[논문]낙동강 상주보와 금강중류 대청댐 주변으로부터 야생효모의 분리 및 국내 미기록 효모들의 균학적 특성

한상민; 박동재; 김지윤; 임효진; 이향범; 이종수

doi:10.4489/kjm.20200025

낙동강 상주보와 금강중류 대청댐 주변으로부터 야생효모의 분리 및 국내 미기록 효모들의 균학적 특성
Isolation of Wild Yeasts Obtained from Waters and Soils of Riversides in Sangjubo of Nakdong River and Daechung Dam of Geumgang Midstream, Korea and Characterization of Unrecorded Wild Yeasts 원문보기

한국균학회지 = The Korean journal of mycology, v.48 no.3, 2020년, pp.237 - 249

한상민 (배재대학교 바이오.의생명공학과) , 박동재 (배재대학교 바이오.의생명공학과) , 김지윤 (배재대학교 바이오.의생명공학과) , 임효진 (전남대학교 응용생물공학부) , 이향범 (전남대학교 응용생물공학부) , 이종수 (배재대학교 바이오.의생명공학과)

초록
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경상북도 낙동강의 상주보와 금강중류인 대전시 신탄진의 대청댐주변의 야생효모들의 종 분포특성을 알아보기 위해 먼저 이들지역의 토양과 물들로부터 야생효모들을 분리, 동정하였다. 낙동강의 상주보에서 채취한 시료 47점에서 모두 39종 94 균주의 야생효모들이 분리, 동정되었고 Cryptococcus속 균들이 가장 많았다. 이들중Rhodosporidium azoricum JSL-GRU-009를 포함한 3균주들이 아직까지 국내에 보고되지 않은 미기록 효모들로 최종 선별되었다. 또한, 금강중류지역인 대전시 신탄진의 대청대교와 대청댐주변 토양과 물등 130종의 시료들로부터 105종 209균주들이 분리, 동정되었고 이들 야생효모 균주들로부터 Bullera pseudoalba JSL-GRU-005를 포함한 10종의 균들이 국내 미기록 효모들로 최종 선별되었다. 이들 낙동강 상주보와 대청댐등에서 선별된 13균주들의 균학적 특성을 조사한 결과 이들 미기록 균주들은 구형~타원형으로 출아, 분열법으로 영양 증식하였다. R. azoricum JSL-GRU를 포함한 9균주들이 포자를 형성하였고 10균주들이 비타민을 첨가하지 않은 YPD 배지에서 생육하였다.R. azoricum JSL-GR균주는 20% 포도당을 함유한 YPD 배지에서 잘 생육하였고, R. oryzicola JSL-GRU-003를 포함한 3 균주는 5% NaCl을 함유한 YPD 배지에서 생육하였다.

Abstract ▼ AI-Helper

The goal of this study was to isolate wild yeasts from waters and soils in Sangjubo of Nakdong river and Daechung dam in Daejeon city, Korea and investigate characteristics of previously unrecorded novel wild yeasts. In total, 94 strains from 39 different species of wild yeasts were isolated from 47 soils and waters samples obtained from Sangjubo in Nakdong river. Among these, 3 strains, including Rhodosporidium azoricum JSL-GRU-009, represented novel yeast strains which were previous recorded. Two hundred nine strains from 105 different species of wild yeasts were isolated from 130 soils and water samples obtained from Daechungdaegyo and Daechung dam of Shintanjin in Daejeon city, Korea. Ten strains including Bullera pseudoalba JSL-GRU-005 also represented newly recorded strains in Korea. All the 13 previously unrecorded yeasts were oval or global in shape, and nine strains, including R. azoricum JSL-GRU-009, formed ascospores. Ten strains grew well in vitamin-free medium. R. azoricum JSL-GRU-009 grew well in 20% glucose-containing yeast extract-peptone-dextrose (YPD) medium and 3 strains, including Rhodotorula oryzicola JSL-GRU-003, grew well in 5% NaCl-containing YPD medium.

주제어

표/그림 (6)

표 Table 1. Wild yeasts from soils and waters in Sangjubo of Nakdong river, Gyeongsangbuk-do, Korea.
표 Table 2. Wild yeasts from soils and waters in Daechungdaegyo of Shintanjin in Daejeon city, Korea.
표 Table 3. Wild yeasts from soils and waters in Daechung dam in Daejeon city, Korea.
표 Table 3. Wild yeasts from soils and waters in Daechung dam in Daejeon city, Korea.
표 Table 4. Microbiological characteristics of the unrecorded wild yeasts.
그림 Fig. 1. Phylogenetic tree of the unrecorded yeasts isolated from soils of spices plants fields and Mt. Daedun of Chungcheongnam-do, Korea, based on the nucleotide sequences of large subunit 26S ribosomal DNA D1/D2 region. The tree was generated by the neighborjoining method, using MEGA7.

