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[국내논문] 돼지에서 TRAF4 유전자 특성 및 Tight junction 관련 기능 분석
Characterization of TRAF4 mRNA and Functions related to tight junction in pig 원문보기

한국산학기술학회논문지 = Journal of the Korea Academia-Industrial cooperation Society, v.21 no.5, 2020년, pp.216 - 222  

윤정희 (농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과) ,  황인설 (농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과) ,  황성수 (농촌진흥청 국외기술농업과) ,  박미령 (농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과)

초록
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Tumor necrosis factor receptor associated factor 4 (TRAF4)는 사람의 유방암에서 과발현 되며, 암세포전이, ROS 및 세포 극성 형성 등에 관여하는 것으로 알려져 있다. 그러나 돼지에서는 아직까지 그 기능과 특성에 대한 연구가 보고 된 바 없다. 따라서 본 연구에서는 돼지 TRAF4의 mRNA 전장서열을 분석하고, 그 기능과 특성을 알아보고자 수행되었다. TRAF4의 전장서열을 밝히기 위해 돼지 신장유래세포(pK15)에서 total RNA 추출하여 RACE (Rapid Amplification of cDNA ends) PCR을 수행하였다. 2,030 염기쌍의 mRNA 전장서열을 분석하였고, 470개의 아미노산으로 구성 되어 있는 것을 확인하였다. 사람과 쥐의 Homology를 분석한 결과 각각 93 % 그리고 90 %의 유사도를 가지며, 사람과는 8개, 쥐와는 12개의 아미노산 차이가 있음을 확인하였다. qPCR을 통하여 TRAF4, CLDN4, OCLN 그리고 TJP1의 발현을 분석한 결과 세포의 confluency 정도에 따라 발현이 다르게 나타남을 확인하였고, 세포가 40% 증식한 그룹 보다 60 %와 80 % 이상 증식 한 그룹에서 유의적으로 높게 나타났다. 또한 TRAF4의 기능을 확인하기 위하여 TRAF4 siRNA 처리 한 결과 TRAF4와 tight junction 관련 유전자가 낮게 발현됨을 관찰하였다. 따라서 사람과 마우스와 같이 돼지에서도 TRAF4가 발현되며, 세포-세포 간 중요한 역할을 하는 tight junction에 관여하는 것으로 사료된다.

Abstract ▼ AI-Helper 아이콘AI-Helper

Tumor necrosis factor receptor associated factor 4 (TRAF4) is found to be overexpressed in human breast cancer. It plays a role in cancer metastasis, production of reactive oxygen species, and cell polarity at membranes. The characteristics and functions of TRAF4 in pigs have not yet been identified...

Keyword

#Pig   #TRAF4   #Tight junction   #PK15   #Sequence  

표/그림 (8)

AI 본문요약
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문제 정의

  • 따라서, 본 연구에서는 돼지 TRAF4 유전자의 서열을 분석하고 돼지 신장 유래 세포의 confluency 에 따른 TRAF4 유전자의 발현과 tight junction과의 상관관계를 분석하고자 하였다.
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질의응답

핵심어 질문 논문에서 추출한 답변
TRAF4은 어떤 구성으로 이루어져 있는가? 또한, EGFR의 Juxtamembrane 부위에 TRAF 도 메인이 결합하면서 세포증식과 신호전달에도 중요한 역할을 한다[6]. TRAF4는 RING 도메인과 7개의 zinc finger, 그리고 TRAF 도메인으로 구성되어 있으며, 2개 의 NLS 서열을 가지고 있는 것이 특징이다[7].
TRAF4란 무엇인가? TRAF4는 tumor necrosis factor receptor (TNFR)-associated factors (TRAFs) family에 속하며, 세포신호전달 단백질로써 배발생, 암세포 형성, 그리고 혈소판 응집 등에 중요한 역할을 하는 단백질로 알려져 있다[1-3]. 주로 세포질과 세포막에서 관찰되며 폐암이나 유방암 세포에서 과발현 되는 것으로 알려져 있다[1,4-5].
TRAF4는 주로 어디서 관찰할 수 있는가? TRAF4는 tumor necrosis factor receptor (TNFR)-associated factors (TRAFs) family에 속하며, 세포신호전달 단백질로써 배발생, 암세포 형성, 그리고 혈소판 응집 등에 중요한 역할을 하는 단백질로 알려져 있다[1-3]. 주로 세포질과 세포막에서 관찰되며 폐암이나 유방암 세포에서 과발현 되는 것으로 알려져 있다[1,4-5]. TRAF4 넉아웃 마우스의 경우 배아 신체기관, 신경관 및 골격계 형성 등에 영향이 있다고 보고되었다 [2].
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참고문헌 (19)

