[논문]까마중 추출물의 Candida albicans에 대한 항균효과에 대한 융합적 연구

최유리; 강민경

doi:10.15207/jkcs.2018.9.12.069

까마중 추출물의 Candida albicans에 대한 항균효과에 대한 융합적 연구
A convergence study of antibacterial effect of solanum nigrum extract on candida albicans 원문보기

한국융합학회논문지 = Journal of the Korea Convergence Society, v.9 no.12, 2018년, pp.69 - 74

초록
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본 연구의 목적은 까마중추출물의 캔디다 알비칸스의 항균력을 확인하고자 하였다. 연구를 위해 까마중을 70퍼센트 메탄올에 추출하였다. 추출물의 성분분석을 위해 까마중 추출물의 플라보노이드와 폴리페놀의 함량을 확인하였다. 까마중 추출물의 캔디다 알비칸스의 항균력을 확인하기 위하여 생존률을 OD값으로 측정하였고, 증식능력을 CFU로 측정하였다. 까마중 추출물의 플라보노이드와 폴리페놀의 함량을 분석한 결과 각 각 $8.23{\pm}0.13mg/g$와 $14.97{\pm}1.58mg/g$로 나타났다. CFU 결과, 대조군과 비교하여 실험군에서 CFU 값이 낮게 나타났다. 균의 활성도를 평가한 결과, 대조군과 비교하여 실험군에서 더 낮은 균활성도 값을 보여 칸디다 알비칸스에 대한 까마중 추출물의 항균력을 확인할 수 있었다. 이러한 연구 결과, 까마중 추출물은 칸디다균뿐만 아니라 치과분야에서 천연 항균제로 사용될 수 있을 가능성이 보인다.

Abstract ▼ AI-Helper

The purpose of this study was to antibacterial effect of solanum nigrum extra in candida albicans. In this study, the antibacterial effects of 70% methanol extract and solanum nigraum were investigated. The content of flavonoids and polyphenol contents in solanum nigrum extraction. The antimicrobial activity was determined by spectrophotometric growth inhibition assay(optical density) and colony forming untis (CFU) for the candida albicans. Total contents were flavonoids and polyphenols of solanum nigrum, the result was $8.23{\pm}0.13mg/g$ and $14.97{\pm}1.58mg/g$, respectively. The CFU results showed lower CFU counts in the experimental groups compared to the control group. And the result of the bacterial viability was decreased in the experimental group. Therefore the extracts of solanum nigrum were found to have antimicrobial activity in candida albicans. From the these results, solanum nigrum extracts have a possibility to be a candidate for natural antibacterial components in dental products.

주제어

표/그림 (3)

그림 Fig. 1. Result of Colony forming unit (CFU) (a):0 mg/mL(Control), (b):5 mg/mL, (c):10 mg/mL, (d):20 mg/mL, (e):40 mg/mL.
그림 Fig. 2. Result of Bacteria viability(%) Same alphabet letters was not statistic significant different Different alphabet letters was not statistic significant different
표 Table 1. The flavonoid and polyphenol compound contents in the extracts of solanum nigrum

AI 본문요약
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문제 정의

까마중을 약초로 다려 환부에 대면 항염증 작용으로 한방에서는 알려져 있으며, 최근에는 까마중과 같은 솔라닌 계열의 천연추출물의 항암작용, 항균작용으로 밝혀져 있다[25]. 따라서 본 연구에서는 까마중 추출 물로 candida albicans의 항균력을 확인하고자 하였다. 까마중 추출물의 농도별 항균력을 확인하기 위하여 5 mg/mL, 10 mg/mL, 20 mg/mL, 40 mg/mL로 candida albicans의 균집락 수를 확인한 결과 농도가 증가됨에 따라 CFU의 집락이 감소됨을 나타냈으며, 대조군과 확연한 차이를 나타냈다.
따라서 본 연구의 목적은 까마중 추출물을 활용하여 구내염의 원인균인 Candida albicans에 대한 항균력을 평가하여 천연물질인 까마중의 항균 구강 청정제 사용 가능성을 평가하고자 하였다.
본 연구는 천연물질인 까마중 추출물의 Candida albicans에 대한 항균력을 확인하였다. 이러한 결과는 항균 구강청정제등의 개발함에 있어 천연 추출물의 상용 가능성을 확인할 수 있었다.
본 연구에서는 구강 내 대표적인 질환을 일으키는 candida albicans의 항균력을 확인하였으며, 폴리페놀과 플라보노이드와 같은 항균 물질들을 확인하였다. 그러나 추후 후속 연구에서 좀 더 다양한 구강 내 세균과 세포독성 실험을 통해 까마중 추출물의 유용성과 안정성을 평가할 필요가 있을 것이라 사료된다.

