[논문]기니픽에서 정제봉독겔의 광독성 평가

한상미; 홍인표; 우순옥; 김세건; 장혜리; 박관규

doi:10.17480/psk.2016.60.2.53

기니픽에서 정제봉독겔의 광독성 평가
Antigenicity of Purified Bee Venom Gel from Honeybee (Apis mellifera L.) in Guinea Pigs 원문보기

약학회지 = Yakhak hoeji, v.60 no.2, 2016년, pp.53 - 57

한상미 (국립농업과학원 농업생물부) , 홍인표 (국립농업과학원 농업생물부) , 우순옥 (국립농업과학원 농업생물부) , 김세건 (국립농업과학원 농업생물부) , 장혜리 (국립농업과학원 농업생물부) , 박관규 (대구가톨릭대학교 의과대학)

Abstract ▼ AI-Helper

This study was performed to examine the skin phototoxicity of purified bee venom (Apis mellifera L.) collected using bee venom collector. To confirm whether the gel containing purified bee venom (BV gel) causes photototoxicity when used for the skin medicinal products, phototoxicity testing was conducted using guinea pig models. The BV gel (0.1 ml/site) was administered transdermally to guinea pigs. 8-MOP was used to introduce positive control response. After administration, the guinea pigs were irradiated with UVA ($15J/cm^2$) with doses based on standard phototoxicity study guidelines. In the weight measurement and clinical observation, BV gel groups didn't show any significant changes compared with control group. BV gel groups did not show any symptoms such as erythema and edema formation of skin. This study demonstrated that BV gel has promising potential external treatment for topical uses that do not induce significant levels of skin phototoxicity.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

따라서 본 연구에서는 봉독을 의약품 외용제로 사용하기 위하여 필요한 안전성 확보를 위하여 광독성 시험을 수행하였다.
본 연구는 Hartley계 기니픽을 이용하여 꿀벌 일벌독인 봉독을 유효성분으로 하는 정제봉독겔의 UV 조사에 의한 광독성을 조사하기 위하여 시험물질을 100% 농도로 정제봉독겔 투여군에 적용하여 부형제대조군 및 양성대조군과 비교하였다. 사용동물 수는 군당 5마리로 하였고, 시험기간의 사망률, 일반증상, 체중 변화 및 UV 조사 후 24, 48 및 72시간째 피부반응을 관찰하였다.
) 일벌의 독인 봉독은 다양한 성분이 복합적으로 구성되어 있으며, 주 성분인 멜리틴(melittin)은 항염증과,^3,4)항균작용,⁵⁾ 강력한 진통작용,⁶⁾ 면역증강⁷⁾ 등의 역할을 한다고 알려져 있다. 본 연구팀에서는 2005년 봉독채집장치와 채집된 봉독으로부터 이물질을 제거할 수 있는 봉독정제법을 개발하였다. 이로써 국내에서도 봉독 채집이 가능하게 되었으며, 화장품과 의 의약품의 원료로 순수 정제봉독이 상용화되었다.

