[논문]도인(桃仁)의 아토피 피부염 모델 피부조직 및 혈청 내 염증매개물질 조절 효과

김상우; 홍수연; 권보근; 김명현; 김상배; 진대환; 최우찬; 손영주; 정혁상

doi:10.6116/kjh.2020.35.4.51.

도인(桃仁)의 아토피 피부염 모델 피부조직 및 혈청 내 염증매개물질 조절 효과
Effect of Persicae Semen for Atopic Dermatitis Skin Tissue and Regulate to Inflammation Mediator in Serum 원문보기

大韓本草學會誌 = The Korea journal of herbology, v.35 no.4, 2020년, pp.51 - 60

김상우 (경희대학교 한의과대학 해부학교실) , 홍수연 (경희대학교 한의과대학 해부학교실) , 권보근 (경희대학교 한의과대학 해부학교실) , 김명현 (경희대학교 한의과대학 해부학교실) , 김상배 (경희대학교 한의과대학 해부학교실) , 진대환 (경희대학교 한의과대학 해부학교실) , 최우찬 (경희대학교 한의과대학 해부학교실) , 손영주 (경희대학교 한의과대학 해부학교실) , 정혁상 (경희대학교 한의과대학 해부학교실)

Abstract ▼ AI-Helper

Objective : The objective of this study was to demonstrate the effect of Persicae Semen (PS) in DNCB-induced atopic dermatitis mouse and HaCaT cell. Methods : The BALB/c mice were divided into four groups. To develop atopic dermatitis, 200 ㎕ of 1 and 0.5% DNCB solution was put on the back of mice in the Control group, the PS-Low group and the PS-High group once a day. After application of DNCB, 200 ㎕ of the PS extract was also treated. The Normal group was given PBS. The mice dorsal skin was stained with Masson's trichrome, H&E, and toluidine blue to evaluate the thickness of the epidermis and dermis, infiltration of eosinophils and mast cells respectively. ELISA was applied to measure the serum level of IgE and IL-6. Toxicity of PS was measured by MTS assay in HaCaT cell. To investigate the effects of PS on HaCaT cells, cells were pre-treated with PS for 1h, and then stimulated with TNF-α and IFN-γ. After 24 hours, the expression of TARC was analyzed using RT-PCR. Results : PS not only significantly diminished the thickness of the epidermis and dermis, but also reduced the infiltration of eosinophil and mast cell in skin lesion. PS also reduced the serum IgE and IL-6 level which plated important roles in the atopic dermatitis. The expression of TARC was decreased significantly in TNF-α/IFN-γ stimulated HaCaT cell. Conclusion : These results suggest that PS may be effective in alleviating the atopic dermatitis induced by DNCB and inflammation by TNF-α/IFN-γ.

주제어

표/그림 (8)

그림 Figure 1. Experiment schedule of AD model in BALB/c mice.
그림 Figure 2. The effects of PS on epidermis and dermis thickness in DNCB-induced BALB/c mice.
표 Table 1. Primer Sequences and PCR Conditions
그림 Figure 3. The effect of PS on eosinophil infiltration in DNCBinduced BALB/c mice.
그림 Figure 4. The effect of PS on mast cell infiltration in DNCBinduced BALB/c mice.
그림 Figure 5. The effect of PS on serum IgE and IL-6 level DNCB-induced in BALB/c mice.
그림 Figure 6. Cytotoxicity of PS in HaCaT cells.
그림 Figure 7. Effects of PS on mRNA expression in TNF-α/IFN-γ stimulated HaCaT cells.

