붉은싸리버섯 추출물의 항산화 및 Human Neutrophil Elastase 저해활성 Study on the Antioxidant and Human Neutrophil Elastase Inhibitory Activities of Mushroom Ramaria formosa Extracts원문보기
천연자원으로부터 항노화 화장품 신소재를 탐색하던 중, 국내 자생버섯의 일종인 붉은싸리버섯 자실체 추출물이 항산화 활성과 인체 호중구 엘라스타제 저해활성이 우수함을 확인하고 일련의 연구를 수행하였다. 붉은싸리버섯 추출물의 DPPH 라디칼 소거활성은 붉은싸리버섯 추출물 $500{\mu}g/mL$ 처리시 $117.0{\mu}g/mL$ (ascorbic acid 환산값)의 매우 우수한 소거활성을 나타냈다. Peroxy 라디칼 소거활성을 oxygen radical absorbance capacity (ORAC) assay 를 통하여 측정한 결과 붉은싸리버섯 추출물 1, 10, $20{\mu}g/mL$ 처리 시, 각각 0.8, 5.2, 7.8 $ORAC_{Roo}$ (trolox equivalents, $1{\mu}M$)로 농도 의존적으로 높은 소거활성을 나타냈다. 뿐만아니라 cellular antioxidant capacity를 DCF fluorescence intensity (% of control)로 조사한 결과에서도 붉은싸리버섯 추출물 $20{\mu}g/mL$ 처리시 약 30% 이상 높은 항산화 활성을 나타냈다. Human neutrophil elastase 저해활성은 농도 의존적으로 저해활성을 나타냈으며 특히 에탄올 추출분획에서 $ED_{50}$ 값은 $42.9{\mu}g/mL$이었다. 붉은싸리버섯 추출물은 Bacillus subtilis (B. subtilis), Escherichia coli (E. coli), Candida albicans (C. albicans), Aspergillus oryzae (A. oryzae) 균주 모두에서 항균활성은 나타나지 않았다. 또한 염증성 cytokine인 interleukin-10 및 interferon-${\gamma}$ (IFN-${\gamma}$)의 생산 또는 분비 조절에는 영향을 미치지 않았다. 이상의 결과로 붉은싸리버섯 추출물은 항산화활성과 elastase 저해활성을 우수하여 피부에 자극이 없는 항노화 화장품 조성물로 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.
천연자원으로부터 항노화 화장품 신소재를 탐색하던 중, 국내 자생버섯의 일종인 붉은싸리버섯 자실체 추출물이 항산화 활성과 인체 호중구 엘라스타제 저해활성이 우수함을 확인하고 일련의 연구를 수행하였다. 붉은싸리버섯 추출물의 DPPH 라디칼 소거활성은 붉은싸리버섯 추출물 $500{\mu}g/mL$ 처리시 $117.0{\mu}g/mL$ (ascorbic acid 환산값)의 매우 우수한 소거활성을 나타냈다. Peroxy 라디칼 소거활성을 oxygen radical absorbance capacity (ORAC) assay 를 통하여 측정한 결과 붉은싸리버섯 추출물 1, 10, $20{\mu}g/mL$ 처리 시, 각각 0.8, 5.2, 7.8 $ORAC_{Roo}$ (trolox equivalents, $1{\mu}M$)로 농도 의존적으로 높은 소거활성을 나타냈다. 뿐만아니라 cellular antioxidant capacity를 DCF fluorescence intensity (% of control)로 조사한 결과에서도 붉은싸리버섯 추출물 $20{\mu}g/mL$ 처리시 약 30% 이상 높은 항산화 활성을 나타냈다. Human neutrophil elastase 저해활성은 농도 의존적으로 저해활성을 나타냈으며 특히 에탄올 추출분획에서 $ED_{50}$ 값은 $42.9{\mu}g/mL$이었다. 붉은싸리버섯 추출물은 Bacillus subtilis (B. subtilis), Escherichia coli (E. coli), Candida albicans (C. albicans), Aspergillus oryzae (A. oryzae) 균주 모두에서 항균활성은 나타나지 않았다. 또한 염증성 cytokine인 interleukin-10 및 interferon-${\gamma}$ (IFN-${\gamma}$)의 생산 또는 분비 조절에는 영향을 미치지 않았다. 이상의 결과로 붉은싸리버섯 추출물은 항산화활성과 elastase 저해활성을 우수하여 피부에 자극이 없는 항노화 화장품 조성물로 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.