AI 본문요약
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문제 정의

따라서 본 연구는 낙동강과 금강 주변 환경의 야생효모 분포특성과 종 다양성 확립 및 국내 미기록 야생효모들의 발굴연구의 일환으로 실시되었다. 이를 위해 전보[20,23]에 이어 낙동강 상주보주변과금강중, 상류지역인 대전광역시 대청대교와 대청댐 주변의 물과 토양들로부터 야생효모들을 분리하여 동정하였다.

제안 방법

경상북도 낙동강의 상주보와 금강중류인 대전시 신탄진의 대청댐주변의 야생효모들의 종 분포특성을 알아보기위해 먼저 이들지역의 토양과 물들로부터 야생효모들을 분리, 동정하였다. 낙동강의 상주보에서 채취한 시료 47점에서 모두 39종 94 균주의 야생효모들이 분리, 동정되었고 Cryptococcus속 균들이 가장 많았다.
낙동강 상주보(GPS: N; 36°27′38.5″, E; 128°14′13″)와 금강 중류 대전광역시 신탄진부근 대청대교(GPS: N; 36°28′28.3″ E; 127°28′32″)와 대청댐(GPS: N; 36°29′41.3″, E; 127°24′19.9″)주변 물, 토양과 식물체 등 177점들을 2019년 4월부터 9월사이에 무균적으로 채취하여 멸균 튜브에 넣고, 5 mL 의 멸균수를 첨가한 후 2시간 동안 진탕하였다.
이들 현탁액 일부를 스트렙토마이신(100 µg·mL^-1)과 앰피실린(100 µg·mL^-1)이 들어 있는 YPD (yeast extract-peptone-dextrose)한천배지에 도말하고 30℃에서 48시간 배양한 후 형성된 효모 집락들을 일반 야생 효모균주로 분리하였다[23]. 또한 20% 포도당을 함유한 YPD배지에서 분리한 효모들을 내당성 효모로, 5% NaCl을 함유한 YPD배지에서 생육한 효모들을 내염성 야생효모로 분리하였다.
이를 위해 전보[20,23]에 이어 낙동강 상주보주변과금강중, 상류지역인 대전광역시 대청대교와 대청댐 주변의 물과 토양들로부터 야생효모들을 분리하여 동정하였다. 또한, 국내에 보고되지 않은 미기록 야생효모들을 선별하여 이들의 균학적특성을 조사하였다.
분리효모들의 동정을 위하여 먼저 이들의 26S rDNA의 D1/D2 부위 및 ITS (internal transcribed spacer) 부위의 염기서열들을 결정한 후 결정된 염기서열들을 NCBI의 BLAST를 사용하여 데이터베이스에 등록되어 있는 효모들과의 상동성을 비교하여 분자생물학적 유연관계를 분석하여 동정하였다[23].
위와 같이 분리, 동정한 야생효모들을 대상으로 국립 생물자원관 DB와 한국 진균관련 학술자료들을 이용하여 국내 미기록효모들을 선별한후 일반 미생물 실험방법 등을 이용하여 이들의 몇 가지 균학적 특성 등을 조사하였다[23].
1과 같다. 이들의 26S D1/D2부위의 sequence를 NCBI의 GenBank에 업로드하였다(Accession No.: MT928728-MT928740).
따라서 본 연구는 낙동강과 금강 주변 환경의 야생효모 분포특성과 종 다양성 확립 및 국내 미기록 야생효모들의 발굴연구의 일환으로 실시되었다. 이를 위해 전보[20,23]에 이어 낙동강 상주보주변과금강중, 상류지역인 대전광역시 대청대교와 대청댐 주변의 물과 토양들로부터 야생효모들을 분리하여 동정하였다. 또한, 국내에 보고되지 않은 미기록 야생효모들을 선별하여 이들의 균학적특성을 조사하였다.

대상 데이터

이들 낙동강 상주보와 대청댐등에서 선별된 13균주들의 균학적 특성을 조사한 결과 이들 미기록 균주들은 구형~타원형으로 출아, 분열법으로 영양 증식하였다.R. azoricum JSL-GRU를 포함한 9균주들이 포자를 형성하였고 10균주들이 비타민을 첨가하지 않은 YPD 배지에서 생육하였다. R.

