[논문]넙치 자어, 로티퍼와 알테미아의 세균총에 관한 분석

김명석; 최혜승; 김나영; 정승희

doi:10.13000/jfmse.2016.28.6.1828

넙치 자어, 로티퍼와 알테미아의 세균총에 관한 분석
Studies of Bacterial Flora of Rotifer sp., Artemia sp. and Olive Flounder larvae, Paralichthys olivaceus 원문보기

水産海洋敎育硏究 = Journal of fisheries and marine sciences education, v.28 no.6 = no.84, 2016년, pp.1828 - 1833

김명석 (국립수산과학원) , 최혜승 (국립수산과학원) , 김나영 (국립수산과학원) , 정승희 (국립수산과학원)

Abstract ▼ AI-Helper

The purpose of this research was to investigate the bacterial flora of healthy olive flounder larvae (Paralichthys olivaceus) and live feeds (Rotifer spp. and Artemia spp.). The total bacteria counts were $9.2{\times}10^7$ and $1.2{\times}10^{10}cfu/g$ and Vibrio sp.(82.8%) was dominant in rotifers. The total bacteria counts were $3.8{\times}10^6$ and $9.2{\times}10^6cfu/g$ and Vibrio sp.(73.3%) was dominant in artemia. In olive flounder larvae, the total bacteria counts were $1.4{\times}10^6{\sim}8.3{\times}10^7cfu/g$ and V. harveyi (38.5%) was dominant. It might be potential marker of disease outbreak in olive flounder larvae.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

이번 연구에서는 종자 배양장에서 생산되는 넙치의 세균총과 먹이로 공급되는 로티퍼와 알테미아의 세균총을 조사하여 건강한 넙치 종자를 생산하는 기초 자료를 얻고자 하였다.

제안 방법

각 시험구에서 분리된 26~30개 세균의 DNA는 high pure PCR template preparation kit(Roch, Mannheim, Germany)를 사용하여 분리하였고 PCR 법으로 27f(5'-AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG-3'), 518r primer(5'-GTA TTA CCG CGG CTG CTG G-3')를 사용하여 16S rDNA를증폭 하였다. PCR 증폭 산물은 Prep-A-Gene DNA Purification System(Bio-Rad Laboratories)으로 정제하고 Big Dye Terminator Cycle DNA Sequencing Kit(ABI PRISM, Applied Biosystems)와 automaticsequencer를 사용하여 염기서열을 분석하였다. 분석된 세균의 염기서열은 GenBank의 Blast 분석을 실시하여 종을 동정하였다.
각 시험구에서 분리된 26~30개 세균의 DNA는 high pure PCR template preparation kit(Roch, Mannheim, Germany)를 사용하여 분리하였고 PCR 법으로 27f(5'-AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG-3'), 518r primer(5'-GTA TTA CCG CGG CTG CTG G-3')를 사용하여 16S rDNA를증폭 하였다.
이때 로티퍼, 알테미아 및 넙치 자어의 사육수를 함께 채취하여 해수 중 세균 수 변화를 조사하였다. 넙치 치어의 세균 감염을 조사하기 위해 경남 거제(GJa, GJb), 전남 고흥(GHa, GHb), 충남 태안(TA), 충남 보령(BR)에 위치한 6개 종자 배양장의 넙치 치어를 검사하였다.
로티퍼와 알테미아는 40μm mash filter(BD Falcon, NJ, USA)로 모았고 사육수는 필터를 통과시켜 로티퍼와 알테미아가 제거된 사육수의 세균 수를 측정하였다.
먹이생물, 자어, 사육수의 총 세균 수와 비브리오균 수를 조사하였다. 로티퍼의 총 세균 수는 9.
PCR 증폭 산물은 Prep-A-Gene DNA Purification System(Bio-Rad Laboratories)으로 정제하고 Big Dye Terminator Cycle DNA Sequencing Kit(ABI PRISM, Applied Biosystems)와 automaticsequencer를 사용하여 염기서열을 분석하였다. 분석된 세균의 염기서열은 GenBank의 Blast 분석을 실시하여 종을 동정하였다.
세균 수 측정을 위해 준비된 시료는 멸균 PBS로 10배 단계희석을 하고 3반복으로 1% NaCl이 추가된 BHIA(Brain heart infusion agar)(sBHIA)와 TCBS agar에 각각 20 μl를 떨어뜨려 건조시키고 25℃에서 48시간 동안 배양하여 형성된 집락의 수를 조사하였다.
), 부화 14일, 29일, 32일, 42일의 넙치 자어를 채취한 후 실험실로 이송하여 실험에 사용하였다. 이때 로티퍼, 알테미아 및 넙치 자어의 사육수를 함께 채취하여 해수 중 세균 수 변화를 조사하였다. 넙치 치어의 세균 감염을 조사하기 위해 경남 거제(GJa, GJb), 전남 고흥(GHa, GHb), 충남 태안(TA), 충남 보령(BR)에 위치한 6개 종자 배양장의 넙치 치어를 검사하였다.
세균 수 측정을 위해 준비된 시료는 멸균 PBS로 10배 단계희석을 하고 3반복으로 1% NaCl이 추가된 BHIA(Brain heart infusion agar)(sBHIA)와 TCBS agar에 각각 20 μl를 떨어뜨려 건조시키고 25℃에서 48시간 동안 배양하여 형성된 집락의 수를 조사하였다. 총 세균 수는 sBHIA에서 형성된 세균 집락 수로 계산하였고 비브리오균 수는 TCBS agar에서 형성된 세균 집락 수로 계산 하였다.

