오철학
(BK21 Plus KNU Multi-Omics based Creative Drug Research Team, College of Pharmacy and Research Institute of Pharmaceutical Sciences, Kyungpook National University)
,
류광현
(BK21 Plus KNU Multi-Omics based Creative Drug Research Team, College of Pharmacy and Research Institute of Pharmaceutical Sciences, Kyungpook National University)
본 연구에서는 3-ethyl ascorbic acid를 표준물질로 이용하여, 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산의 정량법을 개발하였고, 확립된 시험법으로 시중에서 돼지 및 닭의 면역력 증진과 열에 대한 스트레스 경감제로 유통되고 있는 Poustin-C 검체 내 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산의 함량 분석을 실제로 분석하여 시험법의 유효성을 검증하였다. 개발한 분석법의 검증은 직선성, 정확성, 정밀성 및 안정성 시험 등을 통하여 평가하였다. 정밀도 시험은 일내 정밀성과 일간 정밀성으로 나누어 확인하였는데, 일내 및 일간 정밀성은 모두 3.4 % 이내로 매우 우수하였다. 그리고 직선성 실험에서는 상관계수($r^2$)가 0.998 이상으로 우수하였다. 실온에서 6시간까지는 안정하여 실험 도중 분해되지 않음을 확인하였다. 따라서 본 연구에서 개발된 시험법은 검체 내 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산의 함량을 분석하기 위한 공정 시험법으로 활용할 수 있을 것으로 사료된다.
본 연구에서는 3-ethyl ascorbic acid를 표준물질로 이용하여, 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산의 정량법을 개발하였고, 확립된 시험법으로 시중에서 돼지 및 닭의 면역력 증진과 열에 대한 스트레스 경감제로 유통되고 있는 Poustin-C 검체 내 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산의 함량 분석을 실제로 분석하여 시험법의 유효성을 검증하였다. 개발한 분석법의 검증은 직선성, 정확성, 정밀성 및 안정성 시험 등을 통하여 평가하였다. 정밀도 시험은 일내 정밀성과 일간 정밀성으로 나누어 확인하였는데, 일내 및 일간 정밀성은 모두 3.4 % 이내로 매우 우수하였다. 그리고 직선성 실험에서는 상관계수($r^2$)가 0.998 이상으로 우수하였다. 실온에서 6시간까지는 안정하여 실험 도중 분해되지 않음을 확인하였다. 따라서 본 연구에서 개발된 시험법은 검체 내 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산의 함량을 분석하기 위한 공정 시험법으로 활용할 수 있을 것으로 사료된다.
We developed a spectrophotometric assay method for polyethoxylated ascorbic acidusing 3-ethyl ascorbic acid as standard material. The analytical method was validated by linearity, accuracy, precision, and stability. The coefficient of variation of the precision of the assay was less than 3.4 %. The ...
We developed a spectrophotometric assay method for polyethoxylated ascorbic acidusing 3-ethyl ascorbic acid as standard material. The analytical method was validated by linearity, accuracy, precision, and stability. The coefficient of variation of the precision of the assay was less than 3.4 %. The linearity of the calibration curves in the desired concentration range is good ($r^2$>0.998). 3-Ethyl ascorbic acid and polyethoxylated ascorbic acid were stable in stock solution at room temperature for up to at least 6 h. The developed assay could be used for the content analysis of polyethoxylated ascorbic acid in samples.
We developed a spectrophotometric assay method for polyethoxylated ascorbic acidusing 3-ethyl ascorbic acid as standard material. The analytical method was validated by linearity, accuracy, precision, and stability. The coefficient of variation of the precision of the assay was less than 3.4 %. The linearity of the calibration curves in the desired concentration range is good ($r^2$>0.998). 3-Ethyl ascorbic acid and polyethoxylated ascorbic acid were stable in stock solution at room temperature for up to at least 6 h. The developed assay could be used for the content analysis of polyethoxylated ascorbic acid in samples.
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문제 정의
후)시험방법이">시험 방법이 바람직하다. 본 연구에서는 실험실에서 쉽게 사용할 수 있는 분광광도계를 이용하여 검체 중에 활성성분의 함량 분석법을 개발하였다.