이론/모형

Daedun of Chungcheongnam-do, Korea, based on the nucleotide sequences of large subunit 26S ribosomal DNA D1/D2 region. The tree was generated by the neighbor-joining method, using MEGA7.

성능/효과

azoricum JSL-GRU를 포함한 9균주들이 포자를 형성하였고 10균주들이 비타민을 첨가하지 않은 YPD 배지에서 생육하였다. R. azoricum JSL-GR균주는 20% 포도당을 함유한 YPD 배지에서 잘 생육하였고, R. oryzicola JSL-GRU-003를 포함한 3 균주는 5% NaCl을 함유한 YPD 배지에서 생육하였다.
Wickerhamomyces onychis JSL-GRU-002등 9균주들이 20% 포도당을 함유한 YPD 배지에서 생육 하는 내당성을 보였고, 특히 Rhodosporidium azoricum JSL-GRU-009균주는 20% 포도당을 함유한 YPD 배지에서 가장 생육이 양호하여 내당성이 강한 효모이었다. 또한 Rhodotorula oryzicola JSLGRU-003와 Hanseniaspora valbyensis JSL-GRU-004, Bullera pseudoalba JSL-GRU-005등은 5% NaCl을 함유한 YPD배지에서 생육하는 호염성 효모들이었고 Naganishia cerealis JSL-GRU-013균주는 40℃에서도 생육하는 고온성 효모이었다.
낙동강 상주보주변 물과 토양 47점에서 일반 효모 17종, 내당성 효모 14종과 내염성 효모 8종등 모두 39종, 94균주의 야생효모들을 분리하였고 이들중 균 이름과 GenBank 번호가 같으면서 분리 (시료) 번호만 다른 효모균주는 모두 70균주이었다(Table 1). 이들 야생효모들중 Cryptococcus속균이 5속균으로 많았고 단일균주로는 Rhodosporodium fluviale 균주가 17균주로 가장 많았다.
경상북도 낙동강의 상주보와 금강중류인 대전시 신탄진의 대청댐주변의 야생효모들의 종 분포특성을 알아보기위해 먼저 이들지역의 토양과 물들로부터 야생효모들을 분리, 동정하였다. 낙동강의 상주보에서 채취한 시료 47점에서 모두 39종 94 균주의 야생효모들이 분리, 동정되었고 Cryptococcus속 균들이 가장 많았다. 이들중 Rhodosporidium azoricum JSL-GRU-009를 포함한 3균주들이 아직까지 국내에 보고되지 않은 미기록 효모들로 최종 선별되었다.
Wickerhamomyces onychis JSL-GRU-002등 9균주들이 20% 포도당을 함유한 YPD 배지에서 생육 하는 내당성을 보였고, 특히 Rhodosporidium azoricum JSL-GRU-009균주는 20% 포도당을 함유한 YPD 배지에서 가장 생육이 양호하여 내당성이 강한 효모이었다. 또한 Rhodotorula oryzicola JSLGRU-003와 Hanseniaspora valbyensis JSL-GRU-004, Bullera pseudoalba JSL-GRU-005등은 5% NaCl을 함유한 YPD배지에서 생육하는 호염성 효모들이었고 Naganishia cerealis JSL-GRU-013균주는 40℃에서도 생육하는 고온성 효모이었다.
이들중 Rhodosporidium azoricum JSL-GRU-009를 포함한 3균주들이 아직까지 국내에 보고되지 않은 미기록 효모들로 최종 선별되었다. 또한, 금강중류지역 인 대전시 신탄진의 대청대교와 대청댐주변 토양과 물등 130종의 시료들로부터 105종 209균주들이 분리, 동정되었고 이들 야생효모 균주들로부터 Bullera pseudoalba JSL-GRU-005를 포함한 10종의 균들이 국내 미기록 효모들로 최종 선별되었다. 이들 낙동강 상주보와 대청댐등에서 선별된 13균주들의 균학적 특성을 조사한 결과 이들 미기록 균주들은 구형~타원형으로 출아, 분열법으로 영양 증식하였다.
또한, 이들중 Bullera pseudoalba JSL-GRU-005, Curvibasidium pallidicorallinum JSL-GRU-001, Filobasidium globisporum JSL-GRU-006, Hanseniaspora valbyensis JSL-GRU-004, Rhodotorula oryzicola JSL-GRU-003, Tilletiopsis washingtonensis JSL-GRU-007 와 Wickerhamomyces onychis JSLGRU-002 등 7균주들이 국내 미기록 야생효모 균주들로 최종 선별되었다.
