[논문]유동세포분석에 의한 참전복(Haliotis discus hannai) 세포내 DNA 함량 분석 최적화

박인석

doi:10.11626/kjeb.2020.38.2.248

초록
AI-Helper

DNA 함량 조사는 진화의 유전적 기작을 예측하여 종분화를 파악하게 한다. 본 연구의 목적은 참전복(Haliotis discus hannai)의 DNA 함량을 측정하고 유세포분석기(flowcytometry)로 고정(fixation) 없이 DNA 함량 측정에 최적인 조직들을 파악하는 것이다. DNA 함량 (pg nucleus^-1)에 있어, 원생생물에 오염된 아가미조직(2.5±0.08)은 3.2±0.02 pg nucleus^-1의 DNA 함량을 보인 근육조직과 외투막조직에 비하여 유의하게 낮았고(p<0.05) standard reference보다도 낮은 반면, 근육조직과 외투막조직은 standard reference보다 높았다. 본 연구 결과들을 고려 시, 참전복에서 고정 없이 유동세포분석에 적절한 조직은 근육과 외투막이며 본 연구에 적용된 고정 과정이 없는 유세포분석법은 참전복 DNA 함량 분석 시 정확하고, 신속한 방법임이 판명되었다.

Abstract ▼ AI-Helper

The level at which analyses of DNA content might contribute more significantly to the genetic mechanisms of evolution lies in the events of speciation. The object of this study was to investigate the DNA content of abalone (Haliotis discus hannai) and determine the optimal tissue samples for measuri...

The level at which analyses of DNA content might contribute more significantly to the genetic mechanisms of evolution lies in the events of speciation. The object of this study was to investigate the DNA content of abalone (Haliotis discus hannai) and determine the optimal tissue samples for measuring the DNA content of abalone by flowcytometry without fixation. The DNA content (pg/nucleus) of gill tissue (2.5±0.08), which was contaminated with protozoa, was significantly lower than that of muscle tissue (3.2±0.02), mantle tissue (3.2±0.02) (p<0.05), and a standard reference standard, while the DNA contents of muscle tissue and mantle tissue were higher than that of the standard reference. Considering the results of this study, DNA content analysis with flowcytometry is an acute and rapid method by which muscle tissue and mantle tissue are the most appropriate sample for measuring the DNA content of abalone without fixation.

Keyword

AI 본문요약
AI-Helper

* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.

문제 정의

본 연구는 이러한 유동세포분석에 의해서 DNA 함량 조사는 패류 진화의 유전적 기작을 예측하게끔 하여 종분화를 파악할 수 있다는 관점의 일환으로, 신속한 DNA 함량 파악을 위하여 참전복의 미고정(nonfixation)된 아가미, 근육 및 외투막 조직을 사용하여 참전복의 DNA 함량을 조사하였으며, 아울러 DNA 함량 조사에 사용된 참전복 조직들을 대상으로 참전복 DNA 함량 조사에 적절하고 효과적인 조직을 구명하고자 조직학적 조사를 실시하였다.
DNA 함량 조사는 진화의 유전적 기작을 예측하여 종 분화를 파악하게 한다. 본 연구의 목적은 참전복(Haliotis discus hannai)의 DNA 함량을 측정하고 유세포분석기 (flowcytometry)로 고정(fixation) 없이 DNA 함량 측정에 최적인 조직들을 파악하는 것이다. DNA 함량 (pg nucleus^-1)에 있어, 원생생물에 오염된 아가미조직(2.

제안 방법

전복 각 조직세포들의 DNA 함량을 분석하였으며, 전복 DNA 함량 분석에 안정적이고 적절한 조직 파악을 위하여 본 연구에 사용된 전복 아가미조직을 대상으로 조직학적 연구를 실시하였다. 전복 아가미조직을 추출 후 10% 중성포르말린용액(100 mL formalin, 6.
고정된 전복 아가미조직은 기존의 조직학적 방법에 의거 ethanol (Sigma, USA)로 탈수, xylene (Sigma, USA)으로 투명화시켰고 paraffine으로 포매하였다. 이후 전복 아가미조직 표본은 6 μm로 연속절편하여 Mayer’s hematoxyline과 eosin Y-phloxine B로 염색하여 생물현미경 (Carl Zeiss, Jena, Germany) 하에서 관찰하고 사진촬영 하였다. 각 실험에 사용된 전복 개체수는 30마리였으며, 전체 3반복 실험을 실시하였고, SPSS (SPSS 9.

