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제안 방법
- GABA 함량은 시료 1g을 정확히 측정하여 증류수 10 mL을 가하고 5시간 동안 초음파 추출기(Ultrasonic cleaner, frequency 40 KHz, power 810 W, SD-350H, Seong Dong, Seoul, Korea)를 이용하여 추출하였다. 추출한 후 원심분리한 다음 0.
- 그 후 단백질 함량은 켈달(kjeldahl)법으로, 조회분은 525℃에서 5시간 회화시킨 후 무게를 측정하였다. 건조 후의 무게에서 단백질과 회분 함량을 뺀 값을 식품섬유 함량으로 계산하였다.
- 추출, 원심분리, 상층액 제거 과정을 반복한 후 추출액 10 mL을 가하고, 100℃ 의 진탕항온기에서 25분간 반응시켰다. 그 후 분광계(UV-1600, Shimadzu, Tokyo, Japan)를 사용하여 552 nm와 510 nm에서 반응액의 흡광도 값을 측정하여, 552 nm 흡광도 수치에서 510 nm 흡광도 수치를 뺀 수치로 계산하였다. 표준물질로 D-xylose (Sigma) 를 사용하여 검량선/보정선을 작성하였다.
- 7로 조정한 후, 3260 U/mL의 아밀로글루코시데이스(amyloglucosidase)(Megazyme) 300 µL를 넣고 60℃에서 45분간 반응시켰다. 반응이 끝난 후 60℃의 95% 에탄올(ethanol) 225 mL를 가하여 실온에서 1시간 이상 방치하여 침전시킨 후 미리 셀라이트(celite, Sigma)를 넣어 항량 시킨 유리여과기에 시험용액을 넣어 흡입 여과하고, 잔사는 78% ethanol, 95% ethanol, 아세톤(acetone) 순으로 씻어 내린 후, 건조하여 무게를 측정하였다. 그 후 단백질 함량은 켈달(kjeldahl)법으로, 조회분은 525℃에서 5시간 회화시킨 후 무게를 측정하였다.
- 배양액에 GOPOD (glucose oxidase/peroxidase) 3.0 mL 를 가하고 50℃에서 20분간 배양한 후 분광광도계(spectrophotometer)(UV-1650 PC, Shimadzu, Tokyo, Japan)를 이용하여 510 nm에서 흡광도를 측정하여 β-glucan의 함량을 계산하였다.
- 본 실험에 사용된 보리는 국립식량과학원 벼맥류부에서 2014년에 생산된 것으로 쌀보리(Hordeum sativum)로 메성쌀보리인 다한, 찰성 쌀보리인 흰찰쌀, 유색 쌀보리인 흑광과 흑누리, 유색찰성 쌀보리인 보석찰을 사용하였다. 보리는 시험용 도정기를 이용하여 27, 23, 19 및 15%로 도정 한 후 맥강을 분리하고 도정된 보리는 분쇄기(Micro hammer cutter mill type-3, Culatti AG, Zurich, Swiss)를 사용하여 80메시(mesh) 이하로 분쇄하여 사용하였다.
- 보릿가루의 활용도를 높이기 위하여 5가지 품종의 보리에 대한 도정도별 기능성분 변화를 분석하였다. 도정도별 총 폴리페놀 함량은 도정도가 27, 23, 19, 15%와 원곡으로 감소함에 따라 각각 0.
- 2 µL 셀룰로스 거르개(cellulose filter)로 여과하여 HPLC systems (Bio LC) (Dionex, Sunnyvale, CA, USA)로 분석하였다. 분석조건은 이동상은 Water (A)와 0.1% 아세트산(acetic acid)-60% 아세토나이트릴(acetonitrile)을 흘려주었고, gradient 조건은 A:B를 초기 100:0 (%, v/v)에서 0.5분에 98:2, 15분에 93:7, 19분에 90:10, 32분에 67:33, 34분에서 37분까지 0:100으로 설정하였으며, 유속은 1 mL/min, 시료 주입량은 20 mL이었다. 검출기는 UV 254 nm에서 검출하였으며, 컬럼은 RP C18 column (4.
