조제분유와 건조호박에서 Cronobacter spp. 검출을 위한 두 가지 선택배지와 Real-time PCR의 비교검증 Comparative Evaluation of Real-Time PCR and Conventional Culture Method Using Two Selective Agars for the Detection of Cronobacter spp. in Powdered Infant Formula and Dried Pumpkin원문보기
두 종류의 Cronobacter 선택배지(DFIagar, R&F agar)의 분유 및 건조호박 내 Cronobacter의 선택 분리능을 real-time PCR법과 함께 비교하였다. 분유에서의 Cronobacter 검출률은 세 가지 방법에서 유의적인 차이를 나타내지 않았으나(p < 0.05), 건조호박의 경우 R&F배지와 real-time PCR법이 DFI에서보다 유의적으로 높은 검출률을 보였다(p < 0.05). 배지 간 선택성에 있어서도, R&F 선택배지는 건조호박에서 DFI에 비해 유의적으로 높은 선택성을 나타냈다(p < 0.05). Real-time PCR 및 R&F배지의 사용은 분유뿐만 아니라, 건조 호박 등의 높은 경쟁세균총을 갖는 영유아식의 원료로 사용될 수 있는 식품군에서도 Cronobacter를 효과적으로 검출할 수 있는 방법으로 사료된다.
두 종류의 Cronobacter 선택배지(DFI agar, R&F agar)의 분유 및 건조호박 내 Cronobacter의 선택 분리능을 real-time PCR법과 함께 비교하였다. 분유에서의 Cronobacter 검출률은 세 가지 방법에서 유의적인 차이를 나타내지 않았으나(p < 0.05), 건조호박의 경우 R&F배지와 real-time PCR법이 DFI에서보다 유의적으로 높은 검출률을 보였다(p < 0.05). 배지 간 선택성에 있어서도, R&F 선택배지는 건조호박에서 DFI에 비해 유의적으로 높은 선택성을 나타냈다(p < 0.05). Real-time PCR 및 R&F배지의 사용은 분유뿐만 아니라, 건조 호박 등의 높은 경쟁세균총을 갖는 영유아식의 원료로 사용될 수 있는 식품군에서도 Cronobacter를 효과적으로 검출할 수 있는 방법으로 사료된다.
In the present study, the performance of culture methods using two selective agars and real-time PCR were compared for selective isolation of Cronobacter in powdered infant formula and dried pumpkin. Two food samples were spiked with the pathogen and then preenriched in distilled water. A small port...
In the present study, the performance of culture methods using two selective agars and real-time PCR were compared for selective isolation of Cronobacter in powdered infant formula and dried pumpkin. Two food samples were spiked with the pathogen and then preenriched in distilled water. A small portion of preenrichment (10 mL) was incubated in Enterobacteriaceae enrichment both, followed by inoculation onto Druggan-Forsythe-Iversen agar (DFI agar) and Cronobacter sakazakii chromogenic plating agar (R&F agar). The preenrichment and enrichment (1 mL each) was used in real-time PCR assay. In powdered infant formula (PIF), no statistical difference was observed between both culture methods and real-time PCR with preenrichemt (p > 0.05). However, the number of positives obtained by R&F agar and real-time PCR was much higher than that of culture method using DFI agar in dried pumpkin (p < 0.05). In particular, R&F agar yielded a significantly greater selectivity than DFI agar in dried pumpkin (p < 0.05). Real-time PCR and R&F agar, which are currently recommended by US FDA, could be used as an alternative detection tools for the isolation of Cronobacter in PIF and ingredient of child foods such as dried pumpkin that has high number of competing natural microflora.
In the present study, the performance of culture methods using two selective agars and real-time PCR were compared for selective isolation of Cronobacter in powdered infant formula and dried pumpkin. Two food samples were spiked with the pathogen and then preenriched in distilled water. A small portion of preenrichment (10 mL) was incubated in Enterobacteriaceae enrichment both, followed by inoculation onto Druggan-Forsythe-Iversen agar (DFI agar) and Cronobacter sakazakii chromogenic plating agar (R&F agar). The preenrichment and enrichment (1 mL each) was used in real-time PCR assay. In powdered infant formula (PIF), no statistical difference was observed between both culture methods and real-time PCR with preenrichemt (p > 0.05). However, the number of positives obtained by R&F agar and real-time PCR was much higher than that of culture method using DFI agar in dried pumpkin (p < 0.05). In particular, R&F agar yielded a significantly greater selectivity than DFI agar in dried pumpkin (p < 0.05). Real-time PCR and R&F agar, which are currently recommended by US FDA, could be used as an alternative detection tools for the isolation of Cronobacter in PIF and ingredient of child foods such as dried pumpkin that has high number of competing natural microflora.