제안 방법

colony forming unit(CFU)/mL 로 만든 후 48well에 200 µL씩 분주하고 200 µL의 추출액을 각 실험 군별로 제조하여 총 용량을 400 µL에 맞춘 후 48시간동안 37C˚의 인큐베이터에 보관하였다. 48시간 후 elisa leader를 사용하여 600 nm에서 흡광도를 측정하여 그 값을 optical density(OD)로, 세균활성도를 평가하였다. OD값은 통계학적 유의차를 확인하기 위하여 One-Way ANOVA를 이용하여 평가하였다(SPSS 19.
C. albicans의 colony forming units (CFU)을 확인하기 위해 각 실험 군별로 10개씩 결과를 확인하였다. 대조군으로 아무것도 첨가하지 않은 군은 세균을 count가 불가할 정도로 많은 증식력을 보였지만 실험군 농도 5mg/mL에서는 1498±63개, 10 mg/mL에서는 454.
그리고 세균과 추출액 혼합액을 100 μl씩 고체 배지에 바르고 48시간 동안 인큐베이터에서 배양한 뒤 형성된 균집락을 계산하여 항균력을 평가하였다.
그리고 농축 추출물은 동결건조기(Freeze Dryer, Ilshin Lab, Korea)로 분말 상태로 제조하였다. 분말 건조된 시편은 항균평가를 위해 Dimethyl Sulfoxide(DMSO; Amresco, VWR Life Science, U.S.A)에 각각 5 mg/ml, 10 mg/ml, 20 mg/ml, 40 mg/ ml 농도로 희석하여 사용하였다.
식물내의 페놀성 화합물은 식물의 항균활성과의 관계가 있으므로, 까마중 추출물의 항균활성을 확인하기 위하여 플라보노이드와 폴리페놀의 농도를 확인하였다. 본 결과 까마중 내의 플라보노이드는 8.
그리고 37℃ 항온수조(암실)에서 1시간 반응시킨 뒤, UV/VIS Spectrometer(X-ma 1200 Spectrophotometer, Human, Korea)를 사용하여 725 nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준물질 garlic acid(Sigma Aldrich, U.S.A)을 사용하여 표준 곡선을 그리고 폴리페놀의 함량을 계산하였다.
그리고 UV/VIS Spectrometer(X-ma 1200 Spectrophotometer, Human, Korea)를 이용하여 420 nm 에서 흡광도를 측정하였다. 표준물질은 naringin (Sigma Aldrich, U.S.A) 사용하여 표준 곡선을 그리고 플라보노이드의 함량을 계산하였다.
활성화된 균을 5 x 104 colony forming unit(CFU)/mL 로 만든 후 48well에 200 µL씩 분주하고 200 µL의 추출액을 각 실험 군별로 제조하여 총 용량을 400 µL에 맞춘 후 48시간동안 37C˚의 인큐베이터에 보관하였다.

대상 데이터

여과된 추출물은 감압농축기(Vacuum Evaporator, ETELA, Japan)로 증발 농축하였다. 그리고 농축 추출물은 동결건조기(Freeze Dryer, Ilshin Lab, Korea)로 분말 상태로 제조하였다. 분말 건조된 시편은 항균평가를 위해 Dimethyl Sulfoxide(DMSO; Amresco, VWR Life Science, U.
본 연구에서 사용된 까마중은 국내 경상남도 산청에서 재배한 까마중을 시중에서 구매하여 사용하였다. 우선 까마중잎 500 g을 분쇄하여 중량 대비 10배의 70% 메탄올용액에 넣고 24시간 상온 추출하였다.
한국생명공학연구원 생물자원센터에서 동결 건조된 C.albicans(ATCC 7965)를 Yeast mold broth(YM broth; B D Difco, Franklin Lakes, NJ, U.S.A)에 풀어 활성화 시킨 뒤 100 μl와 배지에 10 ml에 혼합한 다음 37 ℃의 인큐베이터에서 48시간 활성화시켰다.