대상 데이터

충남 태안(TA)에 위치한 넙치 종자 배양장에서 로티퍼(Rotifer sp.), 알테미아(Artemia sp.), 부화 14일, 29일, 32일, 42일의 넙치 자어를 채취한 후 실험실로 이송하여 실험에 사용하였다. 이때 로티퍼, 알테미아 및 넙치 자어의 사육수를 함께 채취하여 해수 중 세균 수 변화를 조사하였다.

이론/모형

로티퍼, 알테미아와 사육수의 총 세균 수와 비브리오균 수를 viable counting 법으로 측정하였다. 로티퍼와 알테미아는 40μm mash filter(BD Falcon, NJ, USA)로 모았고 사육수는 필터를 통과시켜 로티퍼와 알테미아가 제거된 사육수의 세균 수를 측정하였다.

후속연구

이번 조사 기간에서 넙치 자어의 대량폐사가 관찰되지 않아 조사된 먹이생물의 세균총과 넙치 자어의 세균총은 질병이 발생하지 않은 조건을 보여주는 사례가 될 수 있을 것이다. 앞으로 넙치 자어가 폐사하는 경우에 섭취한 먹이생물을 조사하여 비교하면 넙치의 종자 생산 시기에 질병의 발생 상황을 예측하는 자료로 활용될 수 있을 것이라 생각한다.
이번 조사 기간에서 넙치 자어의 대량폐사가 관찰되지 않아 조사된 먹이생물의 세균총과 넙치 자어의 세균총은 질병이 발생하지 않은 조건을 보여주는 사례가 될 수 있을 것이다. 앞으로 넙치 자어가 폐사하는 경우에 섭취한 먹이생물을 조사하여 비교하면 넙치의 종자 생산 시기에 질병의 발생 상황을 예측하는 자료로 활용될 수 있을 것이라 생각한다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	넙치 치어기 감염성 질병의 원인 병원체의 유입경로는?	넙치 치어기에 발생하는 감염성 질병의 원인 병원체가 종자 배양장으로 유입되는 경로는 명확하지 않으나, 일반적으로 넙치 종자 생산에 초기 먹이 생물로 사용되고 있는 로티퍼와 알테미아를통해 병원체가 전달될 가능성이 높다. 넙치 먹이생물의 세균총을 분석하는 것은 넙치 치어의 건강을 위해 필요하지만, 넙치의 치어와 초기 먹이생물의 세균총에 관한 보고는 거의 없다.
	넙치 치어에 발생하는 질병은 무엇이 있는가?	해산 어류의 종자 생산과정에서 대량 폐사가 발생하기도 하며(Matsuoka,1989; Muroga, 1992) 질병도 폐사의 원인 중의 하나이다. 넙치 치어에 발생하는 질병은 바이러스에 의한 상피증생증(Iida et al., 1989), 이리도바이러스 감염증(Kim et al., 2006), 세균에 의한 장관백탁증(Murata, 1987), 기생충에 의한 스쿠티카증(Jin et al.,2003) 등이 있다
	로티퍼와 알테미아에 포함된 세균 수에 따라 자어가 섭취했을 때 미치는 영향이 다른 이유는?	Muroga et al.(1987)은 로티퍼에 V. alginolyticus와 기타 세균들이 섭취되며 이러한 세균이 자어의 감염과 관계가 있다고 하였다. 또한 로티퍼배양수에는 106~ 108cfu/ml의 세균이 존재하며,로티퍼도 107~ 108cfu/g의 세균을 가지고 있어로티퍼 배양액 1ml와 로티퍼 1g의 세균은 비슷한 양으로 검출된다고 한다. 이러한 것으로 보아 로티퍼와 알테미아에 포함되어 있는 세균 수의 정도에 따라 자어에 섭취되었을 때 미치는 영향은 다르게 나타났을 것으로 생각된다