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
문제 정의
본 연구에서는 국내 식품공전 기법에 real-time PCR을 활용하여 해당 기법을 screening method로 활용가능한지 평가하였으며, 동시에 FDA BAM에 새로 등재된 R&F 배지의 민감도와 선택성 등을 현행 식품공전에서 사용하고 있는 크로모제닉배지인 DFI 배지와 비교 검증하였다.
가설 설정
1)Statistical analysis is impossible in infant formula. At least one of these values must be positive.
1)Values followed by different uppercase letters (A, B) in the same row are significantly different (p < 0.05).
2)Values followed by different uppercase letters (A, B) in the same row are significantly different (p < 0.05).
제안 방법
sakazakii KCTC 2949 약 101-102 CFU 접종한 후, 30분간 상온에서 정치하고 25 g씩 20개로 나누었다. 50 g을 따로 준비하여 25 g은 양성 대조군으로 하여 107CFU 이상의 균을 접종하고, 나머지 25 g은 음성대조군으로 하여 멸균증류수를 접종하였다. 접종과 동시에 동일 균량을 nutrient agar에 도말하여 37℃에서 24시간 배양한 후 집락을 계수하여 접종량을 확인하였다.
500 g의 bulk 시료에 C. sakazakii KCTC 2949 약 101-102 CFU 접종한 후, 30분간 상온에서 정치하고 25 g씩 20개로 나누었다. 50 g을 따로 준비하여 25 g은 양성 대조군으로 하여 107CFU 이상의 균을 접종하고, 나머지 25 g은 음성대조군으로 하여 멸균증류수를 접종하였다.
5 μL, 샘플 DNA 5 μL로 총량을 25 μL로 하였다. ABI PRISM 7500HT sequence detection system (AppliedBiosystems)을 사용하여 50℃에서 2분, 95℃에서 10분간 반응시킨 후 95℃에서 15초, 60℃에서 1분을 1회로 반응조건을 맞추어 40 cycles를 반응시켰다. Real-time PCR의 판정은 Ct 값이 38이하인 경우이면서, 곡선이 S자형(sigmoid)의 증폭양상을 보이는 경우에 양성으로 판정하였다.
DFI 배지(Oxoid) 및 R&F 배지(R & F Laboratories,Downers Grove, IL, USA)의 inclusivity 및 exclusivity를 검증하기 위해 13개의 Cronobacter 균주와 15개의 nonCronobacter 균주를 두 선택배지에 접종하였다.
Real-time PCR 법을 시행하기 위해 1차 증균된 DW 및 2차 증균된 EE broth에서 1 mL 취하여 Seo 등의 앞선 연구를 참조하여 DNA를 추출하였다22). 채취한 1 mL를 3분간 14,000 rpm에서 원심분리 한 후 상층액을 제거하고 lysis buffer인 PrepMan Ultra (Applied Biosystems, Foster City,CA, USA) 200 μL를 넣어주었다.
ABI PRISM 7500HT sequence detection system (AppliedBiosystems)을 사용하여 50℃에서 2분, 95℃에서 10분간 반응시킨 후 95℃에서 15초, 60℃에서 1분을 1회로 반응조건을 맞추어 40 cycles를 반응시켰다. Real-time PCR의 판정은 Ct 값이 38이하인 경우이면서, 곡선이 S자형(sigmoid)의 증폭양상을 보이는 경우에 양성으로 판정하였다.
각 반응액의 조성은 TaqMan®universal PCR master mix (Applied Biosystems) 12.5 μL,forward and reverse primer (900 nM) 각각 2.5 μL, probe(250 nM) 2.5 μL, 샘플 DNA 5 μL로 총량을 25 μL로 하였다.