In searching for novel agents for skin anti-aging from natural resources, we found that the extract of the fruiting bodies of Ramaria formosa (R. formosa) had significant antioxidant and human neutrophil elastase (HNE) inhibitory activities. R. formosa extract exhibited a considerable DPPH radical s...
In searching for novel agents for skin anti-aging from natural resources, we found that the extract of the fruiting bodies of Ramaria formosa (R. formosa) had significant antioxidant and human neutrophil elastase (HNE) inhibitory activities. R. formosa extract exhibited a considerable DPPH radical scavenging activity with an antioxidant content of 117.0mg/mL (ascorbic acid equivalents) at the concentration of $500{\mu}g/mL$. The capacity of R. formosa extract to scavenge peroxy radicals measured by ORAC assay also showed dose-dependent antioxidant effect with $ORAC_{Roo}$ (trolox equivalents, $1{\mu}M$) values of 0.8, 5.2, and 7.8 at the concentrations of 1, 10, and $20{\mu}g/mL$. The cellular antioxidant capacity of R. formosa extract was investigated by assaying the cellular fluorescence intensity using dichlorodihydrofluorescein (DCF). The cellular oxidative stress induced by AAPH, $Cu^{2+}$ or $H_2O_2$ in HepG2 cells was significantly attenuated by more than 30% at $20{\mu}g/mL$ of R. formosa extract. HNE activity was reduced by treatment with R. formosa extract in a dose-dependent manner, and the $ED_{50}$ value for the ethanol extract of R. formosa was $42.9{\mu}g/mL$. R. formosa extract did not exhibited antimicrobial activity against four microorganisms including Bacillus subtilis (B. subtilis), Escherichia coli (E. coli), Candida albicans (C. albicans), Aspergillus oryzae (A. oryzae). Furthermore, the extract did not affect the inflammatory cytokine production of interleukin-10 and interferon-${\gamma}$ in NK92 cells. From the above results, we found that R. formosa extract has considerable antioxidant and elastase inhibitory effects, and does not stimulate immune cells. These findings suggest that R. formosa extract may be used as a bioactive component in cosmetic composition.
In searching for novel agents for skin anti-aging from natural resources, we found that the extract of the fruiting bodies of Ramaria formosa (R. formosa) had significant antioxidant and human neutrophil elastase (HNE) inhibitory activities. R. formosa extract exhibited a considerable DPPH radical scavenging activity with an antioxidant content of 117.0mg/mL (ascorbic acid equivalents) at the concentration of $500{\mu}g/mL$. The capacity of R. formosa extract to scavenge peroxy radicals measured by ORAC assay also showed dose-dependent antioxidant effect with $ORAC_{Roo}$ (trolox equivalents, $1{\mu}M$) values of 0.8, 5.2, and 7.8 at the concentrations of 1, 10, and $20{\mu}g/mL$. The cellular antioxidant capacity of R. formosa extract was investigated by assaying the cellular fluorescence intensity using dichlorodihydrofluorescein (DCF). The cellular oxidative stress induced by AAPH, $Cu^{2+}$ or $H_2O_2$ in HepG2 cells was significantly attenuated by more than 30% at $20{\mu}g/mL$ of R. formosa extract. HNE activity was reduced by treatment with R. formosa extract in a dose-dependent manner, and the $ED_{50}$ value for the ethanol extract of R. formosa was $42.9{\mu}g/mL$. R. formosa extract did not exhibited antimicrobial activity against four microorganisms including Bacillus subtilis (B. subtilis), Escherichia coli (E. coli), Candida albicans (C. albicans), Aspergillus oryzae (A. oryzae). Furthermore, the extract did not affect the inflammatory cytokine production of interleukin-10 and interferon-${\gamma}$ in NK92 cells. From the above results, we found that R. formosa extract has considerable antioxidant and elastase inhibitory effects, and does not stimulate immune cells. These findings suggest that R. formosa extract may be used as a bioactive component in cosmetic composition.
