천속단과 한속단은 명칭이 유사하여 '속단'으로 통칭하여 판매되고 있으나, 종과 속이 서로 다른 약재일 뿐만 아니라 함유 성분이 다르므로 주의가 필요하다. 천속단은 골격강화, 골절치료 작용이 있는 한약재로 식품원료로는 사용할 수 없으나, 한속단의 뿌리와 잎은 식품원료로 사용이 가능하다. 본 연구에서는 식품 중 천속단 혼입여부 판별을 위하여 LC-MS/MS를 이용한 동시분석법을 개발하였으며, 선택성, 직선성, 검출한계, 정량한계, 정확성, 정밀성을 검토하였다. 국내 유통중인 식품 중 어린이 키성장을 표방하는 제품 17건을 구매하여 천속단 혼입여부에 대한 실태조사를 하였다. 분석결과 17건의 시료 중 5건의 시료에서 천속단이 검출되었으며, 천속단 지표성분의 함량은 loganin$0.19-14.45{\mu}g/mL$, sweroside $0.13-4.61{\mu}g/mL$, akebia saponin D $0.59-19.29{\mu}g/mL$이었다. 본 연구에서 개발된 동시분석법은 식품 중 불법 혼입된 천속단을 간단하면서도 신속하게 판별하는데 도움이 될 것으로 사료된다.
천속단과 한속단은 명칭이 유사하여 '속단'으로 통칭하여 판매되고 있으나, 종과 속이 서로 다른 약재일 뿐만 아니라 함유 성분이 다르므로 주의가 필요하다. 천속단은 골격강화, 골절치료 작용이 있는 한약재로 식품원료로는 사용할 수 없으나, 한속단의 뿌리와 잎은 식품원료로 사용이 가능하다. 본 연구에서는 식품 중 천속단 혼입여부 판별을 위하여 LC-MS/MS를 이용한 동시분석법을 개발하였으며, 선택성, 직선성, 검출한계, 정량한계, 정확성, 정밀성을 검토하였다. 국내 유통중인 식품 중 어린이 키성장을 표방하는 제품 17건을 구매하여 천속단 혼입여부에 대한 실태조사를 하였다. 분석결과 17건의 시료 중 5건의 시료에서 천속단이 검출되었으며, 천속단 지표성분의 함량은 loganin $0.19-14.45{\mu}g/mL$, sweroside $0.13-4.61{\mu}g/mL$, akebia saponin D $0.59-19.29{\mu}g/mL$이었다. 본 연구에서 개발된 동시분석법은 식품 중 불법 혼입된 천속단을 간단하면서도 신속하게 판별하는데 도움이 될 것으로 사료된다.
Phlomis umbrosa and Dipsacus asperoides are distinct species, even though they have a similar appearance. Dipsacus asperoides is used as a Chinese medicinal plant for and has bone strengthening and fracture healing but Phlomis umbrosa has no effect on bone growth. Recently, these plants were used in...
Phlomis umbrosa and Dipsacus asperoides are distinct species, even though they have a similar appearance. Dipsacus asperoides is used as a Chinese medicinal plant for and has bone strengthening and fracture healing but Phlomis umbrosa has no effect on bone growth. Recently, these plants were used in children's food to improve their bone growth, without distinction in food. Intakes of Dipsacus asperoides in food may be dangerous, because it has never been used in food and its safety has never been tested in humans. We developed liquid chromatography with tandem mass spectrometry method to distinguish these plants in food. The method was validated for linearity, limits of detection, limits of quantification, accuracy and precision. In 5 of 17 samples, we identified Dipsacus asperoides, containing loganin $0.19-14.45{\mu}g/mL$, sweroside $0.13-4.61{\mu}g/mL$ and akebia saponin D $0.59-19.29{\mu}g/mL$. The developed method might be useful to identify Dipsacus asperoides in adulterated food.
Phlomis umbrosa and Dipsacus asperoides are distinct species, even though they have a similar appearance. Dipsacus asperoides is used as a Chinese medicinal plant for and has bone strengthening and fracture healing but Phlomis umbrosa has no effect on bone growth. Recently, these plants were used in children's food to improve their bone growth, without distinction in food. Intakes of Dipsacus asperoides in food may be dangerous, because it has never been used in food and its safety has never been tested in humans. We developed liquid chromatography with tandem mass spectrometry method to distinguish these plants in food. The method was validated for linearity, limits of detection, limits of quantification, accuracy and precision. In 5 of 17 samples, we identified Dipsacus asperoides, containing loganin $0.19-14.45{\mu}g/mL$, sweroside $0.13-4.61{\mu}g/mL$ and akebia saponin D $0.59-19.29{\mu}g/mL$. The developed method might be useful to identify Dipsacus asperoides in adulterated food.