AI 본문요약
AI-Helper

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문제 정의

본 실험에서는 桃仁 투여가 DNCB 유도 아토피 피부염 동물 피부 조직에 미치는 영향을 알아보기 위하여 H&E 염색을 실시하여 조직 내 호산구의 침윤을 관찰하였다.
. 본 연구 에서는 IgE와 IL-6 수치를 측정하기 위하여 실험을 종료한 후채취한 마우스 혈액으로부터 분리한 혈장을 사용하여 ELISA assay를 진행하였다. 혈청 IgE와 IL-6 수치는 Normal군에 비해 Control군에서 유의하게 증가하여 염증 반응 지표 물질임을 확인하였고, 2가지 수치 모두 桃仁을 투여한 군에서 농도 의존적으로 감소하는 경향을 보이며 고농도인 PS-High군에서 유의한 감소를 보였다.
본 연구에서 桃仁 투여가 DNCB 유도 아토피 피부염 피부 조직에 미치는 영향을 알아보기 위하여 Masson’s trichrome 염색을 실시하였다.
실제로 아토피 피부염의 염증 부위에서 비만세포의 활성화가 과도하게 이루어진 것이 관찰되며⁴⁹⁾ , 그 활성도와 관련된 줄기세포 인자(stem cell factor)가 염증의 중증도와 연관이 있다고 보고된 바 있다⁵⁰⁾ . 본 연구에서는 桃仁 투여가 DNCB 유도 아토피 피부염 피부 조직에 미치는 영향을 알아보기 위하여 Toluidine blue 염색을 실시하여 조직 내 비만세포의 침윤을 관찰하였다. 그 결과 Control군에 대비하여 저농도인 PS-Low 군과 고농도인 PS-High군 모두에서 비만세포의 조직 침윤이 유의하게 감소하였다.
본 연구에서는 桃仁의 아토피 피부염에 대한 치료 효과를 연구하기 위하여 DNCB 유도 아토피 피부염 동물 모델에 대하여 표피와 진피의 두께, 호산구와 비만세포의 조직 침윤도, 혈청 IgE와 염증성 사이토카인 IL-6의 수치를 측정하고, TNF-α와 IFN-γ로 염증반응을 유도한 HaCaT 세포 모델에 대하여 TARC 발현을 관찰하여 다음과 같은 결론을 얻었다.
본 연구에서는 아토피 피부염에 대한 桃仁의 치료 효과를 실험적으로 연구하였다. DNCB에 의해 유도된 동물 아토피 모델에 桃仁을 투여하여 표피와 진피에서의 과각화, 호산구와 비만세포의 조직 침윤 정도, 혈청 IgE와 염증성 사이토카인 IL-6의 변화를 확인하였다.
이에 저자는 BALB/c mice 피부에 DNCB 도포로 유발된 아토피 피부염 모델에 대하여 桃仁 투여시 표피와 진피의 두께 변화, 호산구와 비만세포의 침윤도, IgE와 IL-6의 수치 변화를 조사하고, TNF-α와 IFN-γ로 염증을 유도한 HaCaT 세포에서 桃仁 처리시 TARC 발현도를 확인하여 유의한 효과를 얻었기에 보고하는 바이다.

