[논문]토복령의 항산화 및 산화적 DNA 손상억제 활성

장태원; 오창근; 박재호

doi:10.3839/jabc.2018.016

토복령의 항산화 및 산화적 DNA 손상억제 활성
Antioxidant activity and protective effects on oxidative DNA damage of Smilax china root 원문보기

Journal of applied biological chemistry, v.61 no.2, 2018년, pp.109 - 117

장태원 (Department of Medicinal Plant Resources, Andong National University) , 오창근 (Department of Medicinal Plant Science, Jungwon University) , 박재호 (Department of Medicinal Plant Science, Jungwon University)

초록
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최근까지도, 현대사회의 암 발생률은 급격하게 증가하고 있다. 인체 내부에서 내재적 또는 외재적인 요인에 의해 DNA 손상이 발생되고, 세포는 DNA 손상에 대한 방어기작을 통해 스스로를 방어한다. 또한, 비정상적인 DNA 생성 및 결손된 DNA 가닥의 복원은 노화, 암, 염증 등 다양한 질병으로부터 기인한다. 많은 연구자는 이러한 DNA 손상을 억제하기 위하여 적절한 소재 탐색에 많은 관심을 두고 있으며, 특히 합성화합물의 부작용이 알려지면서, 천연물을 기반으로 한 암 예방적 소재에 대한 연구가 많이 이루어지고 있다. 토복령은 백합과(Liliacese)에 속하는 청미래덩굴(Smilax china L.)의 근경이며, 전통적으로 해독과 종기 등의 치료제로 사용되어왔다. 하지만 토복령의 DNA 손상에 대한 억제 효과에 대한 연구는 미흡하다. 본 논문에서는 토복령의 항산화 효과 및 DNA 손상에 대한 억제 효과를 확인하고, 식물이 포함하는 phenolic 화합물의 활성과 연관 관계를 확인하고자 하였다. 항산화 효과를 확인하기 위해, DPPH 라디칼 및 ABTS 라디칼에 대한 소거 활성을 확인하였다. 토복령 추출물은 DPPH 및 ABTS 라디칼을 효과적으로 제거하였으며, 높은 환원력을 나타냈다. HPLC 분석을 통해 phenolic 화합물을 정량 및 동정하였으며, 항산화 효과와 phenolic 화합물의 연관 관계를 확인하였다. 또한, $OH^-$ 라디칼 및 $Fe^{2+}$으로 유발된 plasmid DNA 손상에 대한 방어 효과를 확인하였다. 세포 수준에서, DNA 손상에 대한 저해 효과는 산화적 스트레스로 유발된 NIH 3T3 세포의 ${\gamma]$-H2AX 및 p53 단백질 발현 저해 활성을 확인하였다. 또한, H2AX 및 p53 mRNA 수준의 저해 활성을 확인하였다. 결론적으로, 토복령 추출물의 phenolic 화합물의 항산화 효과 및 DNA 손상에 대한 억제 효과를 확인하였다.

Abstract ▼ AI-Helper

Recently, cancer incidence in modern society is increasing sharply. DNA damage is caused by intrinsic or extrinsic factors in the human body, cells protect themselves by defense mechanism against DNA damage. Also, Aberrant DNA and deficient DNA repair are closely associated with various diseases, including aging and cancer. Researchers are interested in search for proper materials to inhibition for DNA damage. As knew the side effects of synthetic antioxidant, some researches have been conducted about cancer prevention materials derived from nature. Root of Smilax china, in Liliaceae, is used detoxification and tumor treatments traditionally. However, studies on the inhibitory effect of DNA damage haven't progressed. In this study, antioxidant activity and protective effects on oxidative DNA damage of S. china root were confirmed, relationship between those activities and contents of phenolic compounds in plants were established. S. china root effectively removed 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl radicals and 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid radicals. The quantification and identification of phenolic compounds were confirmed by high performance liquid chromatography analysis, its antioxidant activity was associated with some phenolic compounds. In addition, protective effects against hydroxyl radicals and ferrous ion-induced oxidative DNA damage were confirmed in plasmid DNA. In the cellular levels, S. china root suppressed the expression of ${\gamma}$-H2AX and p53 protein in NIH 3T3. Besides, S. china root suppressed H2AX and p53 mRNA levels. In conclusion, S. china root had the effect on DNA protection and antioxidant.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