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문제 정의
지금 까지 보고된 분석법은 천속단이나 한속단 한약재를 분석한 것으로(2,3,10-12), 식품에 적용하여 분석한 시험법은 없다. 그러므로본 연구에서는 식품 중 천속단의 혼입여부를 판별하기 위하여 LC-MS/MS 동시분석법을 개발하여, 국내 유통 중인 캔디류, 액상차, 건강기능식품 등 총 17건의 식품에 대한 실태조사를 실시 하였으며, 연구 결과는 식품 안전관리를 위한 기초자료로 활용하고자 하였다.
본 연구에서 식품 중 천속단의 혼입여부를 판별하기 위하여 개발된 LC-MS/MS 동시분석법의 유효성 검증을 위하여 직선성, LOD, LOQ, 정밀성 및 정확성을 확인하였다(Table 3). 천속단과 한속단 지표성분의 선택성을 확인하기 위하여 대조시료와 표준 용액을 첨가한 시료를 분석한 결과, 대조시료에서는 지표성분의 피크가 검출되지 않았으나, 표준용액을 첨가 시료에서는 표준용 액과 동일한 머무름 시간(RT)에 피크를 확인하였다.
본 연구에서는 식품 중 천속단의 혼입여부를 판별하기 위하여 LC-MS/MS를 이용한 동시분석법을 개발하였으며, 식품의 적용여 부를 확인하기 위하여 국내 유통되는 식품 중 어린이 키성장을 표방하는 제품 17건에 대한 실태조사를 하였다. 분석 결과 17건의 시료 중 5건(캔디류 1건, 건강기능식품 4건)에서 천속단이 검출되었으며, 검출 비율은 29%로 나타났다.
천속단은 골격강화, 골절치료 작용이 있는 한약재로 식품원료로는 사용할 수 없으나, 한속단의 뿌리와 잎은 식품원료로 사용이 가능하다. 본 연구에서는 식품중 천속단 혼입여부 판별을 위하여 LC-MS/MS를 이용한 동시분석법을 개발하였으며, 선택성, 직선성, 검출한계, 정량한계, 정확성, 정밀성을 검토하였다. 국내 유통중인 식품 중 어린이 키성장을 표방하는 제품 17건을 구매하여 천속단 혼입여부에 대한 실태조사를 하였다.
제안 방법
LC-MS/MS 분석은 Waters Xevo TQ-S (Milford, DE, USA)를사용하였으며, 컬럼은 Waters AQUITY UPLC TM BEH C18 (2.1×100 mm, 1.7 µm)를 사용하였다.
본 연구에서는 유효성 검증을 위해 직선성(linearity), 검출한계 (limit of detection, LOD), 정량한계(limit of quantification, LOQ), 정확성(accuracy), 정밀성(precision)을 확인하였다. 천속단과 한속 단의 지표성분이 검출되지 않은 대조시료에 표준용액을 첨가하여 선택성을 확인하였다.
40 µg/mL 농도의 표준용 액을 첨가한 시료를 3회 반복 측정하여 얻은 표준편차(standard deviation, σ)의 3배, 10배되는 값으로 계산하였다. 정밀성은 1일 3회 반복 측정하는 일내 분석(intra-day)과 연속 3일에 걸쳐 반복 측정하는 일간분석(inter-day)을 실시하였다. 정밀성은 대조시료에 0.
정확성은 회수율 시험법(recovery test)으로 측정하였으며, 대조시 료에 0.40 µg/mL 농도의 표준용액을 첨가 한 후 회수율을 확인하였다.
직선성은 표준용액을 농도별(0.05, 0.10, 0.25, 0.05, 0.75, 1.00 µg/mL)로 희석하여 검량곡선을 작성하고, 회기식과 결정계수(coefficient of determination, r 2 )를 산출하였다.