제안 방법

5% DNCB 200 ㎕를 등에 도포하였다. 2차 감작 진행과 동시에 도인 추출 약물을 등에 도포하였으며 약물은 1% DNCB 도포 2시간 뒤 PS-Low군, PS-High군에 매일 200 ㎕ 도포하였고, Normal군은 olive oil과 PBS를 1:9로 희석한 용매를 도포하였다. 실험 43일째 되는 날에 모두 희생하였다(Figure 1).
실험이 진행되는 동안 온도 23 ± 2℃, 습도 50± 10%로 조절된 동물 사육실에서 사료(Seoul, Korea)와 물을 공급하였다. 7일 동안 안정화를 가진 다음 총 4개의 군으로 나누어 사육하였다. 각 군은 아토피 피부염을 유발하지 않은 군 (Normal, Nor), 아토피 피부염을 유발시킨 군(Control, Con), 아토피 피부염을 유발시킨 후 桃仁 1 ㎎/㎖을 도포한 군(PSLow, PS-L)과 桃仁 10 ㎎/㎖을 도포한 군(PS-High, PSH)에 각각 8 마리씩 분류하였다.
본 연구에서는 아토피 피부염에 대한 桃仁의 치료 효과를 실험적으로 연구하였다. DNCB에 의해 유도된 동물 아토피 모델에 桃仁을 투여하여 표피와 진피에서의 과각화, 호산구와 비만세포의 조직 침윤 정도, 혈청 IgE와 염증성 사이토카인 IL-6의 변화를 확인하였다. 또, TNF-α와 IFN-γ로 HaCaT 세포에 염증을 유도한 후 桃仁을 투여하여 TARC 발현 정도를 측정하였다.
HaCaT cell에 TNF-α와 IFN-γ를 처리한 뒤 염증성 피부 질환에서 중요한 케모카인으로 알려진40) TARC를 유발하여 桃仁의 효과를 확인하고자 RT-PCR을 진행하였다.
HaCaT cell에서 桃仁의 독성 정도를 측정하기 위하여 MTS assay를 진행하였다. 세포를 96 well plate에 1.
Hematoxyline and eosin (H&E) 염색과 toluidine blue 염색을 시행하여 조직 내호산구와 비만세포의 침윤을 관찰하였고, masson trichrome 으로 염색하여 표피와 진피의 두께 변화를 관찰하였다.
MTS assay를 통하여 HaCaT cell에서 桃仁의 세포 독성을 측정하였다. 桃仁을 0~400 ㎍/㎖까지 처리한 결과 최고농도인 400 ㎍/㎖까지 HaCaT cell에서 100%의 생존율을 나타내며 독성을 보이지 않았다(Figure 6).
약물 처리 24시간 후 HaCaT cell을 Trizol을 이용하여 RNA를 추출한 후 SuperScript II reverse transcriptase를 사용하여 cDNA 합성하였다. PCR은 Kapa Taq PCR kit를 사용하여 제조사의 매뉴얼에 따라 수행하였다. PCR은 Table 1에 기재한 조건에 따라 실험을 진행하였다.
5% DNCB. The PS preparations of 1 ㎎/㎖ (PS-L) and of 10 ㎎/㎖ (PS-H) in 200 ㎕ of PBS/olive oil (9:1) were applied on the dorsal skin of the mice in groups, 1 ㎎/㎖ (PS-L) and 10㎎/㎖ (PS-H) once every day for 35 days.
The Nor was treated with 9:1 PBS/olive oil. The first sensitization of DNCB and PS group was applied with 1% DNCB, and second sensitization was an application for 4 weeks three times a week with 0.5% DNCB. The PS preparations of 1 ㎎/㎖ (PS-L) and of 10 ㎎/㎖ (PS-H) in 200 ㎕ of PBS/olive oil (9:1) were applied on the dorsal skin of the mice in groups, 1 ㎎/㎖ (PS-L) and 10㎎/㎖ (PS-H) once every day for 35 days.
桃仁 투여가 아토피 피부염 유발 모델 피부 조직에 미치는 영향을 알아보기 위하여 실험 종료 후 적출한 피부조직에 Masson’s trichrome 염색을 실시하여 표피 및 진피의 두께를 확인하고(Figure 2A), 100✕ 배의 비율로 3 시야를 측정 하였다(Figure 2B, 2C).
桃仁을 투여함으로써 혈청 IgE와 cytokine 생성이 변화하였는지 확인하였다. 대표적인 면역학적 지표인 IgE와 IL-6 수치를 측정하기 위하여 실험을 종료한 후 채취한 마우스 혈액으로부터 분리한 혈장을 사용하여 ELISA assay를 진행하였다(Figure 5).
桃仁이 피부에 미치는 영향을 분석하기 위해서, HaCaT cell을 HaCaT cell을 6 well plate에 1 × 106 cells/well로 분주하고 24시간 안정화 후 桃仁을 각 농도 별(50, 100, 200㎍/㎖)로 처리하였다.
7일 동안 안정화를 가진 다음 총 4개의 군으로 나누어 사육하였다. 각 군은 아토피 피부염을 유발하지 않은 군 (Normal, Nor), 아토피 피부염을 유발시킨 군(Control, Con), 아토피 피부염을 유발시킨 후 桃仁 1 ㎎/㎖을 도포한 군(PSLow, PS-L)과 桃仁 10 ㎎/㎖을 도포한 군(PS-High, PSH)에 각각 8 마리씩 분류하였다.