  1. Regnier, Catherine H., Regis Masson, Valerie Kedinger, Julien Textoris, Isabelle Stoll, Marie-Pierre Chenard, Andree Dierich, Catherine Tomasetto, and Marie-Christine Rio. "Impaired Neural Tube Closure, Axial Skeleton Malformations, and Tracheal Ring Disruption in Traf4-Deficient Mice." Proceedings of the National Academy of Sciences, Vol. 99, No. 8, pp. 5585, 2002. DOI: https://doi.org/10.1073/pnas.052124799 

    상세보기 crossref

  2. Tomasetto, C., C. Regnier, C. Moog-Lutz, M. G. Mattei, M. P. Chenard, R. Lidereau, P. Basset, and M. C. Rio. "Identification of Four Novel Human Genes Amplified and Overexpressed in Breast Carcinoma and Localized to the Q11-Q21.3 Region of Chromosome 17." Genomics, Vol. 28, No. 3, pp. 367-76, Aug. 1995. DOI: https://doi.org/10.1006/geno.1995.1163 

    상세보기 crossref

  3. Arthur, J. F., Y. Shen, E. E. Gardiner, L. Coleman, D. Murphy, D. Kenny, R. K. Andrews, and M. C. Berndt. "Tnf Receptor-Associated Factor 4 (Traf4) Is a Novel Binding Partner of Glycoprotein Ib and Glycoprotein Vi in Human Platelets." J Thromb Haemost, Vol. 9, No. 1, pp. 163-72, Jan. 2011. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1538-7836.2010.04091 

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  4. Kim, EunGi, Wanyeon Kim, Sungmin Lee, Jahyun Chun, JiHoon Kang, Gaeul Park, IkJoon Han, et al. "Traf4 Promotes Lung Cancer Aggressiveness by Modulating Tumor Microenvironment in Normal Fibroblasts." Scientific Reports, Vol. 7, No. 1, pp. 8923, Aug. 2017. DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-017-09447-z 

    상세보기 crossref

  5. Li, Wei, Cong Peng, Mee-Hyun Lee, DoYoung Lim, Feng Zhu, Yang Fu, Ge Yang, et al. "Traf4 Is a Critical Molecule for Akt Activation in Lung Cancer." [In eng]. Cancer research, Vol. 73, No. 23, pp.6938-50, 2013. DOI: https://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-13-0913 

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  6. Jura, N., N. F. Endres, K. Engel, S. Deindl, R. Das, M. H. Lamers, D. E. Wemmer, X. Zhang, and J. Kuriyan. "Mechanism for Activation of the Egf Receptor Catalytic Domain by the Juxtamembrane Segment." Cell, Vol. 137, No. 7, pp. 1293-307, Jun. 2009. DOI: https://doi.org/10.1016/j.cell.2009.04.025 

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  7. Regnier C. H, Tomasetto C, Moog-Lutz C, Chenard M-P, Wendling C, Basset P, Rio M-C., "Presence of a new conserved domain in CART1, a novel member of the tumor necrosis factor receptor-associated protein family, which is expressed in breast carcinoma", The journal of biological chemistry, Vol. 270, No. 43, 1995. DOI: https://doi.org/10.1074/jbc.270.43.25715 

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  8. Kim, C. M., J. Y. Choi, E. A. Bhat, J. H. Jeong, Y. J. Son, S. Kim, and H. H. Park. "Crystal Structure of Traf1 Traf Domain and Its Implications in the Traf1-Mediated Intracellular Signaling Pathway." Sci Rep, 6, pp. 25526, May. 2016. DOI: https://doi.org/10.1038/srep25526 