데이터처리

48시간 후 elisa leader를 사용하여 600 nm에서 흡광도를 측정하여 그 값을 optical density(OD)로, 세균활성도를 평가하였다. OD값은 통계학적 유의차를 확인하기 위하여 One-Way ANOVA를 이용하여 평가하였다(SPSS 19.0K, IBM Co., Amonk, NY, USA)

성능/효과

1. Candida albicans균 집락형성 결과 5 mg/mL, 10 mg/mL, 20 mg/mL, 40 mg/mLl 순으로 까마중 추출물의 농도가 증가함에 따라 세균의 집락 형성은 감소된 결과를 나타냈다.
2. Candida albicans균의 활성도를 확인한 결과 5 mg/mL, 10 mg/mL, 20 mg/mL, 40 mg/mL 순으로 추출물의 농도가 증가함에 따라 Candida albicans 의 세균활성도는 감소되어 항균력을 나타냈다.
3. 까마중 추출물 내의 항산화능력을 나타내는 페놀성 화합물인 플라보노이드와 폴리페놀은 각각 플라보노이드는 8.23±0.13 mg/g으로, 폴리페놀은 14.97±1.58 mg/g 나타났다.
따라서 본 연구에서는 까마중 추출 물로 candida albicans의 항균력을 확인하고자 하였다. 까마중 추출물의 농도별 항균력을 확인하기 위하여 5 mg/mL, 10 mg/mL, 20 mg/mL, 40 mg/mL로 candida albicans의 균집락 수를 확인한 결과 농도가 증가됨에 따라 CFU의 집락이 감소됨을 나타냈으며, 대조군과 확연한 차이를 나타냈다. 또한 세균 생존율에서도 추출물의 농도가 증가될수록 흡광도가 감소되는 것을 확인할 수 있었다.
대조군으로 아무것도 첨가하지 않은 군은 세균을 count가 불가할 정도로 많은 증식력을 보였지만 실험군 농도 5mg/mL에서는 1498±63개, 10 mg/mL에서는 454.66±50개, 20 mg/mL에서는 82±19개, 40 mg/mL에서는 4.66±2.51 개 순서로 항균력을 보였다.
2). 대조군의 생존률을 100% 기준으로 표현하였을때, 5 mg/mL은 45%, 10 mg/mL은 26%, 20 mg/mL 15%, 40 mg/mL는 12% 순으로 세균의 생존율이 감소하였으며 즉, 농도가 높아질수록 bacteria viability 낮아지는 결과로 나타났다. 또한 실험군의 농도가 증가 될수록 통계학적으로 유의차 있는 감소를 나타냈지만 (p<0.
까마중 추출물의 농도별 항균력을 확인하기 위하여 5 mg/mL, 10 mg/mL, 20 mg/mL, 40 mg/mL로 candida albicans의 균집락 수를 확인한 결과 농도가 증가됨에 따라 CFU의 집락이 감소됨을 나타냈으며, 대조군과 확연한 차이를 나타냈다. 또한 세균 생존율에서도 추출물의 농도가 증가될수록 흡광도가 감소되는 것을 확인할 수 있었다. 흡광도가 감소되었다는 것은 세균의 활성이 감소된 것으로 까마중의 항균활성을 확인할 수 있는 결과였다.
또한 플라보노이드의 함량 역시 본 연구에서는 8.23±0.13 mg/g로 나타났으나, 염의 연구에서는 증류수 추출물에 대한 총 플라보노이드 함량은 14.23±0.01 mg/g, 80% 에탄올 추출물에 대한 함량은 14.54±0.01 mg/g로 본 연구결과 보다 많이 나타났다.
본 결과 까마중 내의 플라보노이드는 8.23±0.13 mg/g으로, 폴리페놀은 14.97±1.58 mg/g으로 나타났다(Table 1).
본 연구에서도 까마중 추출물에서 실제 페놀계 화합물들이 함유되어 있다는 것을 확인 할 수 있었으며 플라보노이드와 폴리페놀의 함량을 확인한 결과, 폴리페놀의 함량이 14.97±1.58 mg/g로 나타났다.
세균의 항균활성을 확인한 결과, 대조군에 비교하여 실험그룹은 bacteria viability가 감소하여 나타난 것으로 나타났다(Fig. 2). 대조군의 생존률을 100% 기준으로 표현하였을때, 5 mg/mL은 45%, 10 mg/mL은 26%, 20 mg/mL 15%, 40 mg/mL는 12% 순으로 세균의 생존율이 감소하였으며 즉, 농도가 높아질수록 bacteria viability 낮아지는 결과로 나타났다.