안정화 과정을 거친 BALB/c mice의 등을 제모하고 24시간 안정시킨 후 아토피 피부염을 유발할 목적으로 Control군, PS-Low군, PS-High군에 1차 감작을 하였으며 1일 1회씩 총 3일 동안 1% DNCB 200 ㎕를 등에 도포하였다. 그 후 4일 동안 잠복기를 가지고, 5일째 되는 날부터 희생 전까지 2차 감작을 위해 1주일에 3번씩 4주 동안 0.5% DNCB 200 ㎕를 등에 도포하였다. 2차 감작 진행과 동시에 도인 추출 약물을 등에 도포하였으며 약물은 1% DNCB 도포 2시간 뒤 PS-Low군, PS-High군에 매일 200 ㎕ 도포하였고, Normal군은 olive oil과 PBS를 1:9로 희석한 용매를 도포하였다.
桃仁을 투여함으로써 혈청 IgE와 cytokine 생성이 변화하였는지 확인하였다. 대표적인 면역학적 지표인 IgE와 IL-6 수치를 측정하기 위하여 실험을 종료한 후 채취한 마우스 혈액으로부터 분리한 혈장을 사용하여 ELISA assay를 진행하였다(Figure 5). IgE 수치는 Normal군에 대비하여 Control군 에서 유의하게 증가 하였으며, 桃仁을 투여한 군에서는 농도 의존적으로 감소하는 패턴을 보이며 특히 고농도인 PS-H군 에서 유의한 효과(*p < 0.
또, TNF-α와 IFN-γ로 HaCaT 세포에 염증을 유도한 후 桃仁을 투여하여 TARC 발현 정도를 측정하였다.
사람의 피부 각질형성세포주에 대해 桃仁 추출물이 미치는 세포 독성 효과를 알아보기 위해 0 ∼ 400 ㎎/㎖ 농도 범위에서 MTS assay를 수행하였다.
혈청에서의 IgE, IL-6 농도는 mouse ELISA kit (BD bio, San Diego, USA)를 이용하여 측정하였다. 실험 방법은 kit에서 권고하는 방법으로 진행하였다.
아토피 피부염을 유도하기 위해 olive oil과 acetone 3:1로 혼합한 용매에 DNCB를 각각 0.5%와 1%로 희석하여 사용하였으며 약물은 olive oil과 phosphate buffered saline (PBS) 1:9의 혼합 용매에 희석하였다. 안정화 과정을 거친 BALB/c mice의 등을 제모하고 24시간 안정시킨 후 아토피 피부염을 유발할 목적으로 Control군, PS-Low군, PS-High군에 1차 감작을 하였으며 1일 1회씩 총 3일 동안 1% DNCB 200 ㎕를 등에 도포하였다.
5%와 1%로 희석하여 사용하였으며 약물은 olive oil과 phosphate buffered saline (PBS) 1:9의 혼합 용매에 희석하였다. 안정화 과정을 거친 BALB/c mice의 등을 제모하고 24시간 안정시킨 후 아토피 피부염을 유발할 목적으로 Control군, PS-Low군, PS-High군에 1차 감작을 하였으며 1일 1회씩 총 3일 동안 1% DNCB 200 ㎕를 등에 도포하였다. 그 후 4일 동안 잠복기를 가지고, 5일째 되는 날부터 희생 전까지 2차 감작을 위해 1주일에 3번씩 4주 동안 0.
cells/well로 분주하고 24시간 안정화 후 桃仁을 각 농도 별(50, 100, 200㎍/㎖)로 처리하였다. 약물 처리 24시간 후 HaCaT cell을 Trizol을 이용하여 RNA를 추출한 후 SuperScript II reverse transcriptase를 사용하여 cDNA 합성하였다. PCR은 Kapa Taq PCR kit를 사용하여 제조사의 매뉴얼에 따라 수행하였다.
추출물을 처리한 결과 400 ㎎/㎖ 농도까지 100% 생존율로 독성을 보이지 않았다. 이 결과를 바탕으로 본 실험에서는 세포 생존율에 영향을 주지 않고 반복 처리 및 처치기간을 고려하여 200 ㎎/㎖ 이하의 농도까지를 TARC 발현 억제능 검증의 최대 농도로 결정하였다.
더욱이 TARC의 농도는 전체 아토피 피부염의 약 80%를 차지하는 IgE 매개성 아토피 피부염에서 뿐만 아니라 나머지 약 20%를 차지하는 비 IgE 매개성 아토피 피부염에서도 질병의 진단 및 중증도 평가에 객관적인 지표로서 의미를 가진다⁵⁹⁾ . 이번 연구에서는 PT-PCR로써 TARC의 발현을 조사하였다. Control군에서 Normal군에 비해 TARC의 mRNA 발현은 유의하게 증가하였으며, 桃仁을 투여한 군에 서는 농도 의존적으로 유의한 감소 효과를 보였다.
300 g의 桃仁을 80% 에탄올에 2주간 냉침 하였다. 이후, 추출액을 종이 여과지로 여과한 후 감압 농축한 상태에서 동결 건조하여, 8.37 g (수득율: 2.79%, Ethanol extract of Persicae Semen, PS)의 추출물을 얻었다. 그 후 초저온 냉동고 (-20℃)에 보관하며 실험에 사용하였다.
피부 조직은 희생시킨 날 채취하여 10% neutral buffered formalin (NBF)에 24시간 동안 고정하고, 흐르는 물에 24시간 동안 수세한 다음 파라핀으로 포매하였다. 포매한 조직을 block으로 만들고 microtome (ZEISS, Oberkochen, Germany) 을 이용하여 5 ㎜의 두께로 절편하였다. Hematoxyline and eosin (H&E) 염색과 toluidine blue 염색을 시행하여 조직 내호산구와 비만세포의 침윤을 관찰하였고, masson trichrome 으로 염색하여 표피와 진피의 두께 변화를 관찰하였다.
마우스 희생 당일에 주사기를 이용하여 심장에서 혈액을 채취하고 2000 rpm, 4℃, 10분 동안 혈청을 원심 분리하고, 실험에 사용하기 전까지 –80℃에서 보관하였다. 혈청에서의 IgE, IL-6 농도는 mouse ELISA kit (BD bio, San Diego, USA)를 이용하여 측정하였다. 실험 방법은 kit에서 권고하는 방법으로 진행하였다.