- 총 아라비노자일란 함량은 플로로글루시놀(ploroglucinol) 방법을 이용하여 비색법으로 측정하였다. 시료의 저분자 당을 제거하기 위해 시료 1g에 20 mL의 80% ethanol (v/v)을 가하고 100℃ 의 진탕 항온기(JBBS 30-T, JSR, Seoul, Korea)에서 5분간 추출 하였으며, 이를 원심분리하여 상층액을 제거하였다. 추출, 원심분리, 상층액 제거 과정을 반복한 후 추출액 10 mL을 가하고, 100℃ 의 진탕항온기에서 25분간 반응시켰다.
- 보리를 이용한 가공하기 위해서는 일반적으로 도정을 실시하며, 도정도에 따른 유용성분과 생리활성에 차이가 있으며, 그 차이는 품종에 따라 다르게 나타날 수 있다. 이에 보릿가루 활용성 증대를 위해서 5가지 품종의 쌀보리를 도정도별로 도정하고 각각의 산화방지 성분 및 기능성분 변화를 분석하고, 도정된 보릿가루의 기능성분 변화를 비교하였다
- 즉, 각 추출물의 100 µL에 2% 탄산나트륨(Na2CO3) 용액 2 mL를 가한 후 3분간 방치한 후, 50% Folin-Ciocalteu reagent 100 µL를 첨가 후 실온에서 30분 반응한 다음 분광광도계(UV-1600, Shimadzu, Tokyo, Japan)를 사용하여 750 nm에서 반응액의 흡광도 값을 측정하였다.
- 총 폴리페놀 분석을 위하여 시료 3g에 80% 에탄올(ethanol) 40mL 첨가하여 초음파 추출기(Ultrasonic cleaner, frequency 40KHz, power 810 W, SD-350H, Seong Dong, Seoul, Korea)로 3회 반복 추출하였다. 추출 후 여과(Whatman No.
- , Seoul, Korea) 후 99% dimethyl sulfoxide(DMSO, Samchun, Pyeongtaek, Korea)에 재용해하여 사용하였다. 총 폴리페놀 함량은 Dewanto 등(21)의 방법을 변형하여 사용하였으며 폴린-시오칼 토시약(Folin-Ciocalteu reagent) 추출물의 폴리페놀성 화합물에 의해 환원된 결과 볼리브데넘 청색으로 발색하는 것을 원리로 분석하였다. 즉, 각 추출물의 100 µL에 2% 탄산나트륨(Na2CO3) 용액 2 mL를 가한 후 3분간 방치한 후, 50% Folin-Ciocalteu reagent 100 µL를 첨가 후 실온에서 30분 반응한 다음 분광광도계(UV-1600, Shimadzu, Tokyo, Japan)를 사용하여 750 nm에서 반응액의 흡광도 값을 측정하였다.
- 총 플라보노이드 함량은 Jia 등(22)의 방법을 변형하여 분석하였다. 폴리페놀 분석을 위한 추출물 250 µL에 증류수 1 mL와 5% NaNO2/아질산소듐 75 µL를 가한 다음 5분 후 10% 염화알루미튬 육수화물(AlCl3·6H2O) 150 µL를 가하여 6분간 방치하고 1 M 수산화나트륨(NaOH) 500 µL를 가하여 11분간 방치한 후, 반응액의 흡광도를 510 nm에서 측정하였다.
- 추출한 후 원심분리한 다음 0.2 µL 셀룰로스 거르개(cellulose filter)로 여과하여 HPLC systems (Bio LC) (Dionex, Sunnyvale, CA, USA)로 분석하였다.
- 그 후 분광계(UV-1600, Shimadzu, Tokyo, Japan)를 사용하여 552 nm와 510 nm에서 반응액의 흡광도 값을 측정하여, 552 nm 흡광도 수치에서 510 nm 흡광도 수치를 뺀 수치로 계산하였다. 표준물질로 D-xylose (Sigma) 를 사용하여 검량선/보정선을 작성하였다. Extraction solution은 플로로글루시놀 5g을 ethanol 25 mL에 녹여서 1.
대상 데이터
- 본 실험에 사용된 보리는 국립식량과학원 벼맥류부에서 2014년에 생산된 것으로 쌀보리(Hordeum sativum)로 메성쌀보리인 다한, 찰성 쌀보리인 흰찰쌀, 유색 쌀보리인 흑광과 흑누리, 유색찰성 쌀보리인 보석찰을 사용하였다.