제안 방법

1 ml씩 도포한 후 30분간 방치하였다. 그 후 기니픽 고정틀에서 넣어서 기니픽 등배부 오른쪽 절반은 알루미늄 호일로 차단하여 UV가 닿지 않도록 하였고, 나머지 부분만 UV를 조사하였다(Fig. 1). 이때 UV 광량은 UVA(305~420 nm)에서 15 J/cm²가 될 때가지 조사하였다.
투여량은 예비시험을 통해 시험물질의 조제 및 투여 가능한 농도는 100%로 확인되었으며, 이 농도에서도 감작이 관찰되지 않았다. 따라서 시험물질 100%를 감작 및 야기의 투여농도로 설정하였다.
모든 동물에 대하여 입수시, 군 분리시 및 투여 전, 그리고 최종 평가일에 체중을 측정하였다.
사료의 성분 분석 성적서를 검토한 결과 시험결과에 영향을 줄만한 요인은 없었다. 물은 지하수를 자외선 살균기 및 미세여과장치로 소독한 후 물병을 이용하여 자유 음수 하도록 하였다.
본 연구는 Hartley계 기니픽을 이용하여 꿀벌 일벌독인 봉독을 유효성분으로 하는 정제봉독겔의 UV 조사에 의한 광독성을 조사하기 위하여 시험물질을 100% 농도로 정제봉독겔 투여군에 적용하여 부형제대조군 및 양성대조군과 비교하였다. 사용동물 수는 군당 5마리로 하였고, 시험기간의 사망률, 일반증상, 체중 변화 및 UV 조사 후 24, 48 및 72시간째 피부반응을 관찰하였다. 시험결과 사망동물, 일반증상 및 체중변화에서 이상변화는 관찰되지 않았다.
온도 23±3℃, 상대습도 55±15%, 환기횟수 10~20회/hr, 조명시간 12시간(오전 8시 점등~오후 8시 소등) 및 조도 150~300 Lux로 설정한 (주)캠온 비임상연구소 제1동물 사육구역 8호실에서 수행하였다. 시험기간 중 동물실의 온습도는 컴퓨터 시스템을 이용한 자동 온습도 측정기로 매시간 환기횟수 및 조도 등의 환경조건을 정기적으로 측정하였다. 환경 측정 결과, 실험기간 동안 온도는 21.
실험기간 동안 사망여부, 일반증상의 종류, 발현 일및 증상의 정도를 1일 1회 이상 관찰하여 개체 별로 기록하였다. 첫 투여일을 Day 1로 설정하였다.
온도 23±3℃, 상대습도 55±15%, 환기횟수 10~20회/hr, 조명시간 12시간(오전 8시 점등~오후 8시 소등) 및 조도 150~300 Lux로 설정한 (주)캠온 비임상연구소 제1동물 사육구역 8호실에서 수행하였다.
조사종료 24, 48 및 72시간째 적용부위의 홍반과 가피 및 부종의 상태를 관찰하여 Table II의 Draize 평가기준에 따라 판정하였다.¹⁹⁾ 광독성 판정은 Table III의 기준에 따라 판정된 홍반과 가피항목 및 부종항목의 점수에 대해 평균값을 구 하였다.
투여 전 기니픽의 등배부를 제모기와 면도기를 이용하여 전모 하였다. 투여 전 전모부위를 좌우(1.
투여 전 전모부위를 좌우(1.5 cm×1.5 cm/site)로 나눈 후부형제, 시험물질 및 양성대조물질을 1 site당 0.1 ml씩 도포한 후 30분간 방치하였다.

대상 데이터

본 실험에서 사용한 정제봉독겔(동성제약, 한국)은 국내산 꿀벌로부터 봉독채집장치를 이용하여 채집된 봉독을 봉독의 간이정제방법⁸⁾으로 정제된 정제봉독(청진바이오텍, 한국)을 유효성분으로하는 하는 여드름 치료제 임상시험용 제품을 사용하였다. 음성대조물질은 멸균 주사용수(대한약품공업(주), 한국)를 양성대 조물질은 8-methoxypsoralen(8-MOP, Sigma-Aldrich, USA), 8-MOP의 부형제로는 아세톤(Sigma-Aldrich, USA)을 시험에 사용하였다.
사료, 물 및 오염물질 검사