본 연구에서는 유효성 검증을 위해 직선성(linearity), 검출한계 (limit of detection, LOD), 정량한계(limit of quantification, LOQ), 정확성(accuracy), 정밀성(precision)을 확인하였다. 천속단과 한속 단의 지표성분이 검출되지 않은 대조시료에 표준용액을 첨가하여 선택성을 확인하였다. 직선성은 표준용액을 농도별(0.
표준원액(stock standard solution)은 천속단 지표성분(loganin, sweroside, akebia saponin D)과 한속단 지표성분(shanzhiside methyl ester) 표준품을 각각 메탄올에 녹여 1 µg/mL가 되도록 제조하였다.
대상 데이터
본 연구에서는 식품중 천속단 혼입여부 판별을 위하여 LC-MS/MS를 이용한 동시분석법을 개발하였으며, 선택성, 직선성, 검출한계, 정량한계, 정확성, 정밀성을 검토하였다. 국내 유통중인 식품 중 어린이 키성장을 표방하는 제품 17건을 구매하여 천속단 혼입여부에 대한 실태조사를 하였다. 분석결과 17건의 시료 중 5건의 시료에서 천속 단이 검출되었으며, 천속단 지표성분의 함량은 loganin 0.
식품 중 불법 혼입된 천속단의 실태조사를 위하여 대형마트, 약국 및 인터넷을 통해 국내 유통중인 식품 중 어린이 키성장을 표방하는 제품을 구매하였다. 본 연구에서 분석한 시료는 캔디류 4건, 액상차 및 혼합음료 2건, 기타가공품 2건, 건강기능식품 9건을 포함하여 총 17건이었다. 모든 시료는 분석 전까지 판매 조건과 동일한 조건에서 보관하였다.
또한 loganin은 산수유에도 함유되어 있는 성분이므로(15), Akebia saponin D가 검출되어야지만 천속단이 함유된 것으로 판단할 수 있다. 본 연구에서는 표준품 확보가 어렵거나 동시분석법으로 분석 시 선택성이 없는 지표성분은 제외하고, 천속단의 지표성분 3종(loganin, sweroside, akebia saponin D), 한속단의 지표성분 1종(shazhiside methyl ester)을 최종 선정였으며, 각 지표성분의 크로마토그램은 Fig. 1 에 나타내었다.
식품 중 불법 혼입된 천속단의 실태조사를 위하여 대형마트, 약국 및 인터넷을 통해 국내 유통중인 식품 중 어린이 키성장을 표방하는 제품을 구매하였다. 본 연구에서 분석한 시료는 캔디류 4건, 액상차 및 혼합음료 2건, 기타가공품 2건, 건강기능식품 9건을 포함하여 총 17건이었다.
한속단 지표 성분인 shanzhiside methyl ester는 식품의약품안전처에서 제조한 표준품을 사용하였고, 천속단 지표성분인 loganin, sweroside, akebia saponin D는 안동대학교 손건호교수에게 제공 받았다. 이동상 제조에 필요한 포름산(formic acid)는 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) 제품을 구입하였고, 아세토니트릴(acetonitrile)과 메탄올(methanol)은 Merck (Darmstadt, Germany)에서 구입하였다. 기기 분석 시 필요한 물은 Thermo Scientific Barnstead Nanopure (Marietta, OH, USA)를 이용하여 얻은 3차 증류수를 사용하였다.
한속단 지표 성분인 shanzhiside methyl ester는 식품의약품안전처에서 제조한 표준품을 사용하였고, 천속단 지표성분인 loganin, sweroside, akebia saponin D는 안동대학교 손건호교수에게 제공 받았다. 이동상 제조에 필요한 포름산(formic acid)는 Sigma-Aldrich (St.
데이터처리
검출한계(LOD) 및 정량한계(LOQ)는 0.40 µg/mL 농도의 표준용 액을 첨가한 시료를 3회 반복 측정하여 얻은 표준편차(standard deviation, σ)의 3배, 10배되는 값으로 계산하였다.
정밀성은 대조시료에 0.40 µg/mL 농도의 표준용액을 첨가하여 얻은 상대표준편차 (percentage of relative standard deviation, % RSD)로 확인하였다.