하지만 토복령의 DNA 손상에 대한 억제 효과에 대한 연구는 미흡하다. 본 논문에서는 토복령의 항산화 효과 및 DNA 손상에 대한 억제효과를 확인하고, 식물이 포함하는 phenolic 화합물의 활성과 연관 관계를 확인하고자 하였다.
본 연구는 고뇨산혈증과 해독 등에 사용되어온 토복령의 항산화 활성, 산화적 DNA 손상 억제 활성 및 phenolic 화합물의동정 및 함량 분석을 통해 생물학적 유용성을 검증하였다.superoxide와 hydroxyl radical 등과 같은 활성산소종은 생체 내거대분자들에 치명적인 영향을 미치고, 산화적 스트레스를 유발하므로 살아있는 유기체는 산화적 스트레스에 대항하여 자기방어를 위한 기작을 작동한다[33].

제안 방법

House keeping gene으로 β-actin을 사용하였고 2% agarose gel (Affymetrix, Cleveland, OH, USA)로 UV 상에서 band를 확인하였다.
Phenolic 화합물의 High performance liquid chromatography(HPLC) 분석은 SHIMADZU LC-20 HPLC system과 SHIMADZUSPD-M20A Diode Array Detector (DAD) (Kyoto, Japan)를통해 분석하였다. 실험에 사용된 시료는 1 mg을 취하여 1 mL의 메탄올에 용해하여 0.
Reducing power는 대조군인 L-ascorbic acid 처리 농도 200μg/mL을 100%로 하여 비교 분석하였다.
cDNA상의 타겟 유전자를 증폭시키기 위하여 Quick Taq® HSDye Mix (Toyobo)와 합성한 cDNA, forward primer와 reverseprimer로 PCR을 수행하였다.
각 농도 별 추출물 100 μL에 0.2 M potassium phosphate buffer(pH 6.6) 250 μL과 1% potassium hexacyanoferrate (III)250 μL를 혼합한 후, 50°C에서 20분 반응시킨 후 찬물로 냉각하여, trichloroacetic acid 250 μL를 첨가하였다.
각 농도 별 추출물 40 μL에 760 μL의ABTS solution을 첨가한 후 37°C에서 20분 반응시켜 UV/Visible spectrophotometer를 이용하여 734 nm에서 흡광도를 측정하였다.
각 농도 별 추출물(0.32, 1.6, 8, 40, 200 μg/mL) 40 μL에 DPPHsolution 760 μL를 첨가한 후 37°C에서 20분 반응시켜 UV/Visible spectrophotometer (Human Cop, Xma-3000PC, Seoul, Korea) 를 이용하여 515 nm에서 흡광도를 측정하였다.
강력한 항산화제로 알려져 있는 L-ascorbic acid [32]를대조군으로 하였으며, 같은 농도에서 각각 5.3±0.5, 20.9±0.0, 76.5±0.1, 88.2±0.0, 93.5±0.1%로 나타났다.
메탄올 추출물을 40°C 이하의 중탕에서 감압 환류 냉각장치(N1110S, EYELA, Koishikawa, Japan)로 농축한 후 분별 깔때기를 이용하여 페트롤리움 에테르, 에틸아세테이트 순으로 3회 용매분획 하였다.
모든 과정은 4oC에서 진행되었으며, Quantus fluorometerRNA system (Promega)를 사용하여 정량하였으며, cDNA 합성을 위해 1 μg의 total RNA를 사용하여 reverse transcriptionkit (ReverTra Ace -α-, Toyobo, Osaka, Japan)를 이용하여 cDNA를 합성하였다.