사료는 (주)카길에그리퓨리나(한국)에서 생산하는 기니픽용 고형사료를 구입하여 자유섭취하도록 하였다. 사료의 성분 분석 성적서를 검토한 결과 시험결과에 영향을 줄만한 요인은 없었다.
시험동물인 특정병원체 부재 수컷 기니픽 Hartley 17두를 구입하여 사용하였다(샘타코 바이오코리아(주), 한국). 입수시 체중은 274.
으로 정제된 정제봉독(청진바이오텍, 한국)을 유효성분으로하는 하는 여드름 치료제 임상시험용 제품을 사용하였다. 음성대조물질은 멸균 주사용수(대한약품공업(주), 한국)를 양성대 조물질은 8-methoxypsoralen(8-MOP, Sigma-Aldrich, USA), 8-MOP의 부형제로는 아세톤(Sigma-Aldrich, USA)을 시험에 사용하였다.
시험동물인 특정병원체 부재 수컷 기니픽 Hartley 17두를 구입하여 사용하였다(샘타코 바이오코리아(주), 한국). 입수시 체중은 274.16~300.26 g이였으며 7일간의 순화 기간을 거쳐 체중 332.84~369.66 g인 15두의 기니픽을 시험에 사용하였다. 본 시험은 AAALAC(Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care International) 인증을 득한 (주)캠온 실험동물운영위원회 승인을 득하였다(심의번호 14-G327).

데이터처리

19) 광독성 판정은 Table III의 기준에 따라 판정된 홍반과 가피항목 및 부종항목의 점수에 대해 평균값을 구 하였다. 조사부위와 비조사부위의 평균값을 비교하여 조사부위가 0.