참고문헌 (14)

Al-Harbi, A. H. & Uddin, M. N.(2010). Bacterial flora of artermia cultured in earthen saline ponds, Journal of Applied Aquaculture 22, 194-201.

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Iida, Y. Masumura, K. Nakai, T. Sorimachi, M. & Matsuda, H.(1989). A viral disease in larvae and juveniles of the Japanese flounder Paralichthys olivaceus, Journal of Aquatic Animal Health 1, 7-12.

상세보기
Jin, C. N. Lee, C. H. Oh, S. P. & Heo M. S.(2003). Infection route of scuticociliates in the juvenile of the cultured flounder, Paralichthys olivaceus. Journal of Fish Pathology 16(1), 13-21.
Kim, T. J. Jang E. J. Kim, J. S. & Lee, J. I.(2006). Iridovirus infection of cultured juvenile flounder(Paralichthys olivaceus) in nursery, Korean Journal of Veterinary Research 46(1), 21-25.
Matsuoka, T.(1989). Current state of affairs and problems facing sea-farming with emphasis placed on technical problems of fingerling production, International Journal of Aquaculture and Fisheries Technology 1, 324-332.
Miyakawa, M. & Muroga, K.(1988). Bacterial flora of cultured rotifer Brachionus plicatilis, Suisan Zoshoku 35, 237-243.
Murata, O.(1987). An infectious disease of larval flounder showing opaque intestine, Fish Pathology 22, 59-61.
Muroga, K.(1992). Bacterial and viral diseases of marine fish during seed production, Aquaculture 99, 1-15.
Nicolas J. L. Robic, E. & Ansguer, D.(1989). Bacterial flora associated with a trophic chain consisting of microalgal rotifers and turbot larvae: Influence of bacteria on larval survival, Aquaculture 83, 237-248.

상세보기
Savas, S. Kubilay, A. & Basmaz, N.(2005). Effect of bacterial load in feeds on intestinal microflora of seabream(Sparus aurata) larva and juveniles, The Israeli Journal of Aquaculture 57(1), 3-9.
Skjermo, J. & Vadstein, O.(1993). Characterization of the bacterial flora of mass cultivated Brachionus plicatilis, Hydrobiologia 255/256, 185-191.

상세보기
Tanasomwang, V. & Muroga, K.(1988). Intestinal microflora of larval and juvenile stages in japaneas flounder(Paralichthys olivaceus), Fish Pathology 23(2), 77-83.

상세보기
Won, K. M. & Park, S. I.(2008). Pathogenicity of Vibrio harveyi to cultured marine fishes in Korea, Aquaculture 285, 8-13.

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Zhang, J. S. Dong, S. L. Tian, X. L. Dong, Y. W. Liu, X. Y. & Yan, D. C.(2006). Studies on the rotifer(Brachionus urceus Linnaeus, 1758) as a vector in white spot syndrome virus(WSSV) transmission, Aquaculture 261, 1181-1185.

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