시료 처리 24시간 후 alamar Blue^® Cell Viability Reagent(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)을 배지의 총량의 10%씩 처리하여 2시간 배양하였다. 반응 후 UV/Visiblespectrophotometer (Human Cop, Seoul, Korea)로 570 nm에서 흡광도를 측정하여 세포생존율을 확인하였다.
반응물 20 μL와 ϕX-174 RF I plasmid DNA 5 μL를 넣고, 37°C에서 3분간 반응한 후, 10 X loading buffer와 혼합한 후 1% agarose gel로 전기영동을 실시한 후 UV하에서 사진 촬영하였다.
반응물 20 μL와 ϕX-174 RF Iplasmid DNA 5 μL를 넣고, 37°C에서 3분간 반응한 후, 10X loading buffer와 혼합한 후 1% agarose gel로 전기 영동을 실시한 후 UV하에서 사진 촬영하였다.
시료 처리 48시간 후 PBS로 두 번 세척한 후, Nucleo Spin® RNA Plus(Macherey-Nagel, Duren, Germany)를 이용하여 total RNA를 얻었다.
위 반응액을2000 g에서 5분간 원심 분리하여 상등액 400 μL에 증류수 400μL와 0.10% ferric chloride 16 μL를 첨가하여 혼합한 후, UV/Visible spectrophotometer를 이용하여 700 nm에서 흡광도를 측정하였다.
이후 10분 간격으로 TBST로 3회 세척하고, 2차 항체 1:5000으로 희석하여 1시간 동안 반응시켰다. 이후 10분 간격으로 TBST로 3회 세척하고 enhanced chemiluminescencewestern blotting detection kit (Bio-rad)로 반응하였다. 단백질밴드는 FluorChem E (Cell biosciences, Palo Alto, CA,USA)로 촬영하여 확인하였다.
0 μm diameterparticles를 이용하여 흡광도 280 nm에서 분석하였다. 추출물의각 phenolic 화합물은 각각의 표준품과 비교하여 동정 및 정량하였다.
토복령의 NIH 3T3 세포에 대한 세포 독성을 확인하기 위해 세포 독성 실험을 실시하였다. 토복령 추출물 농도 25, 50, 100,200 400 μg/mL에서 각각 108.
토복령의 phenolic 화합물의 함량 및 동정은 HPLC 및 UVdetector를 통해 분석하였다. phenolic 화합물의 함량 분석 및 동정 결과(Fig.
토복령의 산화적 스트레스에 의한 DNA 손상 억제 활성을 평가하기 위해 FeCl₂ 및 FeSO₄와 H₂O₂의 Fenton 반응을 이용한산화적 스트레스를 이용하여 ϕX-174 RF I plasmid DNA의 손상을 유발하였으며, ϕX-174 RF I plasmid DNA cleavageassay를 이용한 비세포적 시스템으로 평가하였다. FeCl₂로 유발한 산화적 스트레스에 대한 토복령의 DNA 손상 억제 활성을 확인한 결과(Fig.
토복령의 항산화 활성을 확인하기 위해 DPPH 라디칼 및ABTS 라디칼에 대한 소거 활성을 확인하였으며 reducingpower를 평가하였다. 토복령의 DPPH 라디칼 소거활성을 확인한 결과(Fig.