대상 데이터

Kapa Taq PCR kit는 KAPA Bio (Massachusetts, USA)에서 구입하였다. 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tet razolium, inner salt (MTS)는 Promega (Madison, USA) 에서 구입하였다. Enzyme-linked-immunosorbent assay Kit (ELISA kit)는 BD bioscience (San Diego, USA)에서 구입하였다.
Antibodies인 phosphorylation (P)-extracellular signalregulated kinase (ERK), ERK, P-P38, P38, P-Jun Nterminal kinase (JNK), Jun N-terminal kinase (JNK)는 Cell Signaling (MA, USA)에서 구입하였다. ECL 용액 (RPN2106)은 GE Life Sciences (MA, USA)로부터 구매하 였다.
ECL 용액 (RPN2106)은 GE Life Sciences (MA, USA)로부터 구매하 였다. DNCB (2,4-dinitrochlorobenzene), protease inhibitor cocktail, phosphatase inhibitor cocktail은 Sigma-Aldrich (MO, USA)에서 구입하였고, RNAiso Plus (Trizol)은 Takara Bio (Dalian, China)에서 구입하였다. SuperScript II reverse transcriptase는 Invitrogen (Carlsbad, CA)에서 구입하였 다.
Antibodies인 phosphorylation (P)-extracellular signalregulated kinase (ERK), ERK, P-P38, P38, P-Jun Nterminal kinase (JNK), Jun N-terminal kinase (JNK)는 Cell Signaling (MA, USA)에서 구입하였다. ECL 용액 (RPN2106)은 GE Life Sciences (MA, USA)로부터 구매하 였다. DNCB (2,4-dinitrochlorobenzene), protease inhibitor cocktail, phosphatase inhibitor cocktail은 Sigma-Aldrich (MO, USA)에서 구입하였고, RNAiso Plus (Trizol)은 Takara Bio (Dalian, China)에서 구입하였다.
HaCaT cell은 ATCC (Manassas, VA, USA)에서 구입하였고, Penicillin-streptomycin (P/S), fetal bovine serum (FBS), Dullbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM)은 Gibco (CA, USA)에서, TNF-α (#285-IF), IFN-γ (#210-TA)는 R&D System (MN, USA)에서 구입하였다.
HaCaT cell은 ATCC (Manassas, VA, USA)에서 구입하였고, Penicillin-streptomycin (P/S), fetal bovine serum (FBS), Dullbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM)은 Gibco (CA, USA)에서, TNF-α (#285-IF), IFN-γ (#210-TA)는 R&D System (MN, USA)에서 구입하였다. PCR primers는 Genotech (Daejeon, Korea)에서 구입하였다. Western blot.
DNCB (2,4-dinitrochlorobenzene), protease inhibitor cocktail, phosphatase inhibitor cocktail은 Sigma-Aldrich (MO, USA)에서 구입하였고, RNAiso Plus (Trizol)은 Takara Bio (Dalian, China)에서 구입하였다. SuperScript II reverse transcriptase는 Invitrogen (Carlsbad, CA)에서 구입하였 다. Kapa Taq PCR kit는 KAPA Bio (Massachusetts, USA)에서 구입하였다.
桃仁은 옴니허브(Daegu, Korea)에서 구매하였다. HaCaT cell은 ATCC (Manassas, VA, USA)에서 구입하였고, Penicillin-streptomycin (P/S), fetal bovine serum (FBS), Dullbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM)은 Gibco (CA, USA)에서, TNF-α (#285-IF), IFN-γ (#210-TA)는 R&D System (MN, USA)에서 구입하였다.
본 실험에 앞서 모든 동물 실험은 동물 실험 윤리위원회의 승인(KHMC-IACUC-18-016)을 받았고, 경희대학교 실험 동물 관리와 사용 지침의 규정에 따라 수행하였으며 생후 6주령의 수컷 BALB/c mice는 KOATECH (Seoul, Korea)에서 구입하였다. 실험이 진행되는 동안 온도 23 ± 2℃, 습도 50± 10%로 조절된 동물 사육실에서 사료(Seoul, Korea)와 물을 공급하였다.
인체 유래 각질 형성 세포주인 HaCaT cell은 5% P/S와 10% FBS가 포함된 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO 2, 95%의 습도를 유지하는 배양기(SA-MCO-175, SANYO Inc. Osaka, Japan)에서 배양하였다. 계대 배양은 2 ~ 3일 간격으로 하였 다.

