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문제 정의
- 5) 따라서 본 연구자들은 온경지혈(溫經止血)6)과 온중지사(溫中止瀉)6) 작용의 증강을 위해 수치하여 사용하는 건강 중 대한민국 약전에 지표 물질로 수록되어 있는 6-gingerol2)에 대하여 수치 전 · 후 함량 분석을 비롯한 이화학적 분석의 실시 및 비교를 통해 건강의 수치에 대한 기초자료를 제공하고자 본 연구를 수행하였다.
제안 방법
- 2) 즉, 표준액은 6-gingerol 표준품 약 10 mg을 정밀하게 달아 메탄올을 넣어 정확하게 100 mL로 하였으며, 검액은 건강 및 건강초 분말 약 2.0 g을 각각 정밀하게 달아 메탄올 60 mL를 넣고 2시간 환류추출한 다음 여과하였다. 잔류물에 메탄올 30 mL를 넣어 상기와 같이 추출한 후 여액을 모두 합하여 메탄올을 넣어 정확하게 100 mL로 하였다.
- 6) 표면과 내부의 색상이 고르게 변하고 건강 특유의 냄새가 변하며 표면이 타지 않는 것을 기준으로 수치를 실시한 후 관능검사를 실시하였다. 그 결과 ZR9(200oC-10분), ZR10(200oC-15분), ZR11(220oC-5분) 및 ZR12(220oC-10분)에서 수치 할 때 건강의 수치 기준에 적절한 것으로 나타났다.
- HPLC 분석조건 − 수치 전 · 후 건강의 주요 성분인 6- gingerol의 함량 분석은 펌프, 온라인 탈기장치, 칼럼오븐,자동시료주입장치 및 광다이오드어래이 검출기가 장착된 Prominence LC-20A시리즈 HPLC(Shimadzu Co., Tokyo, Japan)를 이용하였다.
- 건강 수치 − 건강 규격품을 구입하여 서로 다른 온도(160, 180 및 200oC)와 시간(5, 10, 15 및 20분)에 따라 수치하였다.
- 건강 수치 − 일반적으로 지혈 작용을 증가시키기 위해 수치하여 사용해 온 건강에 대하여 적절한 수치 방법을 설정하고자 시중 유통 규격품을 구입하여 시간(5, 10, 15 및 20분)과 온도(160, 180 및 200oC)에 따라 수치를 실시하였다.
- 건조감량, 회분 및 산불용성회분 − 대한민국약전 9개정의 일반시헙법 중 생약시험법9)에 따라 시험한 후 건조감량, 회분 및 산불용성회분을 계산하였다.
- 관능검사 − 건강의 수치에 있어 최적의 온도와 시간을 설정하기 위하여 청초법으로 수치한 시료에 대하여 본초학 교재8)를 바탕으로 본초학 전공자인 동국대학교 한의과대학 본초학교실의 이제현 교수와 대전대학교 한의과대학 본초학 교실의 서영배 교수 2인에 의해 시간과 온도에 따라 수치 된 거강의 관능검사를 실시하였다.
- 기기 − 건강의 지표 성분인 6-gingerol의 함량 비교를 위해 LC-20AT 펌프, DGU-20A3 온라인 탈기장치, CTO-20A 칼럼오븐, SIL-20AC 자동시료주입장치 및 SPD-M20A 광 다이오드어래이 검출기로 구성된 Prominence LC-20A 시리즈 HPLC 시스템(Shimadzu, Kyoto, Japan)과 측정된 데이터의 변환 및 처리는 LC solution software(Version 1.24, SP1)를 사용하였다.
- 대한민국약전에 수록되어 있는 건강에 대하여 시간(5, 10, 15 및 20분)과 온도(160, 180 및 200oC)에 따라 청초법으로 수치를 실시하고 수치 전과 후의 주요 성분인 6-gingerol의 함량을 비교하였다. 그 결과 수치 전에 비해 ZR2(160oC, 5분), ZR3(160oC, 10분) 및 ZR6(180oC, 5분)에서 대한민국 약전 기준치인 0.
- 4). 또한 Fig. 5와 같이 수치 전과 후의 시료에 대하여 성분 프로파일링을 실시하였다. 대한민국약전 9개정에 건강은 6-gingerol이 0.