대상 데이터

Louis, MO, USA) 제품을 사용하였다. ϕX-174 RF I plasmid DNA는Promega (Madison, WI, USA)에서 구입하여 사용하였다. 단백질 전기영동을 위한 실험기기는 Bio-Rad Labs (Hercules, CA, USA) 제품을 사용하였으며, 모든 항체는 Abcam (Cambridge, MA, USA) 제품을 사용하였다.
ϕX-174 RF I plasmid DNA는Promega (Madison, WI, USA)에서 구입하여 사용하였다. 단백질 전기영동을 위한 실험기기는 Bio-Rad Labs (Hercules, CA, USA) 제품을 사용하였으며, 모든 항체는 Abcam (Cambridge, MA, USA) 제품을 사용하였다. 표준품 및 모든 시약은 Sigma-Aldrich (St.
)은 충청북도 괴산군 문광면 탑골리 일대에서 채집하여 사용하였으며(voucher number: JWU-027), 중원대학교 생약자원개발학과의 이승현 교수가 동정하였다. 본 연구에 사용된 High-performance liquid chromatographygrade의 methanol, petroleum ether, ethyl acetate, chloroform, acetonitrile, dimethyl sulfoxide는 Merck (Frankfurter, Darmstadt, Germany)제품을 사용하였다. 세포배양 및 실험을 위한 Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM), fetal bovine serum, penicillin/streptomycin, trypsin은 Hyclone (Logan, UT, USA)제품을 사용하였다.
본 연구에 사용된 NIH 3T3 세포는 American Type CultureCollection (ATCC, Manassas, VA, USA)에서 분양 받아 실험하였다. 세포는 1% penicillin/streptomycin 및 10% fetalbovine serum이 포함된 DMEM에서 37°C, 5% CO₂ 조건하에 배양하였다.
본 연구에 사용된 토복령(S. china L.)은 충청북도 괴산군 문광면 탑골리 일대에서 채집하여 사용하였으며(voucher number: JWU-027), 중원대학교 생약자원개발학과의 이승현 교수가 동정하였다. 본 연구에 사용된 High-performance liquid chromatographygrade의 methanol, petroleum ether, ethyl acetate, chloroform, acetonitrile, dimethyl sulfoxide는 Merck (Frankfurter, Darmstadt, Germany)제품을 사용하였다.
세포배양 및 실험을 위한 Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM), fetal bovine serum, penicillin/streptomycin, trypsin은 Hyclone (Logan, UT, USA)제품을 사용하였다.
실험에 사용된 시료는 1 mg을 취하여 1 mL의 메탄올에 용해하여 0.45 μm membrane filter (Waters,Milford, MA, USA)를 이용해 여과하였고, 시료 10 μL를 메탄올 및 1% acetic acid/H2O을 이동상으로 SHIMADZU Shimpack GIS column (4.6×250 mm) packed with 5.0 μm diameterparticles를 이용하여 흡광도 280 nm에서 분석하였다.
이 중 에틸아세테이트 분획물을 감압 환류 냉각장치로 농축하여 실험 전까지 −27°C에 보관하였고, DMSO에 4000 ppm으로 용해하여 시료로 사용하였다.
토복령의 에틸아세테이트 분획물(2.6 g)은 건조시료 300 g을 분쇄한 후, 80% 메탄올 2.5 L로 7일간 침지한 후 Whatman filter paper (GE Healthcare Life Sciences, Amersham Place, Little Chalfont, Buckinghamshire, England)로 여과하였다. 메탄올 추출물을 40°C 이하의 중탕에서 감압 환류 냉각장치(N1110S, EYELA, Koishikawa, Japan)로 농축한 후 분별 깔때기를 이용하여 페트롤리움 에테르, 에틸아세테이트 순으로 3회 용매분획 하였다.
단백질 전기영동을 위한 실험기기는 Bio-Rad Labs (Hercules, CA, USA) 제품을 사용하였으며, 모든 항체는 Abcam (Cambridge, MA, USA) 제품을 사용하였다. 표준품 및 모든 시약은 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) 제품을 사용하였으며, 기타시약 및 기기는 별도 표기하였다.

데이터처리

그룹 간 비교는 Student’s ttest를 통해, p >0.05 수준에서 *로 표기하였다.
모든 실험 결과는 3번 이상 수행하였으며, 통계분석은 SPSS 18.0 (Statistical Package for the Social Sciences)을 이용하여 각 실험의 평균과 표준편차를 계산하였고, one-way analysis ofvariance (ANOVA)로 분석하였다. 그룹 간 비교는 Student’s ttest를 통해, p >0.

