한 것을 확인할 수 있었다.
반영하며 전반적인 당뇨병 관리 지표로 활용된다[12]. 본실험에서 HbA1c 수치는(B), 2형 당뇨군(Control)에서 8.92± 0.05% 였으나, 삼채 추출물 섭취로 인하여 AH 400, AH 800의 수치가 각각 7.52±0.71%, 8.39±0.05% 로 HbA1c농도가 낮아짐을 확인하였다. 이는 Positive control군의 7.
식이 섭취량은2형 당뇨인 Control군에서 9.610±1.98 g/day 였으나, 삼채 추출물을 투여한 AH 400, AH 800 투여군에서는 각각 8.738 ±0.053 g/day, 9.056±0.061 g/day로, 2형 당뇨인 Control군에 비해 약 1.5배 감소한 것을 확인할 수 있었다. 물 섭취량 또한, 2형 당뇨인 Control군의 경우28.
혈당치의 변화를 Table 3에 나타내었다. 식후 2시간의 혈당치를 매주 측정한 결과, Normal군의 혈당치의 변화는 156.00 ±3.61 mg/dl에서 165.23±22.02 mg/dl으로 매주 정상혈당 범위를 유지한 반면, 2형 당뇨인 Control군에의 혈당치 변화는 413.33±57.30 mg/dl에서 570.33±65.58 mg/dl으로 혈당치가 약 157 mg/dl 증가하는 것을 확인하였다.
24 mg/dl로 2형 당뇨인 Control 군에 비해 약 50% 감소한 것을 확인할 수 있었으며, 이 수치는 positive control로 투여한 actoz에 비해서 약 15% 농도가 감소한 것을 확인하였다. 이는 2형 당뇨에 의해 증가된 혈중 TG, TC, LDL-cholesterol가 삼채 추출물 8주 경구투여로 인하여 약 50% 억제되는 경향을 확인할 수 있었다.
이에 반해, 삼채 추출물을 투여한 AH 400, AH 800군의 경우 2형 당뇨인Control군에 비해 혈당치가 각각 340.67±10.19 mg/dl에서 434.00±15.43 mg/dl, 323.67±26.16 mg/dl에서 430.67±17.62 mg/dl로 혈당치가 조절됨을 확인할 수 있었다. 이는 TZD계 약물인 actoz를 투여한 Positive control 군의 혈당치인 313.
특히 삼채 추출물 투여군인 AH 400군의 경우triglyceride, total cholesterol 및 LDL-cholesterol 농도가 각각 482.86± 13.40 mg/dl, 163.56±13.24 mg/dl, 142.04± 3.24 mg/dl로 2형 당뇨인 Control 군에 비해 약 50% 감소한 것을 확인할 수 있었으며, 이 수치는 positive control로 투여한 actoz에 비해서 약 15% 농도가 감소한 것을 확인하였다. 이는 2형 당뇨에 의해 증가된 혈중 TG, TC, LDL-cholesterol가 삼채 추출물 8주 경구투여로 인하여 약 50% 억제되는 경향을 확인할 수 있었다.
농도가 유의하게 감소한 결과와도 일치하였다. 특히 삼채추출물을 8주간 경구투여함으로 2형 당뇨로 인해 지방조직이 많은 간 조직이 점차 개선되는 것을 확인할 수 있었으며, 이는 TZDS계열의 actoz를 투여한 positive control군과 유사한 경향을 보였다.
한편 삼채 추출물 투여군인 AH 400, AH 800군 처리로 인하여 PPARγ (A), PDK4 (B)의 경우, 단백질 발현이Positive con- trol인 actoz 투여군 보다 발현 정도가 조금 더 높았으나, 2형 당뇨인 Control 군에 비해 적게 발현됨을 확인할 수 있었다.
10 ng/ml 로나타나 actoz가 PPAR-γ를 자극하여 insulin 분비증가에 도움이 된다는[22] 결과와 일치하였다. 한편 삼채 추출물을 8주간 경구 투여한 결과, AH 400, AH 800군에서 각각 1.51±0.03 ng/ ml, 1.36±0.01 ng/ml 으로 insulin의 수치가 상승하였으며, 이는 positive control군과 경향이 유사하였다.
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