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문제 정의
Elastase는 동물결합 조직의 불용성 탄성섬유 단백질인 elastin을 분해시켜 피부의 진피조직의 그물망 구조 결합을 끊어 주는 역할을 하는 주름생성의 주원인이 되는 효소로 알려져 있다[22-23]. 따라서 붉은싸리버섯 추출물과 이의 분획물이 HNE 저해활성에 어떠한 영향을 미치는가를 조사하였다. 즉, 붉은싸리버섯 자실체의 ethanol 추출물과 이것의 에틸아세테이트 용매 분획물에 대한 HNE 저해활성을 측정한 결과, Figure 8과 같이 두 시료 모두에서 농도 의존적인 HNE 저해활성을 나타냈다.
본 연구에서는 국내 자생버섯의 일종인 붉은싸리버섯 추출물의 항노화 소재로서의 활용 가능성을 확인하기 위하여 일련의 연구를 수행하였다. 먼저 붉은싸리버섯 추출물의 항산화 활성을 조사한 결과, 농도 의존적으로 DPPH 라디칼 소거활성을 나타냄을 확인하였다.
본 연구에서는 천연물로부터 항산화 활성이 우수한 새로운 화장품 소재를 탐색하던 중, 국내 자생버섯의 일종인 붉은싸리버섯 자실체 추출물이 항산화 활성이 우수함을 확인하고 일련의 연구를 수행하였다.
제안 방법
0.2 mg/mL soybean trypsin inhibitor 용액 100 µL를 첨가하여 반응을 정지시킨 후, ELISA reader를 이용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 다음의 식에 의하여 elastase 저해활성(%)을 계산하였다.
37 ℃에서 18 h 동안 염증을 유발하기 위해 500 µg의 P-10과 함께 붉은싸리버섯 추출물을 상기 NK92 세포에 처리한 후, 세포를 제외한 상층액을 수득하여, 효소면역분석(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) 키트를 사용하여 IFN-γ를 검출하였다.
AAPH 또는 Cu2+로 유도시킨 ROS에 대한 시료의 세포내 항산화 활성은 DCFH-DA를 이용하여 측정하였다. DCFH-DA는 세포막을 통해 세포로 유입되면 세포질에 존재하는 esterase에 의해 DCFH로 가수분해 되고, 세포 내에 ROS가 존재하게 되면 DCF로 산화되어 excitation 485 nm, emission 535 nm에서 green색의 형광강도를 나타낸다.
DPPH 라디칼 소거 활성은 Brand-Williams의 방법을 변형[16]하여 측정하였으며 대표적인 항산화제인 ascorbic acid (AsA)와 비교하였다. 즉 96-well plate에 에탄올로 녹인 150 µM DPPH 용액 198 µL와 DMSO에 녹인 각 시료를 농도별로 2 µL 첨가하였으며, 이때 대조군에는 시료 대신 DMSO를 2 µL 첨가하였다.
Sample blank로 CuCl2 용액 대신에 10 mM PBS를 사용하였으며, 시료의 reducing capacity는 Cu1+/neocuproine의 extinction coefficient (7.95 × 103 M-1cm-1)를 사용하여 흡광도로부터 계산된 Cu1+의 농도로서 표시하였다.
곰팡이균주는 고체배지에 접종하고 28 ℃에서 48 h 동안 배양한 후 곰팡이 균체가 자란 가장자리를 멸균된 칼로 0.5 mm 크기로 자른 후 새로운 PDA 배지에 접종하고 배지의 가장자리에 샘플 30 µL씩 접종한 후 28 ℃에서 7일간 배양하며 곰팡이 균사체가 확장되지 못하는 것을 곰팡이에 대한 항균활성 양성으로 판정하였다.
붉은싸리버섯 추출물의 peroxyl 라디칼에 대한 소거 활성이 라디칼에 전자를 공여함으로써 나타난 것인가를 확인하기 위하여 Cu2+로부터 Cu+로의 reducing capacity를 측정하였다. 그 결과, Figure 4와 같이 붉은싸리버섯 추출물은 1 µg/mL 처리 시 0.
붉은싸리버섯 추출물의 항균활성을 확인하기 위하여 B. subtilis KCTC 1022, E. coli KCTC 1924, C. albicans KCTC 7965, A. oryzae KCTC 6983 균주 모두에서 항균활성은 나타나지 않았다. 붉은싸리버섯 추출물의 염증성 cytokine 조절활성을 조사한 결과에서 IL-10과 IFN-γ의 생산과 발현에 관여하지 않아 붉은싸리버섯 추출물은 피부세포에 자극을 주지 않을 것으로 판단되었다.