후속연구

본 연구에서는 구강 내 대표적인 질환을 일으키는 candida albicans의 항균력을 확인하였으며, 폴리페놀과 플라보노이드와 같은 항균 물질들을 확인하였다. 그러나 추후 후속 연구에서 좀 더 다양한 구강 내 세균과 세포독성 실험을 통해 까마중 추출물의 유용성과 안정성을 평가할 필요가 있을 것이라 사료된다.
본 연구는 까마중 추출물의 항균 구강 청정제 적용 가능성을 확인할 수 있었으며, 구강 내 세균의 항균력을 나타내는 천연추출물의 기초자료로 사용될 수 있을 것으로 사료된다.
본 연구는 천연물질인 까마중 추출물의 Candida albicans에 대한 항균력을 확인하였다. 이러한 결과는 항균 구강청정제등의 개발함에 있어 천연 추출물의 상용 가능성을 확인할 수 있었다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	중클로르헥시딘의 한계는?	구강 항균 세정제 중클로르헥시딘은 양이온 화합물로서 법랑질의 수산화인 회석에 흡착되는 세균의 집락 화를 억제할 수 있어 치주염 치료를 위하여 효과적으로 사용되고 있다. 그러나 혐기성 세균에 대하여 그 효과가 미비하며, 구강 내 장기 사용 시 정상 균주의 균형을 파괴하고, 치아의 착색, 미각 변화와 같은 부작용이 보고되고 있어 그 사용함에 있어 제한이 있다. 또한 알코올을 함유한 항균 액의 경우 구강 건조증 등을 유발할 수 있으며, 유아나 알코올 민감성 환자에게는 사용 시 주의가 필요하다[5,8].
	구강 항균 세정제의 용도는?	바이오필름을 형성하는 세균은 유기산을 분비하여 치아의 무기질을 탈회 시키는 치아우식증을 일으키거나 세균에서 생성된 내독소로 치주질환 등의 감염성 구강 질환을 유발시킨다 [1-4]. 구강 항균 세정제는 구강 내 바이오필름을 형성하는 미생물의 양을 감소시키고, 구강 질환을 예방하거나 정지시키기 위하여 사용된다. 구강 항균 세정제 중클로르헥시딘은 양이온 화합물로서 법랑질의 수산화인 회석에 흡착되는 세균의 집락 화를 억제할 수 있어 치주염 치료를 위하여 효과적으로 사용되고 있다.
	바이오필름이 유발하는 질환은?	구강 내 형성된 바이오 필름은 치아는 물론 교정 장치, 가철성 의치를 포함한 보철물 등에 존재한다. 바이오필름을 형성하는 세균은 유기산을 분비하여 치아의 무기질을 탈회 시키는 치아우식증을 일으키거나 세균에서 생성된 내독소로 치주질환 등의 감염성 구강 질환을 유발시킨다 [1-4]. 구강 항균 세정제는 구강 내 바이오필름을 형성하는 미생물의 양을 감소시키고, 구강 질환을 예방하거나 정지시키기 위하여 사용된다.

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저자의 다른 논문 :

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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