데이터처리

모든 실험 결과는 Mean ± SEM 값으로 나타냈으며, Graph Pad PRISM Software (Version 5.01, Graphpad Software, Inc., CA, USA)를 사용하여 one-way ANOVA로 분석하고 Dunnett's multiple comparison test를 이용하여 사후 검정 하였다.

성능/효과

1. 桃仁은 고농도 처리군에서 아토피 피부염 유도 생쥐 모델의 표피와 진피 두께를 유의하게 감소시켰다.
2. 桃仁은 고농도 처리군에서 아토피 피부염 유도 동물 모델의 피부 조직 내 호산구 침윤을 유의하게 감소시켰다.
3. 桃仁은 저농도 처리군과 고농도 처리군 모두에서 아토피 피부염 동물 모델의 피부 조직 내 비만세포 침윤을 유의 하게 감소시켰다.
」으로 기재된 生血潤膚飮 35) 과 腎臟風瘡痒痛에 사용하는 活血驅風散³⁵⁾ 이 대표적이고, 生血潤膚飮의 경우에는 항알러지 효과³⁶⁾ 와 아토피 피부염에 대한 임상 효과³⁷⁾ 에 대한 연구결과가 보고되었다. 최근 연구에 의하면 桃仁 추출 성분이 알러지 염증을 억제하고³⁸⁾ , 주성분인 amygdalin은 피부각질형성세포 (keratinocyte cell)에 대한 면역조절 효과가 보고되어 ³⁹⁾ , 이상의 내용을 고려하면 桃仁이 아토피 피부염에서 염증을 완화할 수 있는 가능성이 있을 것으로 판단하였다.
4. 桃仁은 고농도 처리군에서 아토피 피부염 유도 생쥐 모델의 혈청 IgE와 염증성 사이토카인 IL-6의 수치를 유의하게 감소시켰다.
5. 桃仁은 염증이 유도된 HaCaT 세포에서 TARC 발현을 유의하게 감소시켰다.
이번 연구에서는 PT-PCR로써 TARC의 발현을 조사하였다. Control군에서 Normal군에 비해 TARC의 mRNA 발현은 유의하게 증가하였으며, 桃仁을 투여한 군에 서는 농도 의존적으로 유의한 감소 효과를 보였다. 따라서 桃仁 투여가 아토피 피부염에서 TARC의 mRNA 발현을 억제시켜 염증을 억제하는 효과가 있다고 보인다.
IL-6 수치도 IgE와 마찬가지로 Normal군에 비해 Control군에서 급격히 증가하였고, 桃仁을 투여하였을 때는 Control군과 대비해 IL-6의 수치가 농도 의존적으로 감소했으며 고농도인 PS-H군에서 유의성(*p < 0.05)을 가졌다.
IgE 수치는 Normal군에 대비하여 Control군 에서 유의하게 증가 하였으며, 桃仁을 투여한 군에서는 농도 의존적으로 감소하는 패턴을 보이며 특히 고농도인 PS-H군 에서 유의한 효과(*p < 0.05)를 보였다.
桃仁을 농도별로 투여하였을 때 호산구 침윤도는 Control군 대비 농도 의존적으로 감소하는 패턴을 보였으며 PS-High군에서 유의한(*p < 0.05) 효과가 보이는 것을 확인하였다(Figure 3).
본 연구에서는 桃仁 투여가 DNCB 유도 아토피 피부염 피부 조직에 미치는 영향을 알아보기 위하여 Toluidine blue 염색을 실시하여 조직 내 비만세포의 침윤을 관찰하였다. 그 결과 Control군에 대비하여 저농도인 PS-Low 군과 고농도인 PS-High군 모두에서 비만세포의 조직 침윤이 유의하게 감소하였다. 이는 桃仁이 비만세포의 활성화를 감소 시켜 아토피 피부염에서 염증 반응을 억제함을 의미한다.
Masson’s trichrome은 콜라겐의 섬유화를 확인하기 위해 사용하기도 하지만, 표피와 진피 그리고 하피의 구분을 명확하게 할 수 있어 종종 표피 및 진피의 두께 측정에 사용한다⁴⁵⁾ . 그 결과 桃仁을 도포한 피부에서 Control군에 대비하여 표피와 진피의 두께가 농도 의존적으로 감소하였고 고농도인 PS-High군에서 유의한 효과를 보였다. 이는 桃仁이 염증성 부종과 피부 비후화를 호전시켜 아토피 피부염 염증 반응을 억제함을 의미한다.
그 결과 桃仁을 도포한 피부에서 Control군에 대비하여 호산 구의 조직 침윤이 농도 의존적으로 감소하였고, 고농도인 PSHigh군에서 유의한 효과를 보였다. 이는 桃仁이 호산구의 활성화를 감소시켜 아토피 피부염에서 염증 반응을 완화함을 의미한다.