대상 데이터

본 연구에 사용된 참전복(H. discus hannai)은 2019년 5월에 부산광역시(한국)의 수산시장에서 구입하였으며, 한국해양대학교 수산유전육종학 사육실(한국)에서 3개의 100 L 사각수조에 수조당 각 50마리씩 수용 후, 20°C 수온에서 공기공급하며 사육하였다. 실험에 사용된 참전복의 평균 각장은 13.
무작위로 표본된 30마리의 전복을 20°C의 수온에서 200 ppm의 염산리도카인(Chinwhoa chemical Co, Korea)/1,000 ppm NaHCO₃ (Sigma, USA)로 마취하였다. 마취된 각 전복 표본으로 부터 아가미, 근육 및 외투막조직을 추출하여 petri dish에서 면도날로 세절하였다.

데이터처리

이후 전복 아가미조직 표본은 6 μm로 연속절편하여 Mayer’s hematoxyline과 eosin Y-phloxine B로 염색하여 생물현미경 (Carl Zeiss, Jena, Germany) 하에서 관찰하고 사진촬영 하였다. 각 실험에 사용된 전복 개체수는 30마리였으며, 전체 3반복 실험을 실시하였고, SPSS (SPSS 9.0, SPSS Inc., Chicago, lL, USA)로 Student’s t-test (p<0.05)를 실시하여 유의성 검정을 하였다.

이론/모형

수집된 각 세포들은 Cystain UV Precise T Kit (Partec, Görlitz, Germany)를 사용하여 상온에서 15분간 염색하였다. 상대적인 DNA 함량을 측정하기 위하여 각 조직세포들을 Park (2019, 2020a, 2020b)의 방법에 의거 유동세포분석기(Partec PA-II flowcytometry, Germany)를 사용하여 분석하였다. DNA 함량이 2.

성능/효과

1999) 기준한 상대 DNA 함량으로 계산한 결과는 Table 1과 같다. 계산된 참전복의 각 조직에서의 DNA 함량은 아가미가 2.5±0.08 pg nucleus^-1, 근육이 3.2±0.02 pg nucleus^-1 그리고 외투막이 3.2±0.02 pg nucleus^-1이었다(Table 1). 참전복의 DNA 함량에 있어 근육과 외투막은 3.
2011; Park 2019, 2020a, 2020b)이 있다. Coulter counter로의 적혈구 핵 크기 판별이나 생물현미경으로의 적혈구 핵 크기, 염색체 조사(비록 수산생물 유생 시기에 chopping method로 염색체 제작이 있을 수 있으나, 염색체 결과 도출에서 성체시기에서의 신장조직으로 부터의 염색체 제작에 비해 어려움이 있음)에 비하여 유동세포분석법은 수산생물 유생조직으로 부터도 신속하고 정확하게 DNA 함량을 분석할 수 있어, 실험적 연구나 부화장에서 종묘생산에 월등하고 우수한 도움을 줄 수 있을 것이다. 이전의 연구들(An et al.
참전복의 아가미조직을 조직학적으로 조사한 결과(Fig. 2), 여타의 protobranch 종과 마찬가지로 참전복은 bipectinate 아가미로서 gill filament에 잘 발달된 cilia와 microvilli가 확인되었다(Fig. 2a).
본 연구의 목적은 참전복(Haliotis discus hannai)의 DNA 함량을 측정하고 유세포분석기 (flowcytometry)로 고정(fixation) 없이 DNA 함량 측정에 최적인 조직들을 파악하는 것이다. DNA 함량 (pg nucleus^-1)에 있어, 원생생물에 오염된 아가미조직(2.5± 0.08)은 3.2±0.02 pg nucleus^-1의 DNA 함량을 보인 근육조직과 외투막조직에 비하여 유의하게 낮았고(p<0.05) standard reference보다도 낮은 반면, 근육조직과 외투막조직은 standard reference보다 높았다. 본 연구 결과들을 고려 시, 참전복에서 고정 없이 유동세포분석에 적절한 조직은 근육과 외투막이며 본 연구에 적용된 고정 과정이 없는 유세포분석법은 참전복 DNA 함량 분석 시 정확하고, 신속한 방법임이 판명되었다.
05) standard reference보다도 낮은 반면, 근육조직과 외투막조직은 standard reference보다 높았다. 본 연구 결과들을 고려 시, 참전복에서 고정 없이 유동세포분석에 적절한 조직은 근육과 외투막이며 본 연구에 적용된 고정 과정이 없는 유세포분석법은 참전복 DNA 함량 분석 시 정확하고, 신속한 방법임이 판명되었다.
(2009)의 보고와 비교 시, 본 연구에서는 미고정으로 인해 원생생물에 오염된 아가미는 정확한 전복 DNA 함량 측정이 불가하였다는 것으로 사료된다. 미고정에 의한 참전복 조직에서의 유동세포분석법은 참전복의 일부 조직만 사용하므로 참전복 초기 유생에서도 DNA 함량 측정이 가능함과 더불어 미고정으로 인하여 고정 과정을 거치는 DNA 함량 측정방법에 비하여 비교적 신속하게 DNA 함량 측정이 가능은 하지만, 아가미와 같은 원생생물에 오염된 조직에서는 DNA 함량 측정이 불가한 것으로 결론 지어진다. 본 연구 결과를 고려 시, 참전복에서 고정 없이 유동세포 분석에 적절한 조직은 근육과 외투막으로 나타났으며 본 연구에 적용된 유동세포분석법은 참전복을 위시한 여과 섭이를 하는 여타 패류에서의 DNA 함량 분석 시 정확하고, 신속한 방법임이 판명되었고 차후, 적용 가능하리라 사료된다.