붉은싸리버섯 추출물의 항균활성을 확인하기 위하여 B. subtilis KCTC 1022, E. coli KCTC 1924, C. albicans KCTC 7965, A. oryzae KCTC 6983 균주를 공시하여 항균활성을 조사하였다. 그 결과 공시균주 모두에서 항균활성은 보이지 않았다(data not shown).
그늘에서 풍건한 붉은싸리버섯 1 kg을 에탄올(8 L)로 상온에서 3회 반복 추출한 후 여과 농축하였다. 에탄올 추출물은 증류수 1 L에 현탁 시킨 후 각각 3 L의 n-헥산, 4 L의 에틸아세테이트로 순차적으로 3회 반복하여 용매 분획을 실시하여 최종적으로 에틸아세테이트 분획물 3.3 g을 확보하여 붉은싸리버섯 추출물로 공시하였다.
인간 IFN-γ의 정량은 상업적으로 이용 가능한 mAb pairs (Endogen, Woburn, MA, USA)를 사용하여 제조사의 프로토콜에 따라 실시하였다.
인간 IL-10의 정량은 상업적으로 이용 가능한 mAb pairs (Endogen, Woburn, MA, USA)를 사용하여 제조사의 프로토콜에 따라 실시하였다. 즉, 37 ℃에서 18 h 동안 붉은싸리버섯 추출물을 NK92 세포에 처리한 후, 세포를 제외한 상층액을 수득하여, 효소면역분석(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) 키트를 사용하여 IL-10을 검출하였다.
즉 96-well plate에 에탄올로 녹인 150 µM DPPH 용액 198 µL와 DMSO에 녹인 각 시료를 농도별로 2 µL 첨가하였으며, 이때 대조군에는 시료 대신 DMSO를 2 µL 첨가하였다.
즉 gram 양성균주, gram 음성균주, 효모 균주는 액체배지에 접종하고 30 ℃에서 24 h 배양한 후 1.5% nutrient agar 배지에 접종하여 O.D. 값이 0.8이 되도록 조정하여 bacterial lawn을 만든 후 농도별 시료를 30 µL씩 접종하여 30 ℃ 배양기에서 24 h 배양한 후 투명환이 형성되는 것을 항균활성 양성으로 판정하였다.
인간 IL-10의 정량은 상업적으로 이용 가능한 mAb pairs (Endogen, Woburn, MA, USA)를 사용하여 제조사의 프로토콜에 따라 실시하였다. 즉, 37 ℃에서 18 h 동안 붉은싸리버섯 추출물을 NK92 세포에 처리한 후, 세포를 제외한 상층액을 수득하여, 효소면역분석(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) 키트를 사용하여 IL-10을 검출하였다. 결과는 3회 반복 well ± s.
인간 IL-10의 정량은 상업적으로 이용 가능한 mAb pairs (Endogen, Woburn, MA, USA)를 사용하여 제조사의 프로토콜에 따라 실시하였다. 즉, 37 ℃에서 18 h 동안 붉은싸리버섯 추출물을 상기 NK92 세포에 처리한 후, 세포를 제외한 상층액을 수득하여, 효소면역분석(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) 키트를 사용하여 IL-10을 검출하였다. 결과는 3회 반복 well ± s.
즉, 37 ℃에서 18 h 동안 염증을 유발하기 위해 500 ng의 P-10과 함께 붉은싸리버섯 추출물을 NK92 세포에 처리한 후, 세포를 제외한 상층액을 수득하여, 효소면역분석(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) 키트를 사용하여 IFN-γ를 검출하였다.
최종 결과는 측정시료의 형광 값과 blank의 형광 값 간의 넓이 차이로 계산하였으며 standard curve는 1, 5 그리고 10 µM의 trolox를 이용하여 측정하였고, 모든 결과는 trolox equivalents (TE, µM)로 환산하여 표기하였다.