이론/모형

2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid (ABTS)라디칼 소거 활성 능력은 Van den Berg 등의 방법[29]을 참고하여 측정하였다.
DPPH를 이용한 전자 공여능은 Bondet 방법[28]을 참고하여 측정하였다. DPPH solution은 300 μM DPPH를 515 nm에서 흡광도 값이 1.
Reducing power는 Oyaizu의 방법[30]을 참고하여 측정하였다. 각 농도 별 추출물 100 μL에 0.
ϕX-174 RF I plasmid DNA 산화적 스트레스 손상 억제 활성은 Jung과 Surh의 방법[31]을 참고하여 측정하였다. Ferricchloride (FeCl₂)를 통한 산화적 스트레스는 각 농도 별 추출물40 μL와 4.

성능/효과

100 μg/mL의 L-ascorbic acid (77.11±4.6%)와 비교하였을 때, 같은 농도 및 50 μg/mL 농도에서도 토복령의 발현 억제 효과가 높았다.
50, 100 μg/mL 농도에서도 토복령의 발현 억제 효과가 높았다.
의 Fenton 반응을 이용한산화적 스트레스를 이용하여 ϕX-174 RF I plasmid DNA의 손상을 유발하였으며, ϕX-174 RF I plasmid DNA cleavageassay를 이용한 비세포적 시스템으로 평가하였다. FeCl₂로 유발한 산화적 스트레스에 대한 토복령의 DNA 손상 억제 활성을 확인한 결과(Fig. 4A), 산화적 스트레스에 의한 손상을 받은DNA는 open-circular (OC) 형태로 전환되었다. 시료를 처리한모든 농도에서 산화적 스트레스에 의한 DNA 손상을 억제하는 활성을 보였다.
시료를 처리한모든 농도에서 산화적 스트레스에 의한 DNA 손상을 억제하는 활성을 보였다. OH에 의해 유발된 산화적 스트레스에 대한 토복령의 DNA 손상 억제 활성을 확인한 결과(Fig. 4B), 산화적 스트레스에 의한 손상을 받은 DNA는 OC 형태로 전환되었으며, 시료를 처리한 모든 농도에서 산화적 스트레스에 의한 DNA손상을 억제하는 활성을 보였다.
p53 단백질 발현을 확인한 결과(Fig. 7B), 산화적스트레스에 의해 증가된 p53의 발현양(150.4±8.3%)은 농도 의존적으로 토복령 추출물에 의해 저해되었다.
농도 의존적으로 토복령 추출물에 의해 H2AX mRNA 수준이 저해되었으며, 50,100 μg/mL 농도에서도 토복령의 발현 억제 효과가 높았다. p53mRNA 수준을 확인한 결과(Fig. 8B), 산화적 스트레스에 의해 증가된 p53 mRNA 수준은 농도 의존적으로 토복령 추출물에 의해 저해되었다. 50, 100 μg/mL 농도에서도 토복령의 발현 억제 효과가 높았다.
토복령의 phenolic 화합물의 함량 및 동정은 HPLC 및 UVdetector를 통해 분석하였다. phenolic 화합물의 함량 분석 및 동정 결과(Fig. 5), chlorogenic acid, epicatechin을 동정하였으며, 각 표준품에 의한 정량직선방정식을 통해 함량을 분석한 결과, 각각 8.3, 5.9 mg/g으로 나타났으며, caffeic acid는 검출 되지 않았다(Table 1).
H2AX 및 p53 mRNA 수준의 저해 효과는 토복령의DNA 손상 억제 효과가 단백질 발현뿐만 아니라 mRNA 수준도 효과적으로 저해한다는 것을 나타낸다. 결론적으로, phenolic 화합물을 포함하는 토복령의 항산화 활성은 산화적 스트레스에대항하는 plasmid DNA 손상 억제 및 세포 수준의 DNA 손상저해 효과를 나타냈으며, 종양 억제 및 항산화, 항노화 등 다양한 질병에 대한 경감 및 치료를 목적으로 하는 제약, 화장품,식품 첨가물로의 활용가치를 확인하였다.