또한 균이 접종되지 않은 각 음성 대조군의 경우, 증균 전 100 μL를취해 10배수로 희석한 희석액을 nutrient agar에 도말하여 37℃에서 24시간 배양하여 식품 내 정상세균총 수를 측정하였다.
식품시료는 서울 광진구 소재의 대형마트에서 판매되는 조제분유와 건조호박을 구매하였다. 모든 접종실험은 시료당 20개씩 2회 반복하여 수행하였다
Nutrient agar에서 계대된 균주 1집락을 취하여 tooth-picking 방법으로 선택배지에 계대배양 한 후, 24시간 동안 37도에서 배양하였다. 배양 후 집락이 형성된 것(growth)과 집락이 형성되지 않은 것(no growth)을 구분하였으며, 집락이 형성된 경우 전형적인 양성집락형태(typical growth), 비양성집락형태(growth, but nontypical)로 구분하였다. Cronobacter 양성집락의 경우 DFI 배지에서는 청록색의 집락, R&F 배지에서는 blue-black 혹은 blue-gray의 집락색을 보이는 것으로 알려져 있다6).
증균액을 DFI 배지와 R&F 배지에 획선도말하였으며 37℃에서 24시간 배양한 후 양성 의심집락을 확인하여 nutrient agar에 계대배양 하였다. 양성 의심집락은 Vitek 2 GN kit를 사용하여 생화학적으로 최종 확인동정하였다. 또한 균이 접종되지 않은 각 음성 대조군의 경우, 증균 전 100 μL를취해 10배수로 희석한 희석액을 nutrient agar에 도말하여 37℃에서 24시간 배양하여 식품 내 정상세균총 수를 측정하였다.
50 g을 따로 준비하여 25 g은 양성 대조군으로 하여 107CFU 이상의 균을 접종하고, 나머지 25 g은 음성대조군으로 하여 멸균증류수를 접종하였다. 접종과 동시에 동일 균량을 nutrient agar에 도말하여 37℃에서 24시간 배양한 후 집락을 계수하여 접종량을 확인하였다.
대상 데이터
본 실험에 사용된 균주 정보는 Table 1에 제시되어 있다. Cronobacter 균주로 표준균주인 C. sakazakii KCTC 2949를 사용하였으며, 분리균주로 KU 식품안전연구소 보유 건조식품분리주 Cronobater 1-15, 2-14, 2-15, 3-21, 3-24, 3-27, 5-14, 5-15, 5-17, 5-20, 5-21, 6-15를 사용하였다. 두 가지 선택배지의 exclusivity test를 위한 non-Cronobacter균주로 Enteobacter aerogens ATCC 13048, Enterobacteraerogens_5_14E, Enterobacter clocae_5_11G, Enterobacterclocae_5_14G, Citrobacter freundii ATCC 8090, E.
sakazakii KCTC 2949를 사용하였으며, 분리균주로 KU 식품안전연구소 보유 건조식품분리주 Cronobater 1-15, 2-14, 2-15, 3-21, 3-24, 3-27, 5-14, 5-15, 5-17, 5-20, 5-21, 6-15를 사용하였다. 두 가지 선택배지의 exclusivity test를 위한 non-Cronobacter균주로 Enteobacter aerogens ATCC 13048, Enterobacteraerogens_5_14E, Enterobacter clocae_5_11G, Enterobacterclocae_5_14G, Citrobacter freundii ATCC 8090, E. coli ATCC25922, E. coli ATCC 11775, Salmonella A106, Shigella flexneri ATCC 12026, Enterococcus faecalis ATCC 51299,Listeria monocytogenes ATCC 51776, Listeria inocuaF120321, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus cereus ATCC 21768, Bacillus cereus ATCC14579균주를 사용하였다. 모든 균주는 −70oC에서 보관하던 균주를 nutrient agar(Oxoid, Hampshire, UK) 혹은 혈액배지(bioMérieux, Marcyl’Etoile, France)에 도말하여 사용하였다.