DCFH-DA는 세포막을 통해 세포로 유입되면 세포질에 존재하는 esterase에 의해 DCFH로 가수분해 되고, 세포 내에 ROS가 존재하게 되면 DCF로 산화되어 excitation 485 nm, emission 535 nm에서 green색의 형광강도를 나타낸다. 측정시료를 세포에 처리한 뒤 AAPH, Cu2+, 또는 H2O2로 산화적 스트레스를 유발하면 항산화 능력의 정도에 따라 DCF 형광강도를 나타내므로 이를 이용하여 측정시료의 세포 내 항산화 활성을 측정하였다.
4)에 녹인 50 µL의 20 mM AAPH를 plate에 첨가하였다. 측정은 SpectraMaxⓇ (Molecular Devices, Austria)를 사용하였으며, 형광 분석기는 측정 전 10 s 간 shaking한 후 5 s 동안 안정화되도록 설정하였다. 96-well plate는 37℃에서 2 min 간격으로 총 200 min 동안 형광을 측정하도록 설정하였다.
대상 데이터
)은 2014년 8 ∼ 9월경 충청북도 속리산 일대에서 채취한 후 국립농업과학원 농업유전자원센터 버섯분류연구실(Mushroom Taxonomy Laboratory, National Institute of Agricultural Science and Technology)로부터 동정을 받은 후 풍건하여 사용하였다.
Natural killer cell line (NK92) 및 liver cancer cell line (Hep G2)은 한국세포주은행에서 분양받아 사용하였으며 세포배양에 필요한 Dulbecco’s modified Eagle media (DMEM), fetal bovine serum (FBS)은 Gibco (USA) 제품을 사용하였다.
공시균주로는 그람양성균 B. subtilis KCTC 1022, 그람음성균 E. coli KCTC 1924, 효모 C. albicans KCTC 7965, 곰팡이 A. oryzae KCTC 6983 균주를 한국생명공학연구원 생물자원센터로부터 분양받아 사용하였으며 항균활성은 paper disc diffusion법을 이용하였다[19]. 즉 gram 양성균주, gram 음성균주, 효모 균주는 액체배지에 접종하고 30 ℃에서 24 h 배양한 후 1.
표준시료는 국립농업과학원 농업유전자원센터 버섯분류연구실에 기탁 보관하였다. 붉은싸리버섯의 추출과정 및 분획에 사용된 용매는 SK케미칼(Korea)제품을 사용하였다. 실험에 사용한 시약 중 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), epigallocatechin gallate (EGCG), N-methoxysuccinyl-Ala-Ala-Pro-Val-p-nitroanilide, soybean trypsin 저해제는 Sigma (USA), human neutrophil elastase (HNE, EC 3.
Natural killer cell line (NK92) 및 liver cancer cell line (Hep G2)은 한국세포주은행에서 분양받아 사용하였으며 세포배양에 필요한 Dulbecco’s modified Eagle media (DMEM), fetal bovine serum (FBS)은 Gibco (USA) 제품을 사용하였다. 실험에 사용한 ELISA reader는 SpectraMaxⓇ (Molecular Devices, Austria)를 사용하였다.
붉은싸리버섯의 추출과정 및 분획에 사용된 용매는 SK케미칼(Korea)제품을 사용하였다. 실험에 사용한 시약 중 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), epigallocatechin gallate (EGCG), N-methoxysuccinyl-Ala-Ala-Pro-Val-p-nitroanilide, soybean trypsin 저해제는 Sigma (USA), human neutrophil elastase (HNE, EC 3.4.21.37)는 Calbiochem-Novabiochem (Germany)에서 구입하여 사용하였다. Natural killer cell line (NK92) 및 liver cancer cell line (Hep G2)은 한국세포주은행에서 분양받아 사용하였으며 세포배양에 필요한 Dulbecco’s modified Eagle media (DMEM), fetal bovine serum (FBS)은 Gibco (USA) 제품을 사용하였다.
2 mg/mL soybean trypsin inhibitor 용액 100 µL를 첨가하여 반응을 정지시킨 후, ELISA reader를 이용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 다음의 식에 의하여 elastase 저해활성(%)을 계산하였다. 양성 대조군으로 EGCG를 사용하였다.
데이터처리
모든 수치는 mean ± S.D.로 제시되었고 통계프로그램(Statistical Package for Social Science; SPSS Inc., Chicago, IL, USA)을 사용하여 분석하였다.
통계적 유의성은 일원배치 분산분석(one way ANOVA)과 p <0.05 수준에서 던컨시험(Duncan’s multiple range test)을 사용하여 검정하였다.