본">2000). 본 연구에서는 제품 중 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산의 함량 분석을 위해 필요한 분석법을 개발하고 분석법 검증을 수행하여 공인 분석법을 개발하고자 하였다.
제안 방법
3-Ethyl ascorbic acid 및 폴리에톡실레이티드 아스코르빈산의 빛에 대한 안정성을 평가하기 위하여, 3-ethyl ascorbic acid 20mg 및 폴리에톡실레이티드 아스코르빈산 60 mg을 칭량하여 100mL 용량 플라스크에 넣고 희석액으로 표선까지 맞추었다. 각각의 용액 2 mL 및 5 mL을 100 mL 용량 플라스크에 넣고 희석액을 표선까지 넣어 희석하였다.
3-Ethyl ascorbic acid 표준용액을 이용하여 직선성, 정확성 및 정밀성, 안정성 등을 측정하였다. 직선성은 검량선을 4회 반복 작성하고, 각 검량선의 기울기(a)와 상관계수(coefficient of correlation, r2)를 구하여 평가하였다.
3-Ethyl ascorbic acid 표준품을 각각 5, 15, 25, 35, 45, 55 및 65 mg을 정확하게 칭량하여 100 mL 용량 플라스크(volumetric flask)에 넣고 5 % 아세토니트릴 수용액으로 용해한 후 동일 희석액으로 표선까지 맞추었다. 각 표준용액 2 mL를 100 mL 용량 플라스크에 넣고 희석액을 표선까지 넣어 희석하였다.
후)검액 중에서">검액중에서 측정된 흡광도 값을 미리 작성한 검량선에 적용하여 검체 중 3-ethyl ascorbic acid의 농도를 구한 후, 아래식을 이용하여 검체 중 폴리에톡실레이티드 아스코르빈산의 함량을 계산하였다.검체의 순도는 농림축산식품부 공고 제2016-168호에 있는 L-아스콜빈산-2-폴리에틸렌 글리콜 에테르(polyethoxylated ascorbic acid)의 순도 계산법을 이용 측정하였다(Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs 2016).
본 연구에서 확립된 분광광도계를 이용한 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산 분석법을 이용하여, 가축용 보조제로 사용되고 있는 Poustin-C 검체 내 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산 함량 분석을 수행하였다. 그 결과, 검체 내
본 연구에서는 3-ethyl ascorbic acid를 표준물질로 이용하여, 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산의 정량법을 개발하였고, 확립된 시험법으로 시중에서 돼지 및 닭의 면역력 증진과 열에 대한 스트레스 경감제로 유통되고 있는 Poustin-C 검체 내 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산의 함량 분석을 실제로 분석하여 시험법의 유효성을 검증하였다. 개발한 분석법의 검증은 직선성, 정확성, 정밀성 및 안정성 시험 등을 통하여 평가하였다.
분석법 검증을 위하여 일내 및 일간, 4단계의 농도로 정확성을 평가하였다. 일중(intraday) 정확도는 97.
후)비타민C는">비타민 C는 빛에 불안정하기 때문에(el Naggar and Lovell 1991), 비타민 C 유도체로 실험에서 표준물질로 사용된 3-ethyl ascorbic acid와 Poustin-C 검체 내 활성물질인 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산의 분석 과정 중 안정성을 평가하기 위하여 실온 안정성 시험을 실시하였다. 이들 물질을 실온에서 1, 3 및 6시간 방치한 후 분석을 실시하여 대조군인 0시간 시료와 비교하였을 때, 대조군과 5 % 미만의 차이를 보여 6시간까지 실온 조건에서 안정함을 확인할 수 있었다(Table
후)이후,">이 후, 각 용액을 실온에서 1, 3, 6시간 방치한 후 0시간 방치 시료와 비교하여 안정성을 평가하였다(n=3).
6 %의 범위를 나타내었다(Table 2). 정확도와 함께 네 가지 농도 수준에서 일내 및 일간에 따른 변동계수(%, CV)를 계산하여 정밀성을 평가하였다. 일내 변이계수는 0.