. 식품시료는 서울 광진구 소재의 대형마트에서 판매되는 조제분유와 건조호박을 구매하였다. 모든 접종실험은 시료당 20개씩 2회 반복하여 수행하였다
본 연구에서는 국내 식품공전 기법에 real-time PCR을 활용하여 해당 기법을 screening method로 활용가능한지 평가하였으며, 동시에 FDA BAM에 새로 등재된 R&F 배지의 민감도와 선택성 등을 현행 식품공전에서 사용하고 있는 크로모제닉배지인 DFI 배지와 비교 검증하였다. 추가로 Cronobacter에서 가장 문제가 되는 조제분유와 조제분유 외에 영유아식품의 원료로 사용될 가능성이 있는 비교적 상재균 수가 많은 건조야채들 중 건조 호박을 시료로 선정하여 사용하였다.
데이터처리
순수배양액에서 두 배지간 inclusivity/exclusivity 차이와 식품접종 시 각 기법간 검출률 및 선택성의 차이의 결과분석은 GraphPadInstat (GraphPad Software, Inc. San Diego,CA, USA) 프로그램을 사용하였으며 Fishers exact test로 양성검출률의 통계학적인 유의차(p < 0.05)를 분석하였다.
인위적으로 균을 접종한 후 검출하는 방법(spiking)을 사용하여 검출법 간 비교를 수행하였으며, 앞선 본 연구팀의 연구를 바탕으로 20개의 시료에 부분 양성 및 부분 음성이 나오게 하여 양성 검출률을 통계적으로 비교하였다17,21). 식품시료는 서울 광진구 소재의 대형마트에서 판매되는 조제분유와 건조호박을 구매하였다.
이론/모형
추출된 DNA는 −20℃에 보관하여 real-time PCR 법을 수행할 때 사용되었다
성능/효과
따라서 Citrobacter 또는 해당효소를 가지는 세균에 오염된 시료를 검사할 경우, 위양성 결과를 나타낼 가능성이 클 것으로 사료된다. 그람 양성의 경우 두 가지 선택배지 모두 그람음성균은 Cronobacter 검출을 위해 최적화된 배지인만큼 실험에 사용된 균을 대부분 억제하는 양상을 보였다.
그러나 건조호박에서는 R&F 배지 60%(40개 시료 중 24개), 1차 증균 후 real-time PCR 55%(40개 시료 중22개), 2차 증균 후 15%(40개 시료 중 6개) DFI 배지 5%(40개 시료 중 2개)를 보여 R&F 배지를 사용하거나 1차 증균 후 real-time PCR을 사용하는 경우 다른 방법에 비해 유의적으로 높은(p < 0.05) 검출률을 나타냄을 확인하였다.
일반적으로 2차 증균은 1차 증균에 비해 더 선택적이기 때문에 목적균의 농도가 더 높아 검출률을 향상시키기 위해 필요하다. 그러나 본 실험에서는 2차 증균액을 사용한 real-time PCR 기법이 1차 증균액 사용보다 더 낮은 검출률을 보였다. 이러한 경향은 Salmonella 및 Cronobacter의 검출과 관련한 앞선 연구들과도 일치하는 결과로서, 2차 증균배지에 들어있는 ox bile 및 brilliant green 등의 그람양성균 억제물질이 PCR 반응의 inhibitor로 작용하기 때문인 것으로 보인다14,24).
그러나 유의차가 없더라도 검출률 자체는 R&F를 사용한 배지검출법이 더 높았으므로, real-time PCR은 배지검출법을 보완하는 screening 방법의 형태로 적용하는 것이 좋을 것으로 보이며 특히 건조호박과 같은 비교적 성상이 복잡하고 상재균 수가 많은 원료에서 해당 균을 검출 시 활용도가 높을 것으로 보인다.
두 가지 선택배지의 inclusivity 및 exclusivity를 비교한 결과는 Table 1에 제시되어 있다. 두 가지 선택배지는 모든 Cronobacter를 양성으로 검출하여 동일한 민감도를 가지고 있는 것으로 확인되었다(13개 시료 중 13개, 100%;Table1). 한편 그람음성의 non-Cronobacter의 경우, 두 배지에서 모두 집락의 성장을 보였으나, Cronobacter와는 구분되는 집락 형태를 보였다.
두 가지 선택배지는 분유에서는 유사한 수준의 검출능력을 보였으나, 건조호박에서는 R&F 배지가 유의적으로 높은 검출률을 보였다(p < 0.05, Table 2).