이론/모형
Elastase 저해활성은 Lee 등[21]이 사용한 방법에 따라서 HNE를 이용하여 측정하였다. 즉, 기질로써 Tris-HCl (pH 7.
Peroxyl 라디칼 소거활성은 Kurihara 등[17]의 방법을 변형한 oxygen 라디칼 absorbance capacity (ORAC) 분석법을 이용하였다. 즉, 75 mM potassium phosphate buffer (PBS, pH 7.
시료의 reducing capacity는 Kanter 등[18]의 방법을 이용하여 분석하였다. 즉 10 mM PBS (pH 7.
성능/효과
oryzae KCTC 6983 균주를 공시하여 항균활성을 조사하였다. 그 결과 공시균주 모두에서 항균활성은 보이지 않았다(data not shown). Lui 등은 E.
그 결과, Figure 7에 나타난 바와 같이, 붉은싸리버섯 추출물을 처리한 NK92 세포에서는 IFN-γ의 생성을 유도하는 능력(upper pannel)은 보이지 않았고, IFN-γ가 PMA에 의하여 활성화된 조건에서도 본 추출물에 의한 억제현상은 볼 수가 없었다.
따라서 먼저 ascorbic acid의 DPPH 라디칼 표준 검량곡선을 확인하여 Figure 1에 나타냈다. 그 결과, 검량곡선은 y = －0.017x + 0.0183 (R2 = 0.9964)로 매우 안정적인 상관관계를 나타냈다. 한편, 붉은싸리버섯 추출물의 DPPH 라디칼 저해활성을 조사한 결과를 Figure 2에 나타냈다.
또한 peroxyl 라디칼 소거활성과 reducing capacity를 각각 ORAC법과 reducing capacity assay법을 통하여 측정한 결과, 붉은싸리버섯 추출물 0.1, 1.0, 10.0, 20.0 µg/ml 처리 시 농도 의존적으로 높은 활성을 나타냈다.
본 연구에서는 국내 자생버섯의 일종인 붉은싸리버섯 추출물의 항노화 소재로서의 활용 가능성을 확인하기 위하여 일련의 연구를 수행하였다. 먼저 붉은싸리버섯 추출물의 항산화 활성을 조사한 결과, 농도 의존적으로 DPPH 라디칼 소거활성을 나타냄을 확인하였다. 또한 peroxyl 라디칼 소거활성과 reducing capacity를 각각 ORAC법과 reducing capacity assay법을 통하여 측정한 결과, 붉은싸리버섯 추출물 0.
따라서 이 같은 항산화 물질은 화장품 개발에서 기능성 물질의 소재로 사용하는데 있어서 제한적일 수밖에 없다. 본 연구에 사용된 붉은싸리버섯 추출물은 세포 내 수준에서 높은 항산화 활성을 갖고 있는 것으로 확인되어 기능성 화장품 개발에 있어서 항산화 기능물질로서 중요하게 사용될 수 있음을 의미한다고 할 수 있다.
인체의 노화가 진행되거나 혹은 강한 광에 노출되었을 경우 TNF-α나 IL-1같은 사이토카인이 관여하게 되고 이들은 mast cell이나 neutrophill을 증가시키며 mast cell이나 neutrophill은 serine protase를 증가시켜 elastin을 감소시킴과 동시에 AP-1, pro MMP-1, active MMP-1을 활성화시킴으로 세포외기질이 변형되어 주름이나 피부노화에 직접적으로 영향을 주게 된다. 본 연구에서 붉은싸리버섯 추출물은 HNE를 농도 의존적으로 저해함을 확인하였다. 이상의 결과로부터 붉은 싸리버섯 추출물은 면역세포에 자극이 없을 뿐만 아니라 항산화 활성과 elastase 저해활성이 우수하여 피부에 안전한 화장품 소재로 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.
붉은싸리버섯 추출물의 염증성 cytokine 조절활성을 조사한 결과에서 IL-10과 IFN-γ의 생산과 발현에 관여하지 않아 붉은싸리버섯 추출물은 피부세포에 자극을 주지 않을 것으로 판단되었다.
뿐만 아니라 cellular antioxidant capacity를 DCF fluorescence intensity (% of control)로 조사한 결과에서도 붉은싸리버섯 추출물 20.0 µg/mL 처리시 약 30% 이상 높은 항산화 활성을 나타내고 있음을 확인하였다.