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  9. Park, H. H. "Structure of Traf Family: Current Understanding of Receptor Recognition." Front Immunol, 9, pp. 1999, 2018. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2018.01999 

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  10. Kim, C. M., Y. J. Son, S. Kim, S. Y. Kim, and H. H. Park. "Molecular Basis for Unique Specificity of Human Traf4 for Platelets Gpibbeta and Gpvi." Proc Natl Acad Sci U S A, Vol. 114, No. 43, pp. 11422-27, Oct. 2017. DOI: https://doi.org/10.1073/pnas.1708688114 

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  11. Marinis, J. M., J. E. Hutti, C. R. Homer, B. A. Cobb, L. C. Cantley, C. McDonald, and D. W. Abbott. "Ikappab Kinase Alpha Phosphorylation of Traf4 Downregulates Innate Immune Signaling." Mol Cell Biol, Vol. 32, No. 13, pp. 2479-89, Jul. 2012. DOI: https://doi.org/10.1128/MCB.00106-12 

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  12. Rousseau, A., A. G. McEwen, P. Poussin-Courmontagne, D. Rognan, Y. Nomine, M. C. Rio, C. Tomasetto, and F. Alpy. "Traf4 Is a Novel Phosphoinositide-Binding Protein Modulating Tight Junctions and Favoring Cell Migration." PLoS Biol, Vol. 11, No. 12 e1001726, Dec. 2013. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1001726 

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  13. Rousseau, A., L. P. Wilhelm, C. Tomasetto, and F. Alpy. "The Phosphoinositide-Binding Protein Traf4 Modulates Tight Junction Stability and Migration of Cancer Cells." Tissue Barriers, Vol. 2, No. 4, e975597, 2014. DOI: https://doi.org/10.4161/21688370.2014.975597 

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  14. Kedinger, V., F. Alpy, A. Baguet, M. Polette, I. Stoll, M. P. Chenard, C. Tomasetto, and M. C. Rio. "Tumor Necrosis Factor Receptor-Associated Factor 4 Is a Dynamic Tight Junction-Related Shuttle Protein Involved in Epithelium Homeostasis." PLoS One, Vol. 3, No. 10, e3518, 2008. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0003518 

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  15. Niu, Fengfeng, Heng Ru, Wei Ding, Songying Ouyang, and Zhi-Jie Liu. "Structural Biology Study of Human Tnf Receptor Associated Factor 4 Traf Domain." Protein & Cell, Vol. 4, No. 9, pp. 687-94, Sep. 2013. DOI: https://doi.org/10.1007/s13238-013-3068-z 

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  16. Rousseau, A., M. C. Rio, and F. Alpy. "Traf4, at the Crossroad between Morphogenesis and Cancer." Cancers (Basel), Vol. 3, No. 2, pp. 2734-49, Jun. 2011. DOI: https://doi.org/10.3390/cancers3022734 

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  17. Masson, R., C. H. Regnier, M. P. Chenard, C. Wendling, M. G. Mattei, C. Tomasetto, and M. C. Rio. "Tumor Necrosis Factor Receptor Associated Factor 4 (Traf4) Expression Pattern During Mouse Development." Mech Dev, Vol. 71, No. 1-2, pp. 187-91, Feb. 1998. DOI: https://doi.org/10.1016/s0925-4773(97)00192-5 

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  18. Qiao, X., I. Roth, E. Feraille, and U. Hasler. "Different Effects of Zo-1, Zo-2 and Zo-3 Silencing on Kidney Collecting Duct Principal Cell Proliferation and Adhesion." Cell Cycle Vol. 13, No. 19, pp. 3059-75, 2014. DOI: https://doi.org/10.4161/15384101.2014.949091 

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  19. Amoozadeh, Y., S. Anwer, Q. Dan, S. Venugopal, Y. Shi, E. Branchard, E. Liedtke, et al. "Cell Confluence Regulates Claudin-2 Expression: Possible Role for Zo-1 and Rac." Am J Physiol Cell Physiol , Vol. 314, No. 3, C366-C78, Mar. 2018. DOI: https://doi.org/10.1152/ajpcell.00234.2017 

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