DFI 배지의 선택성은 αglucosidase에 의존하는데 대부분의 Citrobacter가 해당 효소를 가지고 있다고 보고된 바 있다23). 따라서 Citrobacter 또는 해당효소를 가지는 세균에 오염된 시료를 검사할 경우, 위양성 결과를 나타낼 가능성이 클 것으로 사료된다. 그람 양성의 경우 두 가지 선택배지 모두 그람음성균은 Cronobacter 검출을 위해 최적화된 배지인만큼 실험에 사용된 균을 대부분 억제하는 양상을 보였다.
본 실험결과 real-time PCR과 R&F 배지는 건조호박에서 DFI 배지에 비해 우수한 검출능력을 보였다. 결론적으로 조제분유를 비롯한 다양한 영유아식품 원료에서 Cronobacter 검출률을 극대화하기 위해서는 R&F 배지 및 real-time PCR 기법 등을 상호 보완적으로 사용해야 할 것으로 판단된다.
분유에서 DFI 배지 65%(40개 시료 중 26개), R&F 배지 60%(40개 시료 중 24개), 1차 증균 후 real-time PCR 53%(40개 시료 중 21개), 2차 증균 후 0%(40개 시료 중 0개)를 보여 DFI 배지를 사용한 배지검출법이 가장 높은 검출률을 보였으며, 2차 증균 후 real-time PCR로 검출하는 경우를 제외하고는 유의적인 차이를 보이지 않았다(p 0', '>0')">>0.05).
분유에서는 두 배지 모두 경쟁집락에 의한 오염이 없었으나, 건조호박에서는 DFI가 R&F 배지에 비해 유의적으로 오염된 배지가 더 많이 발견되었다(DFI, 40개의 시료 중 31개; R&F, 40개의 시료 중 11개; p < 0.05).
실험결과 1차 증균 후 real-time PCR을 수행할 경우 DFI 및 R&F 배지를 사용한 검출법에 비해 유의차 없는 양성검출률을 보였다(p > 0.05).
. 해당 검출법에서는 Real-time PCR을 screening 방법 외에도 확인동정에서 사용 하기 때문에 검출을 위한 시간과 노동력을 크게 줄일 수 있다. 특히 개선된 검출법에서 DFI 배지와 더불어 새롭게 등재된 R&F 배지는 크로모제닉배지의 일종으로서 chloro-3-indolyl-α,dglucopyranoside라는 특이적인 크롬기질과 추가적인 항생제를 첨가하여 Cronobacter를 선택적으로 검출하는 것으로 알려져 있다18,19).
후속연구
결론적으로 조제분유를 비롯한 다양한 영유아식품 원료에서 Cronobacter 검출률을 극대화하기 위해서는 R&F 배지 및 real-time PCR 기법 등을 상호 보완적으로 사용해야 할 것으로 판단된다. DFI 배지를 사용한 검출법은 유의차는 보이지 않았으나 분유에서 가장 높은 양성검출률을 보여 조제분유 검사시에 한하여 사용이 가능할 것으로 보인다.
본 실험결과 real-time PCR과 R&F 배지는 건조호박에서 DFI 배지에 비해 우수한 검출능력을 보였다. 결론적으로 조제분유를 비롯한 다양한 영유아식품 원료에서 Cronobacter 검출률을 극대화하기 위해서는 R&F 배지 및 real-time PCR 기법 등을 상호 보완적으로 사용해야 할 것으로 판단된다. DFI 배지를 사용한 검출법은 유의차는 보이지 않았으나 분유에서 가장 높은 양성검출률을 보여 조제분유 검사시에 한하여 사용이 가능할 것으로 보인다.
그러나 유의차가 없더라도 검출률 자체는 R&F를 사용한 배지검출법이 더 높았으므로, real-time PCR은 배지검출법을 보완하는 screening 방법의 형태로 적용하는 것이 좋을 것으로 보이며 특히 건조호박과 같은 비교적 성상이 복잡하고 상재균 수가 많은 원료에서 해당 균을 검출 시 활용도가 높을 것으로 보인다. 본 연구에서는 식품공전 내의 증균방법과 동일하게 1차 DW로 증균 후 2차 EE broth로 증균하였으나, 1차 증균 후 real-time PCR로 검출할 때 높은 양성검출률을 얻기 위해서는 현재 미국 FDA에서 사용중인 BPW를 비롯한 PCR inhibitor가 없는 다른 증균배지의 사용할 필요가 있다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
영유아식품이 오염되는 경로의 내외부적 경로의 특징은 무엇인가?