배양학적 특성: Sporobolomyces longiusculus JSL-GRU-008균주가 YM (yeast malt)와 PDA (potato-dextrose agar)에서 생육하지 못했고 YPD 배지에서도 미약한 생육을 보였을 뿐 나머지 12균주들은 일반적인 진균배지로 적합한 YPD, YM, PD배지에서 잘 생육하였다 Curvibasidium pallidicorallinum JSL-GRU-001, Tilletiopsis washingtonensis JSL-GRU-007, Sporobolomyces longiusculus JSL-GRU-008균주외에 10균주들은 모두 비타민을 함유하지 않은 YPD배지에서도 생육하였다.
세종특별시와 대전광역시 신탄진의 대청댐사이의 금강중류에있는 아람찬교와 대청대교주변 물과 식물체 부식물 및 토양 70점에서 야생효모들을 분리한 결과 (Table 2) 일반 효모 32종과 내당성 효모 4종, 내염성 효모 8종등 모두 44종, 96균주의 야생효모들이 분리, 동정되었고 이들 중 52균주가 분리번호가 다르면서 GenBank 번호와 균 이름이 동일한 야생효모들이었다.
이들 가운대 특히 R. azoricum JSL-GRU-009, Pseudozyma graminicola JSL-GRU-010, Candida davisiana JSL-GRU-011등 3균주들이 우리나라에 아직까지 보고되지 않은 국내 미기록 야생효모들로 선별되었다.
낙동강 상주보주변 물과 토양 47점에서 일반 효모 17종, 내당성 효모 14종과 내염성 효모 8종등 모두 39종, 94균주의 야생효모들을 분리하였고 이들중 균 이름과 GenBank 번호가 같으면서 분리 (시료) 번호만 다른 효모균주는 모두 70균주이었다(Table 1). 이들 야생효모들중 Cryptococcus속균이 5속균으로 많았고 단일균주로는 Rhodosporodium fluviale 균주가 17균주로 가장 많았다.
이들 중에는 위의 낙동강 상주보 시료에서처럼 Cryptococcus속균이 8종으로 많이 분리되었고 Holtermanniella takashimae 균주가 10균로 가장 많았다.
낙동강의 상주보에서 채취한 시료 47점에서 모두 39종 94 균주의 야생효모들이 분리, 동정되었고 Cryptococcus속 균들이 가장 많았다. 이들중 Rhodosporidium azoricum JSL-GRU-009를 포함한 3균주들이 아직까지 국내에 보고되지 않은 미기록 효모들로 최종 선별되었다. 또한, 금강중류지역 인 대전시 신탄진의 대청대교와 대청댐주변 토양과 물등 130종의 시료들로부터 105종 209균주들이 분리, 동정되었고 이들 야생효모 균주들로부터 Bullera pseudoalba JSL-GRU-005를 포함한 10종의 균들이 국내 미기록 효모들로 최종 선별되었다.
한편, 대청댐과 대청호수주변 물과 토양 60점에서는 Rhodosporodium fluviale 야생효모 6균주와 Rhodotonular paludigena 6균주들을 포함한 총 61종 113 균주들이 분리, 동정되었고 분리번호가 다르면서 균 이름과 GenBank 번호가 같은 균주는 모두 60균주이었다(Table 3). 이들 분리균주들 중에는 Cryptococcus friedmannii JSL-GRU-012, Naganishia cerealis JSL-GRU-013와 Sporobolomyces longiusculus JSL-GRU-008 균주들이 국내에서는 처음으로 분리된 미기록 야생효모들이었다.
한편, 이들 미기록효모들의 무세포 추출물들을 제조하여 skim milk를 이용한 이들의 단백질분해효소 활성을 조사한 결과 Filobasidium globisporum JSL-GRU-006이 약 1 cm의 분해환을 보여 활성이 우수하였고 Sporobolomyces longiusculus JSL-GRU-008도 0.5 cm를 보였다, 또한, Curvibasidium pallidicorallinum JSL-GRU-001, Filobasidium globisporum JSL-GRU-006, Tilletiopsis washingtonensis JSL-GRU-007, Sporobolomyces longiusculus JSL-GRU-008, Rhodosporidium azoricum JSL-GRU-009, Pseudozyma graminicola JSL-GRU-010등의 무세포 추출물들이 가용성 전분배지에서 0.1-0.4 cm의 분해환을보여 전분분해활성이 있었다(data not shown).

후속연구

따라서, 앞으로 이들 효모들은 전분가공 등 다양한 발효산업에서 유용하게 활용될 것이고 나아가 고온성, 내염성 등 극한환경 미생물의 생리생화학적 연구와 이들을 이용한 유용 효소 생산 등의 추가연구가 필요한 것으로 사료된다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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