직선성은 검량선을 4회 반복 작성하고, 각 검량선의 기울기(a)와 상관계수(coefficient of correlation, r2)를 구하여 평가하였다. 정확성(%)과 정밀성(coefficient of variation, CV)은 하루에 실험을 4번 시행하여 일내(intraday) 정밀성 및 정확성을 구하였고, 4일간 실험을 반복 수행하여 일간(interday) 정밀성 및 정확성을 구하였다.
대상 데이터
3-Ethyl ascorbic acid 표준품(분자량=204.18, 99.23 %), 폴리에톡실레이티드 아스코르빈산(MED-C, 평균 분자량=508) 및 Poustin-C (LOT NO. MEC16004, MEC16005 및 MEC160408, CTCBIO Inc., Hongcheon, Korea)는 LG Life Sciences에서 분양 받았다.
후)아세토니 트릴(acetonitrile)">아세토니트릴(acetonitrile) 및 물은 HPLC급을 구매하여 사용하였다(Merck, Germany).
후)폴리에톡실 레이티드">폴리에톡실레이티드 아스코르빈산은 단일화합물이 아니고 순수 분리도 용이하지 않아 비타민 C 그룹을 가지고 있는 3-ethyl ascorbic acid를 표준 검량선 작성을 위한 표준품으로 사용하였다. 3-Ethyl ascorbic acid의 UV 스펙트럼 분석 결과, 244 nm에서
데이터처리
후)함량분석을">함량 분석을
실제로 분석하여 시험법의 유효성을 검증하였다. 개발한 분석법의 검증은 직선성, 정확성, 정밀성 및 안정성 시험 등을 통하여 평가하였다.
3-Ethyl ascorbic acid 표준용액을 이용하여 직선성, 정확성 및 정밀성, 안정성 등을 측정하였다. 직선성은 검량선을 4회 반복 작성하고, 각 검량선의 기울기(a)와 상관계수(coefficient of correlation, r2)를 구하여 평가하였다. 정확성(%)과 정밀성(coefficient of variation, CV)은 하루에 실험을 4번 시행하여 일내(intraday) 정밀성 및 정확성을 구하였고, 4일간 실험을 반복 수행하여 일간(interday) 정밀성 및 정확성을 구하였다.
이론/모형
검체의">계산하였다.검체의 순도는 농림축산식품부 공고 제2016-168호에 있는 L-아스콜빈산-2-폴리에틸렌 글리콜 에테르(polyethoxylated ascorbic acid)의 순도 계산법을 이용 측정하였다(Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs 2016).
성능/효과
3-Ethyl ascorbic acid 5~65 mg/100 mL의 농도 범위에서 작성된 평균검량선은 y (흡광도)=0.010x (농도)−0.002(r2 >0.998)로 직선성이 매우 우수하였다(Fig. 2).
후)함량분석을">함량 분석을 수행하였다. 그 결과, 검체 내 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산 함량은 평균 14.91 %로 Poustin-C 제품의 함량 기준인 14.5 % 이상으로 확인되었다(Table 4).
998 이상으로 우수하였다. 실온에서 6시간까지는 안정하여 실험 도중 분해되지 않음을 확인하였다. 따라서 본 연구에서 개발된 시험법은 검체 내
후)분석과정">분석 과정 중 안정성을 평가하기 위하여 실온 안정성 시험을 실시하였다. 이들 물질을 실온에서 1, 3 및 6시간 방치한 후 분석을 실시하여 대조군인 0시간 시료와 비교하였을 때, 대조군과 5 % 미만의 차이를 보여 6시간까지 실온 조건에서 안정함을 확인할 수 있었다(Table 3). 이는 분석을 진행하는 과정에 검량선 표준물질과 제품이 안정함을 의미한다.
후)정밀 도">정밀도 시험은 일내 정밀성과 일간 정밀성으로 나누어 확인하였는데, 일내 및 일간 정밀성은 모두 3.4 % 이내로 매우 우수하였다. 그리고
후속연구
실온에서 6시간까지는 안정하여 실험 도중 분해되지 않음을 확인하였다. 따라서 본 연구에서 개발된 시험법은 검체 내 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산의 함량을 분석하기 위한 공정 시험법으로 활용할 수 있을 것으로 사료된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
가축에 사용하는 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산의 용도는 무엇인가?