후속연구

미고정에 의한 참전복 조직에서의 유동세포분석법은 참전복의 일부 조직만 사용하므로 참전복 초기 유생에서도 DNA 함량 측정이 가능함과 더불어 미고정으로 인하여 고정 과정을 거치는 DNA 함량 측정방법에 비하여 비교적 신속하게 DNA 함량 측정이 가능은 하지만, 아가미와 같은 원생생물에 오염된 조직에서는 DNA 함량 측정이 불가한 것으로 결론 지어진다. 본 연구 결과를 고려 시, 참전복에서 고정 없이 유동세포 분석에 적절한 조직은 근육과 외투막으로 나타났으며 본 연구에 적용된 유동세포분석법은 참전복을 위시한 여과 섭이를 하는 여타 패류에서의 DNA 함량 분석 시 정확하고, 신속한 방법임이 판명되었고 차후, 적용 가능하리라 사료된다.

참고문헌 (18)

An HS, YJ Jee, SJ Han, BL Kim, EM Kim and IS Park. 2007. Induction of a new hybrid between Haliotis gigantea (female) and H. discus (male). Korean J. Genetics 29:239-244.
Ashton-Alcox KA, B Allam and SE Ford. 2001. Application of flowcytometry to bivalve pathology. pp. 85-124. In: Recent Advances in Marine Biotechnology, Vol. 5 (Fingerman M and R Nagabhushanam eds.). Science Publishers, Plymouth, UK.
Cho JH, HG Nam and KS Oh. 2018. Processing and quality characteristics of a cultured recessive small-sized abalone Haliotis discus hannai extract. Korean J. Fish. Aquat. Sci. 51:640-646.
Da Silva PM and A Villalba. 2004. Comparison of microscopic techniques for the diagnosis of the infection of the European flat oyster Ostrea edulis by the protozoan Bonamia ostreae. J. Invertebr. Pathol. 85:97-104.
Estevam J, H Danaee, R Liu, J Ecsedy, W Trepicchio and T Wyant. 2011. Validation of a flow cytometry based G2M delay cell cycle assay for use in evaluating the pharmacodynamic response to Aurora A inhibition. J. Immunol. Methods 363: 135-142.