조제분유를 포함한 영유아식품이 오염되는 경로는 다양한데 크게 나누어 외부적 경로(extrinsic routes)와 내부적 경로(intrinsic routes)를 통해 이루어진다. 외부적 경로는 처리장비의 오염을 비롯하여 위생적이지 못한 처리과정이 원인이다. 반면 내부적 경로(intrinsic routes)를 통한 오염은 원료나 첨가제로 들어가는 물질, 예를 들자면 건조된야채, 곡물, 해산물 등이 가공 전에 이미 오염되어 완제품까지 오염되는 경우이다5,9). 영유아식품의 오염 원인이 원료의 오염과 연관되어 있는 경우가 많기 때문에, Cronobacter의 모니터링과 관련된 최근의 연구에는 조제분유 외에도 원료로 사용될 수 있는 다양한 식품들도 포함된다5,10).
Cronobacter spp.의 특징은 무엇인가?
Cronobacter spp.(formerly Enterobacter sakazakii)는 자연에 널리 분포하고 있는 장내세균의 일종으로서 영유아에게 감염되어 괴사성장염, 뇌수막염, 패혈증 등의 심각한 증상을 야기할 수 있다1-3). 또한 Cronobacter는 영유아 외에 면역부전환자 및 고령자에게도 기회감염을 통해 질병을야기할 수 있는 것으로 알려져 있다4).
Cronobacter가 가장 문제되는 식품은 무엇인가?
또한 Cronobacter는 영유아 외에 면역부전환자 및 고령자에게도 기회감염을 통해 질병을야기할 수 있는 것으로 알려져 있다4). 현재 Cronobacter가 가장 문제가 되는 식품은 영아용 조제분유이며 각국의 공인검출규격에서는 해당 식품에 대하여 엄격한 Cronobacter불검출 규격을 적용하고 있다5-7). 한국의 경우, 식품의약품안전처에 따르면 2006년부터 이유식의 안전관리를 위해 Cronobacter균의 불검출 규격이 적용되었으며 지속적인 모니터링을 수행하고 있다8).
참고문헌 (25)
Burdette JH, Santos C.: Enterobacter sakazakii brain abscess in the neonate: the importance of neuroradiologic imaging. Pediatr. Radiol., 30(1), 33-34 (2000).
Liu Y, Cai X, Zhang X, Gao Q, Yang X, Zheng Z, Luo M, Huang X.: Real time PCR using TaqMan and SYBR Green for detection of Enterobacter sakazakii in infant formula. J. Microbiol. Meth., 65(1), 21-31 (2006).
Lai KK.: Enterobacter sakazakii infections among neonates, infants, children, and adults. Case reports and a review of the literature. Medicine, 80(2), 113-122 (2001).
Kim K, Jang SS, Kim SK, Park JH, Heu S, Ryu S.: Prevalence and genetic diversity of Enterobacter sakazakii in ingredients of infant foods. Int. J. Food Microbiol., 122(1), 196-203 (2008).
US Food and Drug Administration. Bacteriological Analytical Manual, Chapter 29, Cronobacter (2012) http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm2-89378.htm (accessed December 13, 2016)
Korea Food and Drug Administration. Korea Food Code, Chapter 5-29, Ready-to-Eat and Convenience Foods (2013).
Korea Food and Drug Administration (2007). http://www.mfds.go.kr/index.do?seq1151&mid675 (accessed December 13, 2016).
Lee EJ, Kim SG, Yoo SR, Oh SS, Hwang IG, Kwon GS, Park JH.: Microbial Contamination by Bacillus cereus, Clostridium perfringens, and Enterobacter sakazakii in Sunsik. Food Sci. Biotechnol., 16(6), 948-953 (2007).
Chon JW, Song KY, Kim SY, Hyeon JY, Seo KH.: Isolation and Characterization of Cronobacter from Desiccated Foods in Korea. J. Food Sci., 77(7), 354-358 (2012).