- 총 폴리페놀 분석을 위하여 시료 3g에 80% 에탄올(ethanol) 40mL 첨가하여 초음파 추출기(Ultrasonic cleaner, frequency 40KHz, power 810 W, SD-350H, Seong Dong, Seoul, Korea)로 3회 반복 추출하였다. 추출 후 여과(Whatman No. 4, GE Healthcare, Maidstone, UK)하여 냉동 건조(FD 5508, Ilshin Lab Co., Seoul, Korea) 후 99% dimethyl sulfoxide(DMSO, Samchun, Pyeongtaek, Korea)에 재용해하여 사용하였다. 총 폴리페놀 함량은 Dewanto 등(21)의 방법을 변형하여 사용하였으며 폴린-시오칼 토시약(Folin-Ciocalteu reagent) 추출물의 폴리페놀성 화합물에 의해 환원된 결과 볼리브데넘 청색으로 발색하는 것을 원리로 분석하였다.
- 폴리페놀 분석을 위한 추출물 250 µL에 증류수 1 mL와 5% NaNO2/아질산소듐 75 µL를 가한 다음 5분 후 10% 염화알루미튬 육수화물(AlCl3·6H2O) 150 µL를 가하여 6분간 방치하고 1 M 수산화나트륨(NaOH) 500 µL를 가하여 11분간 방치한 후, 반응액의 흡광도를 510 nm에서 측정하였다. 표준물질로 (+)-catechin hydrate (Sigma-Aldrich)를 사용하여 보정선을 작성하였다.
데이터처리
- 통계분석은 SPSS 통계프로그램(Statistical Package for the Social Science, Ver. 12.0 SPSS Inc., Chicago, USA)을 이용하여 각 측정군의 평균과 표준편차를 산출하고 처리조건에 따른 유의차를 일원배치 분산분석(one-way ANOVA)(analysis of variance)으로 분석한 뒤 신뢰구간 p<0.05에서 던컨 시험(Duncan’s multiple range test)을 실시하였다.
이론/모형
- β-glucan의 함량은 β-D-glucan 분석 키트(Megazyme)을 이용하여 Mccleary와 Glennie-Holmes(24)의 방법을 이용하여 측정하였다.
- 반응이 끝난 후 60℃의 95% 에탄올(ethanol) 225 mL를 가하여 실온에서 1시간 이상 방치하여 침전시킨 후 미리 셀라이트(celite, Sigma)를 넣어 항량 시킨 유리여과기에 시험용액을 넣어 흡입 여과하고, 잔사는 78% ethanol, 95% ethanol, 아세톤(acetone) 순으로 씻어 내린 후, 건조하여 무게를 측정하였다. 그 후 단백질 함량은 켈달(kjeldahl)법으로, 조회분은 525℃에서 5시간 회화시킨 후 무게를 측정하였다. 건조 후의 무게에서 단백질과 회분 함량을 뺀 값을 식품섬유 함량으로 계산하였다.
- 보릿가루의 식품섬유 함량은 Prosky 등(23)이 제안한 방법에 따라 분석하였다. 즉, 시료 당 2개 씩 1 g 취하여 400 mL 톨 비커에 넣고 MES/TRIS 완충용액(buffer) 40 mL씩 가하여 시료를 충분히 분산시킨 후 3000 U/mL의 내열성 알파아밀레이스(αamylase)(Megazyme, Wicklow, Ireland) 50 µL를 가하여, 95-100℃ 진탕항온수조 (BS-21, JEIO Tech, Daejeon, Korea)에 넣어 65분간 교반시켰다.
- 총 아라비노자일란 함량은 플로로글루시놀(ploroglucinol) 방법을 이용하여 비색법으로 측정하였다. 시료의 저분자 당을 제거하기 위해 시료 1g에 20 mL의 80% ethanol (v/v)을 가하고 100℃ 의 진탕 항온기(JBBS 30-T, JSR, Seoul, Korea)에서 5분간 추출 하였으며, 이를 원심분리하여 상층액을 제거하였다.
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