- 벤조피렌시험 − 본 시험에서 건강을 고온에서 수치할 경우 발생될 수 있는 발암성 물질인 벤조피렌에 대하여 건강 원생약(ZR1)과 수치 시료(180oC-15분; ZR8, 180oC-20분; ZR9, 200oC-15분; ZR12 및 200oC-20분; ZR13)한 시료에 대하여 각각 약 10.0 g을 정밀하게 달아 식품의약품안전처 고시10)와 식품의 기준 및 규격 고시11)에 따라 시료에 함유되어 있는 벤조피렌의 농도를 액체크로마토그래프법으로 측정하였다.
- C)와 시간(5, 10, 15 및 20분)에 따라 수치하였다. 수치를 진행하기 전 로스터기를 해당 온도까지 올려 예비 가열을 실시한 후 다음과 같이 각각의 온도와 시간에 따라 수치를 진행하였다; 수치하지 않은 원생약(Zingiberis Rhizoma; ZR1), 160oC-5분(ZR2), 160oC-10분(ZR3), 160oC15분(ZR4), 160oC-20분(ZR5), 180oC-5분(ZR6), 180oC-10분 (ZR7), 180oC-15분(ZR8), 180oC-20분(ZR9), 200oC-5분 (ZR10), 200oC-10분(ZR11), 200oC-15분(ZR12) 및 200oC20분(ZR13). 위와 같이 각각 수치를 실시한 시료는 실온에서 냉각 후 polyethylene:polypropylene(1:1) bag으로 포장하여 냉장 보관하면서 실험에 사용하였다.
- 4% 이상 함유되어 있어야 한다고 제시되어 있다. 이와 같이 대한민국약전을 기준으로 건강의 6-gingerol에 대하여 시간과 온도에 따라 수치 할 경우 성분의 변화를 HPLC로 측정하였다. 대한민국약전의 함량 계산법에 따라 함량을 계산할 경우 건강 및 수치된 건강에서 6-gingerol이 0.
대상 데이터
- 0% 이상의 표준품을 구입하여 사용하였다. 본 시험의 추출과 분석에 사용된 메탄올, 아세토나이트릴 및 물 등의 용매는 모두 HPLC급으로 J.T. Baker(Phillipsburg, NJ, USA)로부터 구입하여 사용하였다.
- 실험재료-본 연구에 사용된 건강은 (주)광명당제약의 내 몸에닿(Ulsan, Korea)에서 규격품을 구입하여 동국대학교와 대전대학교 한의과대학 본초학전공 이제현 교수(Gyeongju, Korea)와 서영배 교수(Daejeon, Korea)로부터 식품의약품안전평가원 한약재 관능검사 지침7)에 따라 기원, 성상, 이물, 건조 및 포장상태 등을 종합적으로 감정 후 사용하였다. 건강 표본(2012-RISZR)은 한국한의학연구원 K-herb연구단에 보관하였다.
- 주요 성분인 6-gingerol은 40o C에서 Phenomenex Gemini C18(5 µm, 4.6×250 mm, Torrance, CA, USA) 역상칼럼을 이용하여 280 nm에서 분리 및 검출하였다.
- 표준품 및 시약 − 6-Gingerol은 Wako Pure Chemical Industries(Osaka, Japan)로부터 98.0% 이상의 표준품을 구입하여 사용하였다.
- 24, SP1)를 사용하였다. 회화로는 Thermolyne 48000 furnace (Barnstead, Dubuque, IA, USA), 건조기는 OF-22G(JeioTech, Daejeon, Korea), 초음파추출기는 Branson 8510E-DTH (Branson Ultrasonic Co., Danbury, CT, USA) 및 시료의 수치는 CBR-101A(GeneCafe, Ansan, Korea) 로스터기를 각각 사용하였다.
이론/모형
- 벤조피렌 − 발암물질로 알려져 있는 벤조피렌의 양을 측정하고자 식품의약품안전처 고시10)와 식품의 기준 및 규격 고시11)에 따라 시험하였다.
- 표준액 및 검액 조제 − 건강 중 6-gingerol의 함량 분석을 위한 표준액과 검액은 대한민국약전 9개정의 건강 정량법에 따라 조제하였다.
성능/효과
- 2) 이를 기준으로 수치하지 않은 원생약의 건강은 6.79±0.03%(n=3)의 회분 함량을 보였으며, 이는 대한민국약전 기준치에 적합하였다.