성능/효과
분석오차를 의미하는 정밀성은 1일 3회 반복 측정하는 일내 분석(intra-day)과 연속 3일에 걸쳐 반복 측정하는 일간분석 (inter-day)을 수행하였으며, 상대표준편차(% RSD)는 AOAC 가이드라인(16)인 15% 미만에 모두 적합하였다. 각 지표성분의 회수율은 93-103%를 나타내어, AOAC 가이드라인(16)인 70-125% 미만에 모두 적합하였다.
Cho 등(3)은 속단에는 당이 여러 개 결합된 사포닌(saponins) 성분들이 많이 포함되어 있으므로, 선택성 면에서 selective ion monitoring (SIM) mode가 MRM 보다 유리할 것으로 생각하여 LC-SIM-MS/MS로 천속단 한약재를 분석하였다. 본 연구에서 개발된 동시분석법은 MRM으로 분석하였으며, Cho 등(3)이 개발한 시험법보다 LOD, LOQ가 약 10배 정도 더 높았으나, 회수율은차이가 없었다. 이는 Cho 등(3)이 시험법 유효성 검증을 위한 matrix로 지표성분을 임의 농도로 첨가하여 만든 QC 검체를 사용였으나, 본 연구에서는 가공식품을 사용하였기 때문에 천속단 이나 한속단 이외에 다른 식품원료가 들어 있어 matrix가 더 복잡하기 때문으로 사료된다.
본 연구에서 분석한 17개 제품 중 11개 제품의 표시성분을 보면 원료명이 속단으로만 표기되어 있어, 한속단과 천속단 중 어느 것을 식품 원료로 사용하였는지 소비자가 확인하기 어려울 것으로 사료된다. Lee 등(17) 한속단(Phlomis umbrosa)과 달개비 (Commelina communis) 복합추출물을 우유에 첨가하여 레트에게 8주간 섭취시켰을 때, 대퇴부 길이가 증가하였다고 보고 하였다.
Lee 등(17) 한속단(Phlomis umbrosa)과 달개비 (Commelina communis) 복합추출물을 우유에 첨가하여 레트에게 8주간 섭취시켰을 때, 대퇴부 길이가 증가하였다고 보고 하였다. 본 연구에서 분석한 시료 중 6개 제품은 속단과 달개비 혼합추 출농축분말을 사용하였다고 표시되어 있었으나, 1개 제품만 한속 단달개비추출물로 표시되어 있고, 5개 제품은 속단으로만 표시되어 있어 한속단과 천속단 중 어떤 것을 사용하였는지 알 수 없었다. 또한 2개 제품은 황기추출물 등 복합물(HT042)을 함유하는 것으로 표시되어 있었는데, 황기추출물 등 복합물(HT042)은 황기(Astragalus membranaceus), 한속단(Phlomis umbrosa), 가시오갈피(Eleutherococcus senticosus)가 함유된 복합물로, 어린이 키성 장에 도움을 줄 수 있는 것으로 식품의약품안전처에서 인정한 개별인정원료이다(15).
본 연구에서는 식품 중 천속단의 혼입여부를 판별하기 위하여 LC-MS/MS를 이용한 동시분석법을 개발하였으며, 식품의 적용여 부를 확인하기 위하여 국내 유통되는 식품 중 어린이 키성장을 표방하는 제품 17건에 대한 실태조사를 하였다. 분석 결과 17건의 시료 중 5건(캔디류 1건, 건강기능식품 4건)에서 천속단이 검출되었으며, 검출 비율은 29%로 나타났다. 천속단 지표성분의 검출농도는 loganin 0.
12 μg/mL 이었다. 분석오차를 의미하는 정밀성은 1일 3회 반복 측정하는 일내 분석(intra-day)과 연속 3일에 걸쳐 반복 측정하는 일간분석 (inter-day)을 수행하였으며, 상대표준편차(% RSD)는 AOAC 가이드라인(16)인 15% 미만에 모두 적합하였다. 각 지표성분의 회수율은 93-103%를 나타내어, AOAC 가이드라인(16)인 70-125% 미만에 모두 적합하였다.
천속단과 한속단 지표성분의 선택성을 확인하기 위하여 대조시료와 표준 용액을 첨가한 시료를 분석한 결과, 대조시료에서는 지표성분의 피크가 검출되지 않았으나, 표준용액을 첨가 시료에서는 표준용 액과 동일한 머무름 시간(RT)에 피크를 확인하였다. 직선성 확인을 위하여 표준용액을 농도별로 분석하여 얻은 보정선으로부터 회기식과 결정계수를 산출하였으며, 모든 지표성분은 결정계수 (R2) 0.99 이상 우수한 직선성을 나타내었다. Shazhiside methyl ester, loganin, sweroside, akebia saponin D의 LOD는 0.