Kandhai MC, Heuvelink, AE, Reij MW, Beumer, RR, Dijk R, van Tilburg JC, van Schothorst M, Gorris LG.: A study into the occurrence of Cronobacter spp. in The Netherlands between 2001 and 2005. Food Cont., 21(8), 1127-1136 (2010).
Lee EJ, Ryu TH, Park JH.: Tolerance of Korean Cronobacter spp. isolates to desiccation. Korean J. Food Sci. Technol., 41(6), 681-686 (2009).
Song KY, Chon JW, Kim HS, Seo KH.: Current Cronobacter spp. Researches on Prevalence, Control, and Detection. Korean J. Microbiol., 48(4), 229-239 (2012).
Chon JW, Song KY, Kim SY, Hyeon JY, KimYG, Seo KH.: Comparison of Real-Time PCR and Conventional Culture Method for Detection of Cronobacter spp. in Powdered Foods. Korean J. Microbiol., 47(1), 87-91 (2011).
Chon JW, Hyeon JY, Hwang IG, Kwak HS, Han JA, Seo KH.: Comparison of Real-Time PCR and Culture Methods for Detection of Campylobacter jejuni in Various Foods. Korean J. Food Sci. Technol., 43(1), 119-123 (2011).
Kim YK, Chon JW, Lee JH, Kwak HS, Hwang IG, Seo KH.: Comparison of Conventional Culture Method and Real-time PCR for Detection of Yersinia enterocolitica in Sausage and Vegetable Salad. Korean J. Food Sci. Technol., 45(1), 133-136 (2013).
Hyeon JY, Hwang IG, Kwak HS, Park JS, Heo S, Seo KH.: Evaluation of an Automated ELISA (VIDAS(R)) and Real-time PCR by Comparing with a Conventional Culture Method for the Detection of Salmonella spp. in Steamed Pork and Raw Broccoli Sprouts. Korean J. Food. Sci. Anim. Resour., 29(4), 506-512 (2009).
Gurtler JB, Beuchat LR.: Performance of Media for Recovering Stressed Cells of Enterobacter sakazakii as Determined Using Spiral Plating and Ecometric Techniques. Appl. Environ. Microbiol., 71(12), 7661-7669 (2005).
Restino L, Frampton EW, Lionberg WC, Becker RJ.: A Chromogenic Plating Medium for the Isolation and Identification of Enterobacter sakazakii from Foods, Food Ingredients, and Environmental Sources. J. Food Prot., 69(2), 315-322 (2006).
Chen YI, Hammack TS, Song KY, Lampel KA.: Evaluation of a revised U.S. Food and Drug Administration method for the detection and isolation of Enterobacter sakazakii in powdered infant formula: precollaborative study. J AOAC Int., 92(3), 862-872 (2009).
Lee JH, Song KY, Hyeon JY, Hwang IG, Kwak HS, Seo KH.: Comparison of Standard Culture Method and Real-time PCR Assay for Detection of Staphylococcus aureus in Processed and Unprocessed Foods. Korean J. Food Sci. Anim. Resour., 30(3), 410-418 (2010).
Seo KH, Brackett RE.: Rapid, Specific Detection of Enterobacter sakazakii in Infant Formula Using a Real-Time PCR Assay. J. Food Prot., 68(1), 59-63 (2005).
Dominique C, Laurence M, Virginie P, Jose-Carlos F, Chantal B, Sylvain B.: Multilocus sequence analysis of the genus Citrobacter and description of Citrobacter pasteurii sp. nov. Int. J. Syst, Evol. Microbiol., 65(5), 1486-1490 (2015).
Hyeon JY, Hwang IG, Kwak HS, Park C, Choi IS, Seo KH.: Evaluation of PCR inhibitory effect of enrichment broths and comparison of DNA extraction methods for detection of Salmonella Enteritidis using real-time PCR assay. J. Vet. Sci., 11(2), 143-149 (2010).
Chon JW, Hyeon JY, Yim JH, Kim JH, Song KY, Seo KH.: Improvement of Modified Charcoal-Cefoperazone-Deoxycholate Agar by Supplementation with a High Concentration of Polymyxin B for Detection of Campylobacter jejuni and C. coli in Chicken Carcass Rinses. Appl. Environ. Microbiol., 78(5), 1624-1626 (2012).
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.