농도 의존적으로 토복령 추출물에 의해 H2AX mRNA 수준이 저해되었으며, 50,100 μg/mL 농도에서도 토복령의 발현 억제 효과가 높았다.
모든 농도에서 Lascorbic acid의 DPPH 라디칼 소거 활성이 높게 나타났지만, 추출물 농도 200 μg/mL에서 83.3±0.1%의 DPPH 라디칼 소거 활성이 확인되었다.
모든 농도에서 토복령의 ABTS 라디칼 소거 활성이 대조군보다 통계적으로 유의성이 있었으며, 특히 추출물 농도 8 μg/mL에서 뛰어난 ABTS 라디칼 소거 활성을 나타냈다.
산화적 스트레스로 유발된 NIH 3T3 세포의 DNA 손상에 대한 토복령의 억제 효과를 확인하기 위해 γ-H2AX 단백질 발현을 확인한 결과(Fig. 7A), 산화적 스트레스에 의해 증가된 γ-H2AX의 발현양(131.2±7.8%)은 농도 의존적으로 토복령 추출물에 의해 저해되었다.
산화적 스트레스로 유발된 NIH 3T3 세포의 DNA 손상에 대한 토복령의 억제 효과를 확인하기 위해 H2AX mRNA 수준을 확인한 결과(Fig. 8A), 산화적 스트레스에 의해 증가된 H2AX mRNA 수준(131.2±7.8%)은 농도 의존적으로 토복령 추출물에 의해 저해되었다.
4A), 산화적 스트레스에 의한 손상을 받은DNA는 open-circular (OC) 형태로 전환되었다. 시료를 처리한모든 농도에서 산화적 스트레스에 의한 DNA 손상을 억제하는 활성을 보였다. OH에 의해 유발된 산화적 스트레스에 대한 토복령의 DNA 손상 억제 활성을 확인한 결과(Fig.
특히 FeCl2에서 기인한 Fe²⁺에 대한 강한 억제 효과를 보였다. 이를 통해 OH- 라디칼에 비해 금속 킬레이팅 작용이 비교적 효과적인 것을 확인하였다. 또한, 산화적 스트레스는 알킬기를 DNA 염기로 공유결합시켜 DNA 이중 나선 구조의 손상과 DNA 가닥의 파괴를 유도하는데[40], DNA 이중 가닥의 손상은 돌연변이, 염색체 이상 및 세포 죽음에 이르게 하는 가장치명적인 원인이다[41,42].
57 μg/mL)로 매우 높은 ABTS 소거 활성을 보였다. 토복령은 DPPH에서 기인하는 자유라디칼에 대한 소거활성에 비해 ABTS에서 유래하는 cation 라디칼을 효과적으로 소거하였다. 항산화제와 같은 환원제는 Fe³⁺/ferricyanide complex를 환원시켜 ferrous 형태로 전환하고, 이 과정을 통해 형성된 Perl’s Prussianblue의 흡광도는 환원력을 평가하는 지표로 사용된다[36].
토복령의 ABTS 라디칼 소거활성을 확인한 결과(Fig. 2), 추출물 농도 0.32, 1.6, 8, 40, 200 μg/mL에서 각각 13.2±1.2%, 39.8±0.8%, 98.5±0.0%, 98.8±0.0%, 99.0±0.0%로 나타났다.
토복령의 DPPH 라디칼 소거활성에서, 추출물 농도에 따라 농도 의존적인 효과를 나타내었으며, L-ascorbic acid (5.07 μg/mL)와 비교하여 IC50 (inhibitoryconcentration) 값이 13.32 μg/mL로 나타났다.
토복령의 DPPH 라디칼 소거활성을 확인한 결과(Fig. 1), 추출물 농도 0.32, 1.6, 8, 40, 200 μg/mL에서각각 1.6±0.7, 11.6±0.9, 38.3±3.0, 78.7±0.8, 83.3±1.0%로 나타났다.
토복령의 Reducingpower를 평가한 결과(Fig. 3), 추출물 농도 0.32, 1.6, 8, 40,200 μg/mL에서 각각 58.1±4.1, 61.4±5.1, 79.1±6.8, 89.1±5.5,91.8±8.5%로 나타났다.