- 3) 이러한 건강의 성분으로는 6-, 8-, 10- 및 12-gingerol과 4-, 6- 및 8-shogaol 등의 phenol 계열의 성분, zingiberene과 camphene 등과 같은 정유 성분 등이 보고되었다.4) 이들 성분들 중 주요 성분인 gingerol과 shogaol은 항암, 항산화, 진통, 해열, 항염증, 항당뇨, 항비만, 항균, 항알러지, 간보호 및 항혈관 신행 효능 등 매우 다양한 생리활성이 보고되었다.5) 따라서 본 연구자들은 온경지혈(溫經止血)6)과 온중지사(溫中止瀉)6) 작용의 증강을 위해 수치하여 사용하는 건강 중 대한민국 약전에 지표 물질로 수록되어 있는 6-gingerol2)에 대하여 수치 전 · 후 함량 분석을 비롯한 이화학적 분석의 실시 및 비교를 통해 건강의 수치에 대한 기초자료를 제공하고자 본 연구를 수행하였다.
- 건조감량 − 대한민국약전 9개정의 생약시험법9)에 따라 건조감량 시험을 실시한 결과 건강은 9.81±0.05%(n=3)로 나왔으며, 시간과 온도에 따라 수치된 건강은 1.69-8.18%(n= 3)로 나타났다(Table I).
- 6) 표면과 내부의 색상이 고르게 변하고 건강 특유의 냄새가 변하며 표면이 타지 않는 것을 기준으로 수치를 실시한 후 관능검사를 실시하였다. 그 결과 ZR9(200oC-10분), ZR10(200oC-15분), ZR11(220oC-5분) 및 ZR12(220oC-10분)에서 수치 할 때 건강의 수치 기준에 적절한 것으로 나타났다.
- C)에 따라 청초법으로 수치를 실시하고 수치 전과 후의 주요 성분인 6-gingerol의 함량을 비교하였다. 그 결과 수치 전에 비해 ZR2(160oC, 5분), ZR3(160oC, 10분) 및 ZR6(180oC, 5분)에서 대한민국 약전 기준치인 0.4% 이상보다 높은 0.55, 0.46 및 0.50%로 각각 검출되었다.
- 4%이상 6-gingerol을 함유하고 있는 것으로 나타났으며 이외의 시료에서는 수치를 할 경우 모두 대한민국 약전 기준치보다 낮은 성분 함량을 보였다(Table II). 또한 같은 온도에서 수치를 할 경우 시간이 길어질수록 6-gingerol의 함량은 감소하는 것으로 나타났다.
- 산불용성회분 -대한민국약전 생약시험법9)에 따라 건강의 산불용성회분 시험 결과 0.50±0.006%(n=3)로 나왔으며, 수치된 건강은 0.40-4.59%(n=3)로 나타났다(Table I)
- 55%로 검출되었다(Table II). 수치 전 시료에서는 0.43%로 대한민국약전기준에 적합하였으나 포제를 200o C-20분까지 진행 할 경우 그 함량은 0.16%로 약 2.7배 정도 감소하는 경향을 나타내었으며, 이는 대한민국약전 기준치에 미치지 못하는 함량이다. 함량 분석 결과 수치를 실시한 시료 중 ZR2(160o C, 5분), ZR3(160o C, 10분) 및 ZR6(180o C, 5분) 등 3종의 시료만이 0.
- 시료 중 수치하지 않은 건강 (ZR1)와 고온에서 수치된 건강 시료 중 ZR8(180oC-15분), ZR9(180oC-20분), ZR12(200oC-15분) 및 ZR13(200oC-20분) 등 5개의 시료를 선정하여 벤조피렌 시험을 실시한 결과 0.0, 0.5, 1.6, 0.1 및 0.0 µg/kg으로 각각 나타났다.
- 정량 − HPLC를 이용하여 건강 및 수치된 건강의 주요 성분인 6-gingerol의 함량을 분석한 결과 약 9.2분에 주요 성분인 6-gingerol의 성분이 검출되었다(Fig. 4).
- 7배 정도 감소하는 경향을 나타내었으며, 이는 대한민국약전 기준치에 미치지 못하는 함량이다. 함량 분석 결과 수치를 실시한 시료 중 ZR2(160o C, 5분), ZR3(160o C, 10분) 및 ZR6(180o C, 5분) 등 3종의 시료만이 0.55, 0.46 및 0.50%로 대한민국약전 기준치인 0.4%이상 6-gingerol을 함유하고 있는 것으로 나타났으며 이외의 시료에서는 수치를 할 경우 모두 대한민국 약전 기준치보다 낮은 성분 함량을 보였다(Table II). 또한 같은 온도에서 수치를 할 경우 시간이 길어질수록 6-gingerol의 함량은 감소하는 것으로 나타났다.
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