성능/효과

멜리틴만을 분리 정제한 봉독은 전신 과민반응이나 부종, 동통 그리고 종창과 같은 국소 · 즉시형 과민반응을 현저하게 감소시키나, Hartley계 기니픽을 이용한 능동성 아나필락시스 반응에서 항원 성이 있는 것으로 보고되어 있다.¹⁵⁾ 그러나 본 연구진에서는 정제봉독의 능동성 아나필락시스반응에서 항원성이 없는 것으로 확인하였을 뿐만 아니라, 멜리틴보다는 정제봉독을 사용했을 경우 세포독성에 대한 우려가 없을 뿐 더러, 다양한 약리효과를 보이는 것으로 확인할 수 있었다.¹⁶⁾
2). 대조군과 비교하여 시험물질에서 체중변화는 전혀 관찰되지 않는 것으로 보아, 봉독으로 인한 사료 소모량의 감소, 음수량의 변화, 임상증상, 장기 무게의 변화, 혈액 및 혈청학적 변화 등이 없는 것으로 판단되었다.
이상의 결과로 보아 꿀벌의 일벌독인 정제봉독을 함유한 정제 봉독겔은 100%의 농도에서 광독성이 없는 것으로 판단되었다. 따라서 정제봉독은 전신투여를 통해 피부에 분포되거나 국소적용 되었을 때 광독성을 일으키지 않는 것으로 확인되었다.
시험 기간 중 사망동물이나 시험물질에 의한 일반증상은 관찰 되지 않았다(Table IV). 따라서, 봉독을 함유한 정제봉독겔은 빛에 노출되어도 시험동물의 사망이나 이상반응을 일으키지 않는 것으로 확인되었다.
피부반응에 있어 정제봉독겔 투여군에서는 어떠한 피부변화도 관찰되지 않았다. 반면 양성대조군의 경우에는 뚜렷한 홍반과 중등도의 강한 홍반 및 경도 또는 뚜렷한 부종이 관찰되어 광독성이 있음을 확인하였다. 따라서 정제봉독을 유효성분으로 하는 정제봉독겔은 100%의 농도에서도 광독성이 없는 것으로 판단되어 이후 연고 등 외용제로 개발이 가능하게 되었다.
사용동물 수는 군당 5마리로 하였고, 시험기간의 사망률, 일반증상, 체중 변화 및 UV 조사 후 24, 48 및 72시간째 피부반응을 관찰하였다. 시험결과 사망동물, 일반증상 및 체중변화에서 이상변화는 관찰되지 않았다. 피부반응에 있어 정제봉독겔 투여군에서는 어떠한 피부변화도 관찰되지 않았다.
UV 조사부위 중 시험물질 투여부위에서는 UV 조사 종료 24, 48, 72시간째 아무런 피부반응이 관찰되지 않아 광독성 평가지수는 0이였다(Table V). 양성대조군의 모든 동물에서는 grade 2의 뚜렷한 홍반(pronounced erythema)과 grade 3의 중등도의 강한 홍반(strong erythema)이 관찰되었고, grade 1의 경도의 부종(mild erythema)과 grade 2인 뚜렷한 부종 (pronounced erythema)이 관찰되었다. 광독성 평가지수는 각각 4.
이상의 결과로 보아 꿀벌의 일벌독인 정제봉독을 함유한 정제 봉독겔은 100%의 농도에서 광독성이 없는 것으로 판단되었다. 따라서 정제봉독은 전신투여를 통해 피부에 분포되거나 국소적용 되었을 때 광독성을 일으키지 않는 것으로 확인되었다.
시험군의 구성과 투여량 및 투여경로는 Table I과 같이 설정 하였다. 투여량은 예비시험을 통해 시험물질의 조제 및 투여 가능한 농도는 100%로 확인되었으며, 이 농도에서도 감작이 관찰되지 않았다. 따라서 시험물질 100%를 감작 및 야기의 투여농도로 설정하였다.
시험기간 중 동물실의 온습도는 컴퓨터 시스템을 이용한 자동 온습도 측정기로 매시간 환기횟수 및 조도 등의 환경조건을 정기적으로 측정하였다. 환경 측정 결과, 실험기간 동안 온도는 21.3~22.0℃, 상대습도 53.6~66.2%이였으며, 온도, 습도, 환기횟수, 조도 등에서 설정 범위를 벗어나 시험의 결과에 나쁜 영향을 끼칠만한 이상은 관찰되지 않았다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	봉독은 무엇인가?	순수 천연물질이면서 강력한 항균, 항염증 효과를 갖는 봉독은 부작용과 잔류에 대한 위험성이 적어 봉침요법으로 오래전부터 관절염, 통풍 등의 질환에 사용되어 오고 있다.1,2) 서양종꿀벌 (Apis mellifera L.) 일벌의 독인 봉독은 다양한 성분이 복합적으로 구성되어 있으며, 주 성분인 멜리틴(melittin)은 항염증과,3,4)항균작용,5) 강력한 진통작용,6) 면역증강7) 등의 역할을 한다고 알려져 있다. 본 연구팀에서는 2005년 봉독채집장치와 채집된 봉독으로부터 이물질을 제거할 수 있는 봉독정제법을 개발하였다.
	봉독의 주성분인 멜리틴은 어떤 역할을 하는가?	1,2) 서양종꿀벌 (Apis mellifera L.) 일벌의 독인 봉독은 다양한 성분이 복합적으로 구성되어 있으며, 주 성분인 멜리틴(melittin)은 항염증과,3,4)항균작용,5) 강력한 진통작용,6) 면역증강7) 등의 역할을 한다고 알려져 있다. 본 연구팀에서는 2005년 봉독채집장치와 채집된 봉독으로부터 이물질을 제거할 수 있는 봉독정제법을 개발하였다.
	정제봉독은 여드름 치료와 어떤 관계가 있나?	8) 정제봉독은 피부주름 억제, 미백 등의 효과는 물론 피부자극 및 안점막자극 시험에서 모두 무독성임이 입증됨에 따라 봉독화장품으로 개발, 판매되고 있다.9-12) 최근 봉독이 여드름유발 원인균인 Propionibacterium acnes는 물론 피부상재균인 Staphylococcus epidermidis 등에 대한 항균효과 및 항염증효과가 구명되었으며,13,14) 이를 유효성분으로 하는 여드름 치료제는 식품의약품안전처로부터 임상2상 시험을 허가 받은 상태이다. 그러나 한방에서는 봉독의 위험요소인 알러지 반응을 억제하기 위해 봉독의 주 항원으로 작용하는 포스포리파아제(phospholipase A2), 히알루니다아제(hyaluronidase)와 가려움이나 염증을 일으키는 히스타민 (histamine) 등의 성분을 제거하고 순수한 멜리틴(melittin)만을 분리 정제하여 약침용 봉독으로 사용한다고 알려져 있다.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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