본 연구에서 식품 중 천속단의 혼입여부를 판별하기 위하여 개발된 LC-MS/MS 동시분석법의 유효성 검증을 위하여 직선성, LOD, LOQ, 정밀성 및 정확성을 확인하였다(Table 3). 천속단과 한속단 지표성분의 선택성을 확인하기 위하여 대조시료와 표준 용액을 첨가한 시료를 분석한 결과, 대조시료에서는 지표성분의 피크가 검출되지 않았으나, 표준용액을 첨가 시료에서는 표준용 액과 동일한 머무름 시간(RT)에 피크를 확인하였다. 직선성 확인을 위하여 표준용액을 농도별로 분석하여 얻은 보정선으로부터 회기식과 결정계수를 산출하였으며, 모든 지표성분은 결정계수 (R2) 0.
후속연구
이는 Cho 등(3)이 시험법 유효성 검증을 위한 matrix로 지표성분을 임의 농도로 첨가하여 만든 QC 검체를 사용였으나, 본 연구에서는 가공식품을 사용하였기 때문에 천속단 이나 한속단 이외에 다른 식품원료가 들어 있어 matrix가 더 복잡하기 때문으로 사료된다. 그러므로 본 연구에서 개발된 동시분 석법은 건강기능식품뿐만 아니라 캔디류, 액상차, 혼합음료 등 가공식품에 혼입된 천속단을 간단하면서도 신속하게 판별하는데 유용한 시험법이 될 것이다.
29 μg/mL이었다. 본 연구에서 개발된 동시분석법은 식품 중 불법 혼입된 천속단을 간단하면서도 신속하게 판별하는데 도움이 될 것으로 사료된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
천속단의 외형적 특징은?
천속단과 한속단 한약재는 외부 형태 특성 및 육안 관찰을 비롯한 관능검사로 구별할 수 있다. 천속단은 긴 원주형으로 약간 편평하거나 구부러져 있고, 찌그러진 세로 주름과 구문이 있으며, 수염뿌리 흔적이 있으나, 한속단 (Phlomis umbrosa)은 긴 원주형 혹은 방추형의 뿌리가 여러 개달려 있으며, 바깥면에 세로 잔주름이 있다(4). 천속단은 골다공증, 골절, 조골세포의 증식 및 분화 촉진에 효과가 있으나, 국내 식용경험이 없고 안정성이 입증되지 않아 식품원료로 사용이 불가하다(5-8).
천속단과 한속단을 비교하시오.
중국 약전 및 우리나라 대한민국약전외한약(생약) 규격집에는 속단의 기원식물을 산토끼꽃과(Dipsacaceae)의 천속단 (Dipsacus asperoides) 뿌리로 규정하고 있으며, 이와 명칭은 유사 하나 별개의 생약인 한속단(Phlomis umbrosa Turczaninow)은 꿀풀과(Labiatae)의 뿌리로 수재되어 있다(1-3). 천속단은 우리나라 에서는 생산되지 않고, 중국 서남부 산악지대에서 자생하고 있으나, 한속단은 우리나라의 북부 산악지대를 제외한 산기슭 어느 곳에서나 흔하게 자생한다(1,3). 천속단과 한속단 한약재는 외부 형태 특성 및 육안 관찰을 비롯한 관능검사로 구별할 수 있다.
한속단의 외형적 특징은?
천속단과 한속단 한약재는 외부 형태 특성 및 육안 관찰을 비롯한 관능검사로 구별할 수 있다. 천속단은 긴 원주형으로 약간 편평하거나 구부러져 있고, 찌그러진 세로 주름과 구문이 있으며, 수염뿌리 흔적이 있으나, 한속단 (Phlomis umbrosa)은 긴 원주형 혹은 방추형의 뿌리가 여러 개달려 있으며, 바깥면에 세로 잔주름이 있다(4). 천속단은 골다공증, 골절, 조골세포의 증식 및 분화 촉진에 효과가 있으나, 국내 식용경험이 없고 안정성이 입증되지 않아 식품원료로 사용이 불가하다(5-8).
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