상세보기
FAO. 2017. Abalone production continues to grow, coupled with continuing demand, price high and stable. GLOBEFISH-Information and Analysis on World Fish Trade. Food and Agriculture Organization of the United Nations. Rome, Italy.
Gonzalez-Tizon A, A Martinez-Lage, I Rego, J Ausio and J Mendez. 2000. DNA contents, karyotypes and chromosomal location of 18S-5.8S-28S ribosomal loci in some species of bivalve molluscs from the Pacific Canadian coast. Genome 43: 1065-1072.
Hinegardner R. 1974. Cellular DNA content of the mollusca. Comp. Biochem. Physiol. 47:447-460.
Jee YJ and YJ Chang. 2012. Cytogenetic analysis of the triploid Pacific abalone, Haliotis discus hannai. Korean J. Malacol. 28:37-43.
Kim HS, KW Lee, HS Jeong, J Kim, AY Yun, SH Cho, GA Lee and KY Kim. 2017. Effect of dietary microalgae, diatom-dominant, oil extracts on growth, body composition and shell color of juvenile abalone Haliotis discus. Korean J. Fish. Aquat. Sci. 50:738-744.
NFFC. 2000. Marine Products in Korea. National Federation of Fisheries Cooperatives. Suhyup Publ. Co., Seoul, Korea.
Park IS. 2019. A comparative analysis of cell cycles in diploid and induced triploid tissues in marine medaka (Oryzias dancena). Korean J. Environ. Biol. 37:735-740.
Park IS. 2020a. Morphometric characteristics of diploid and triploid Far Eastern catfish, Silurus asotus. Korean J. Environ. Biol. 38:106-113.
Park IS. 2020b. Comparative analysis of sectioned-body morphometric characteristics of diploid and triploid marine medaka, Oryzias dancena. Korean J. Environ. Biol. 38:137-145.
Park IS, CH Kim and DS Kim. 1999. Karyotypes and cellular DNA contents of two species in the genus Lateolabrax from Korea. Fish. Sci. 65:488-489.
Thorgaard GH, PS Rabinovitch, MW Shen, GAE Gall, J Propp and FM Utter. 1982. Triploid rainbow trout identified by flow cytometry. Aquaculture 29:305-309.

상세보기
Vanparys C, M Maras, M Lenjou, J Robbens, D van Bockstaele, R Blust and W De Coen. 2006. Flow cytometric cell cycle analysis allows for rapid screening of estrogenicity in MCF-7 breast cancer cells. Toxicol. Vitro 20:1238-1248.

상세보기
Wolters WR, CL Chrisman and GS Libey. 1982. Erythrocyte nuclear measurements of diploid and triploid channel catfish, Ictalurus punctatus (Rafinicsque). J. Fish Biol. 20:253-258.

이 논문을 인용한 문헌

저자의 다른 논문 :

활용도 분석정보

상세보기

다운로드

내보내기

활용도 Top5 논문

해당 논문의 주제분야에서 활용도가 높은 상위 5개 콘텐츠를 보여줍니다.
더보기 버튼을 클릭하시면 더 많은 관련자료를 살펴볼 수 있습니다.

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증

[국내논문] 유동세포분석에 의한 참전복(Haliotis discus hannai) 세포내 DNA 함량 분석 최적화
A flowcytometric determination of DNA content in Pacific abalone, Haliotis discus hannai cell 원문보기

초록
AI-Helper

Abstract ▼ AI-Helper

Keyword

AI 본문요약
AI-Helper

문제 정의

제안 방법

대상 데이터

데이터처리

이론/모형

성능/효과

후속연구

참고문헌 (18)

이 논문을 인용한 문헌

저자의 다른 논문 :

활용도 분석정보

활용도 Top5 논문

관련 콘텐츠

원문 보기

원문 URL 링크

오픈액세스(OA) 유형

이 논문과 함께 이용한 콘텐츠

AI-Helper ※ AI-Helper는 오픈소스 모델을 사용합니다.

선택된 텍스트

연합인증

[국내논문] 유동세포분석에 의한 참전복(Haliotis discus hannai) 세포내 DNA 함량 분석 최적화 A flowcytometric determination of DNA content in Pacific abalone, Haliotis discus hannai cell 원문보기

초록 용어보기논문에서 용어와 풀이말을 자동 추출한 결과로, 시범 서비스 중입니다. AI-Helper

Abstract ▼ AI-Helper

Keyword

AI 본문요약 엑셀 다운로드 AI-Helper

문제 정의

제안 방법

대상 데이터

데이터처리

이론/모형

성능/효과

후속연구

참고문헌 (18)

이 논문을 인용한 문헌

저자의 다른 논문 :

박인석 (114)

활용도 분석정보

활용도 Top5 논문 더보기

관련 콘텐츠

원문 보기

원문 URL 링크

오픈액세스(OA) 유형

이 논문과 함께 이용한 콘텐츠

AI-Helper ※ AI-Helper는 오픈소스 모델을 사용합니다.

선택된 텍스트

[국내논문] 유동세포분석에 의한 참전복(Haliotis discus hannai) 세포내 DNA 함량 분석 최적화
A flowcytometric determination of DNA content in Pacific abalone, Haliotis discus hannai cell 원문보기

초록
AI-Helper

AI 본문요약
AI-Helper

활용도 Top5 논문