본 연구에서 붉은싸리버섯 추출물은 HNE를 농도 의존적으로 저해함을 확인하였다. 이상의 결과로부터 붉은 싸리버섯 추출물은 면역세포에 자극이 없을 뿐만 아니라 항산화 활성과 elastase 저해활성이 우수하여 피부에 안전한 화장품 소재로 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.
이상의 결과로부터 붉은싸리버섯 추출물은 IFN-γ의 생성과 발현 등 면역반응을 유도하지 않아 피부세포에 자극을 주지 않을 것으로 판단되었다.
그 결과, Figure 6에 나타난 바와 같이, 붉은싸리버섯 추출물을 처리한 NK92 세포에서는 IL-10의 생성을 유도하는 능력(upper pannel)을 보이지 않았고, IL-10이 PMA에 의하여 활성화 된 조건에서도 본 추출물에 의한 억제현상은 볼 수가 없었다. 이상의 결과로부터 붉은싸리버섯 추출물은 IL-10 등의 생성과 발현 등 면역반응을 유도하지 않아 피부세포에 자극을 주지 않을 것으로 판단되었다.
즉, 붉은싸리버섯 1.0, 10.0, 20.0 µg/mL 처리 시 각각 0.8 ORACRoo, 5.2 ORACRoo, 7.8 ORACRoo (trolox equivalents, 1 µM)로 농도 의존적으로 높은 활성을 나타냈다.
즉, 붉은싸리버섯 추출물을 500, 200, 100, 50, 10, 1 µg/mL 농도로 처리하여 DPPH 라디칼 소거활성을 측정한 결과, DPPH 라디칼 소거활성은 각각 117.0, 52.9, 38.6, 28.8, 22.3, 20.3 (AsA mg/mL)의 환산값을 얻을 수 있었으며 농도 의존적으로 DPPH 라디칼을 소거함을 확인하였다.
특히 에탄올 추출물이 에틸아세테이트 용매 분획물 보다 우수한 HNE 저해활성을 나타냈으며 에탄올 추출물의 ED50 값은 42.9 µg/mL이었다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
붉은싸리버섯은 무엇인가?
붉은싸리버섯(Ramaria formosa, R. formosa)은 민주름버섯목(Aphyllophorales), 싸리버섯과(Ramariaceae)에 속하는 버섯으로 국내에서는 붉은싸리버섯을 포함하여 총 7종이 보고되었다[8]. 그중 붉은싸리버섯은 자실체가 제일 큰 버섯으로 전국에 자생하고 있어 확보하기가 쉬우며 채취 후 물에 침윤시키면 독이 빠져나가 식용으로 활용할 수 있기 때문에 예로부터 식용으로 애용되어 온 버섯이다.
과잉 생성된 ROS는 인체에 어떤 악영향을 미치는가?
이들은 광반응 및 효소반응을 포함하는 다양한 과정을 거쳐서 세포 및 조직 중에서 생성된다. 이렇게 생성된 산소종은 살균 효과 등 유용하게 쓰이기도 하지만 과잉 생산된 활성산소는 사람 몸속에서 산화작용을 일으켜 세포막, DNA, 그 외의 모든 세포 구조를 손상시키고 손상의 범위에 따라 세포가 기능을 잃거나 변질되고 더 나아가서는 핵산을 손상시켜 염기의 변형과 유리, 결합의 절단, 당의 산화분해 등을 일으켜 노화를 가속시키며 돌연변이나 암의 원인이 되기도 한다[3,4]. 특히 활성산소는 자외선, 환경오염과 고강도의 운동뿐만 아니라 과식, 음주, 혈액순환 장애, 스트레스 등으로 과잉 생산된다.
ROS의 종류에는 어떤 것들이 있는가?
이들 ROS의 종류에는 singlet oxygen radical (1 O2), superoxide anion radical (O2⋅), hydroxyl radical (⋅OH), peroxyl radical (RO2) 그리고 hydrogen peroxide (H2O2) 등이 포함된다[1,2]. 이들은 광반응 및 효소반응을 포함하는 다양한 과정을 거쳐서 세포 및 조직 중에서 생성된다.
참고문헌 (24)
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