높은 항산화 효과와 환원력은 노화 및 성인병을 포함하는 다양한 질병의 원인인 활성산소종을 억제한다[37,38]. 토복령의 phenolic 화합물 및 다양한 phytochemical의 생리 활성[24,25]을 참고하여, chlorogenic acid, caffeic acid, epicatechin의 HPLC 분석을 통한 phenolic 화합물을 동정한 결과,chlorogenic acid, epicatechin이 확인되었다. 식물에서 확인되는 phenolic 화합물의 항산화 활성은 그 구조적인 특징과 관련성이 높은데, 이들은 금속 킬레이트제, 환원제, 활성산소의 소거제, 사슬전단 항산화제(chain breaking antioxidants)로 작용하는 것으로 알려져 있다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	식물의 항산화물질로 알려진 것은?	이와는 반대로, 인체에 대한 유해성이 낮은 천연 항산화제의 사용이 증대되고 있으며[17,18], 천연 항산화제로 사용될 수 있는 식물의항산화 물질에 대한 연구가 주를 이루고 있다. 식물의 항산화물질은 phenolic 화합물 및 flavonoid 계통의 화합물로 알려져 있으며[19], 이러한 물질들은 활성산소종과 화학적인 연쇄반응을 통해 수소를 공여하는 반응을 한다[20]. 이전 연구에서 금속이온에 대한 산화-환원 작용은 phenolic 화합물과 결합하거나복합체를 형성하여 H2O2와 금속 이온과의 반응을 억제한다고 밝혔으며[21,22], Fenton 반응의 억제를 이끌어내어 Fe2+의 환원반응을 일으키고, OH를 직접적으로 제거하여 산화적 스트레스로부터 DNA의 구조를 보호한다[23].
	OH− 라디칼 또는 Fe2+로 인한 산화적 DNA 손상에 대한 토복령의 억제 효과는?	정상적인 plasmid DNA는 supercoiled 형태로 존재하나 H2O2와 철의 Fenton 반응에 의해 생성된 OH− 라디칼 또는 Fe2+ 존재 하에서는 산화적 스트레스에 의한 손상을 받아 OC형태로 전환된다. 토복령은 FeCl2에서 기인한 Fe2+에 의한 산화적 손상 및FeSO4에서 기인한 OH- 산화적 손상 모두에 억제 효과를 나타냈다. 특히 FeCl2에서 기인한 Fe2+에 대한 강한 억제 효과를 보였다. 이를 통해 OH- 라디칼에 비해 금속 킬레이팅 작용이 비교적 효과적인 것을 확인하였다.
	암의 개시단계에서의 DNA 손상 억제가 항암 활성에 중요한 역할을 하는 이유는?	특히 유전적인 측면에서, 정상 세포가 종양 세포로 진행하는 과정은 개시(initiation), 촉진(promotion), 진행(progression)의 과정을 거쳐 발생하며, 개시(initiation)는 전자 친화성 발암인자(initiator)가 생체 내 대사에서 활성화되어, 유전자의 핵산에 비가역적으로 결합하여 정상세포의 DNA를 손상시키고, 종양 전구세포(preneoplastic cell)를 형성하는 돌연변이 현상이다. 암의 개시(initiation)단계에서 발생하는 DNA 손상은 암 발생과 83% 이상의 높은 상관성을 나타내므로, 개시(initiation) 단계에서의 DNA 손상 억제는 항암 활성에 있어서 중요한 역할을 한다[2,3].DNA는 물리적, 화학적 자극에 의해 세포적 대사산물을 생성하게 되며[4], 다양한 요인에 의해 활성산소종(reactive oxygenspecies, ROS)의 생성과 제거의 불균형이 발생한다[5].

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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