동물을 희생 후 적출한 피부조직에 Toluidine blue 염색을 진행하여 비만세포 침윤 정도를 관찰한 결과, Control군 에서 Normal군에 비해 비만세포의 침윤 정도가 높았고, 桃仁 을 도포하였을 때 Control군에 비하여 저농도인 PS-L군, 고농도인 PS-H군 모두에서 유의하게(**p < 0.01) 감소하였다 (Figure 4).
혈청 IgE와 IL-6 수치는 Normal군에 비해 Control군에서 유의하게 증가하여 염증 반응 지표 물질임을 확인하였고, 2가지 수치 모두 桃仁을 투여한 군에서 농도 의존적으로 감소하는 경향을 보이며 고농도인 PS-High군에서 유의한 감소를 보였다. 따라서 桃仁 투여가 아토피 피부염에서 혈청 IgE과 IL-6 수치를 감소시켜 염증을 억제하는 효과가 있다고 생각된다.
연구 결과 桃仁은 아토피 피부염 동물모델의 표피와 진피의 두께를 줄이고, 조직 내 호산구와 비만세포의 침 윤을 완화시켰으며, 혈청 IgE와 염증성 사이토카인인 IL-6의 수준을 저하시켰다. 또한, HaCaT 세포에서의 TARC 발현을 유의하게 감소시켰다.
본 연구에서는 BALB/c mice 등 피부에 DNCB 도포로 유발된 아토피 피부염 모델에 대하여 표피와 진피의 두께, 호산 구와 비만세포의 침윤도, 혈청 IgE와 IL-6의 수치 변화에서 桃仁이 조직학적, 혈액학적으로 염증 반응을 유의하게 감소시킨다는 사실과 HaCaT 세포에 TNF-α와 IFN-γ로 염증을 유도한 모델에 대하여 桃仁 투여가 TARC 발현을 억제하여 염증 반응을 유의성 있게 감소시킨다는 사실을 확인하였다.
또, TNF-α와 IFN-γ로 HaCaT 세포에 염증을 유도한 후 桃仁을 투여하여 TARC 발현 정도를 측정하였다. 연구 결과 桃仁은 아토피 피부염 동물모델의 표피와 진피의 두께를 줄이고, 조직 내 호산구와 비만세포의 침 윤을 완화시켰으며, 혈청 IgE와 염증성 사이토카인인 IL-6의 수준을 저하시켰다. 또한, HaCaT 세포에서의 TARC 발현을 유의하게 감소시켰다.
이상의 결과에서 桃仁은 아토피 피부염 유발 동물 모델에서 피부의 과각화를 완화하며 염증성 면역 세포와 혈청 IgE 등의 발현을 억제하였다. 이러한 결과는 도인의 아토피 피부염의 임상적 적용 가능성에 대한 객관적 연구자료가 될 것으로 생각 된다.
1%로 나타났다. 지속적으로 증가 추세인 아토피 피부염은 증상 경험, 우울, 불안, 수면 장애 등 정신 질환이 있고 다른 피부병 환자 보다 주의력결핍 과잉행동장애, 자폐 범주성 장애, 조현병 등정신질환에 더 취약한 것으로 나타났다⁸⁾ .
사람의 피부 각질형성세포주에 대해 桃仁 추출물이 미치는 세포 독성 효과를 알아보기 위해 0 ∼ 400 ㎎/㎖ 농도 범위에서 MTS assay를 수행하였다. 추출물을 처리한 결과 400 ㎎/㎖ 농도까지 100% 생존율로 독성을 보이지 않았다. 이 결과를 바탕으로 본 실험에서는 세포 생존율에 영향을 주지 않고 반복 처리 및 처치기간을 고려하여 200 ㎎/㎖ 이하의 농도까지를 TARC 발현 억제능 검증의 최대 농도로 결정하였다.
피부 조직에 H&E 염색을 실시한 후 조직 내부 호산구 침윤을 확인한 결과 Normal군에 비해 Control군에서 현저히 증가하였다.
본 연구 에서는 IgE와 IL-6 수치를 측정하기 위하여 실험을 종료한 후채취한 마우스 혈액으로부터 분리한 혈장을 사용하여 ELISA assay를 진행하였다. 혈청 IgE와 IL-6 수치는 Normal군에 비해 Control군에서 유의하게 증가하여 염증 반응 지표 물질임을 확인하였고, 2가지 수치 모두 桃仁을 투여한 군에서 농도 의존적으로 감소하는 경향을 보이며 고농도인 PS-High군에서 유의한 감소를 보였다. 따라서 桃仁 투여가 아토피 피부염에서 혈청 IgE과 IL-6 수치를 감소시켜 염증을 억제하는 효과가 있다고 생각된다.
확인 결과 표피와 진피 두께 모두가 Normal군에 대비해 Control군에서 유의하게 증가하였고, Control군에 대비하여 농도 의존적으로 감소하여 고농도인 PS-High군에서 유의한(*p < 0.05) 효과를 보였다.