최근 폴리에틸렌글리콜과 비타민 C와의 결합을 통하여 개발된 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산(Fig. 1)은 높은 열 안정성과 항산화활성을 나타내어 돼지 및 닭에 비타민 C를 공급하기 위한 사료 첨가제로 가축에 사용되고 있다(Song 등, 2000). 또한, 화장품 연구에서는 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산이 멜라닌(melanin)의 합성 효소인티로시나아제(tyrosinase)에 대해 높은 억제능을 보였다(Song 등, 2000).
본 논문에서 개발한 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산의 정량법을 검증하기 위해 평가한 항목은 무엇인가?
본 연구에서는 3-ethyl ascorbic acid를 표준물질로 이용하여, 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산의 정량법을 개발하였고, 확립된 시험법으로 시중에서 돼지 및 닭의 면역력 증진과 열에 대한 스트레스 경감제로 유통되고 있는 Poustin-C 검체 내 폴리에톡시레이티드 아스코르빈산의 함량 분석을 실제로 분석하여 시험법의 유효성을 검증하였다. 개발한 분석법의 검증은 직선성, 정확성, 정밀성 및 안정성 시험 등을 통하여 평가하였다. 정밀도 시험은 일내 정밀성과 일간 정밀성으로 나누어 확인하였는데, 일내 및 일간 정밀성은 모두 3.
비타민 C는 체내에서 어떠한 역할을 하는가?
비타민 C (L-아스코르빈산, L-ascorbic acid)는 대부분 동물들이 체내에서 합성할수 있지만 인간, 설치류, 어류는 체내에 비타민 C를 합성하는 효소가 결핍하여 반드시 음식으로부터 섭취하여야 한다(Wilson 1973). 비타민 C는 면역 증강제로서 세포 대사 과정 중에 산화-환원 반응에서 중요한 작용을 하고 골격근의 유지와 생성에서도 중요한 역할을 한다. 이외에 비타민 C는 세포 내의 중요한 항산화 작용과 free radical을 빠르게 억제하는 역할을 한다. 최근 연구 결과에 의하면, 닭 사료에 첨가된 비타민 C는 지방 산패도를 감소시키고(Kang 등, 2007) 부분육중 가슴육의 생산량을 증가시키는 효과를 나타내었다(Kang 등, 2015).
참고문헌 (14)
el Naggar GO, Lovell RT (1991) L-ascorbyl-2-monophosphate has equal antiscorbutic activity as L-ascorbic acid but L-ascorbyl-2-sulfate is inferior to L-ascorbic acid for channel catfish. J Nutr 121: 1622-1626
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Kang HK, Kim SH, Kim JH, Kang GH, Yu DJ, Na JC, Kim DW, Seo OS, Kim GH, Kim GH, Park BS (2007) Effects of Dietary Fish Oil, Vitamin E and C Supplementation on DHA Deposition and Shelf-Life in Broiler Chickens. Korean J Poult 34: 259-269
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Song J-W, Park S-H, Lee C-R, Lee K-J (2013) Effects of Dietary Supplementation of a Citrus By-product on Growth Performance, Innate Immunity and Tolerance of Low Water Temperature in Red Seabream Pagrus major. Kor J Fish Aquat Sci 46: 399-406
Song Y-S, Chung B-Y, Cho W-G, Kang S-H (2000) Development of Polyethoxylated Ascorbic Acid as a Whitening Agent. J Soc Cosmet Sci Korea 35: 199-211
Wilson RP (1973) Absence of ascorbic acid synthesis in channel catfish, Ictalurus punctatus and blue catfish, Ictalurus frucatus. Comp Biochem Physiol B 46: 635-638
Zhou Q, Wang L, Wang H, Xie F, Wang T (2012) Effect of dietary vitamin C on the growth performance and innate immunity of juvenile cobia (Rachycentron canadum). Fish Shellfish Immunol 32: 969-975
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