후속연구

이상의 결과에서 桃仁은 아토피 피부염 유발 동물 모델에서 피부의 과각화를 완화하며 염증성 면역 세포와 혈청 IgE 등의 발현을 억제하였다. 이러한 결과는 도인의 아토피 피부염의 임상적 적용 가능성에 대한 객관적 연구자료가 될 것으로 생각 된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	桃仁(도인)은 무엇인가?	桃仁은 장미과(Rosaceae) 식물인 복사나무 Prunus persica (L.) Batsch 또는 산복사나무 P. davidiana (Carr.) Franch의 성숙한 과실에서 과육, 씨앗, 껍질을 제거하고 種仁만 취하여 건조한 것(Persicae Semen)이다24) . 성분은 amygdalin을 약 1.
	최근 밝혀진 桃仁의 효능은 무엇이 있는가?	」으로 기재된 生血潤膚飮 35) 과 腎臟風瘡痒痛에 사용하는 活血驅風散35) 이 대표적이고, 生血潤膚飮의 경우에는 항알러지 효과36) 와 아토피 피부염에 대한 임상 효과37) 에 대한 연구결과가 보고되었다. 최근 연구에 의하면 桃仁 추출 성분이 알러지 염증을 억제하고38) , 주성분인 amygdalin은 피부각질형성세포 (keratinocyte cell)에 대한 면역조절 효과가 보고되어 39) , 이상의 내용을 고려하면 桃仁이 아토피 피부염에서 염증을 완화할 수 있는 가능성이 있을 것으로 판단하였다.
	아토피 피부염 환자에게 발견되는 특이 IgE 증가로 인한 과민반응의 과정은 무엇인가?	아토피 피부염 환자는 유전적으로 결함이 있는 피부 장벽을 가지므로 보통 사람과 달리 병변이 없는 피부라도 정상적이지 않고 아토피 피부염 급성 반응은 랑게르한스 세포에 의해 매개된다52) . 알레르겐에 노출되어 IgE와 랑게르한스세포에 있는 Fcε 수용 체가 결합하면 랑게르한스세포는 CD4+ T세포를 피부로 유도 하는 IL-16과 단핵구 화학주성 단백을 생산하고 기억 Th2 세포를 활성화하며 항원을 T세포에 제시하여 민감화 시키고 림프절로 이동하여 naive T 세포 (Th0 세포)가 Th2 세포로 분화되도록 촉진한다. 병터로 이동한 단핵구는 Inflammatory dendritic epidermal cells (IDEC)로 분화하고 전구염증성 사이토카인인 IL-1, IL-6, TNF-α를 분비한다. 민감화된 Th2 세포는 IL-4, 5, 13과 같은 사이토카인을 생산하며, 이들은 면역 글로블린 동종형을 IgE로 전환시켜 Th2 세포의 생존을 촉진하고, 전환된 IgE는 알레르겐 반응을 증폭시켜 양성 되먹임(positive feedback) 고리를 형성한다. 이러한 Th2 면역반응과 면역반응의 증폭은 아토피 피부염의 초기 병변 생성에 중요한 역할을 한다47) .

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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