[논문]Thioacetamide로 유발한 간손상 모델에서 계혈등(鷄血藤)의 간보호 효과

오민혁; 신미래; 노성수

doi:10.6116/kjh.2021.36.2.31.

Thioacetamide로 유발한 간손상 모델에서 계혈등(鷄血藤)의 간보호 효과
Protective Effect of Spatholobi Caulis in Thioacetamide induced Acute Liver Injury of Rat 원문보기

大韓本草學會誌 = The Korea journal of herbology, v.36 no.2, 2021년, pp.31 - 42

오민혁 (대구한의대학교 한의과대학 본초약리학교실) , 신미래 (대구한의대학교 한의과대학 본초약리학교실) , 노성수 (대구한의대학교 한의과대학 본초약리학교실)

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Objectives : This study was undertaken to investigate the hepatoprotective effect of Spatholobi Caulis water extract (SC) to thioacetamide (TAA)-induced acute liver injury (ALI) in rats. Methods : The rats were injected intraperitoneally with TAA (200 mg/kg body weight) and orally administered SC (100 or 200 mg/kg b.w.) daily for 3 days. Liver biomarkers were assessed by serum glutamic oxaloacetic transaminase (GOT), glutamic pyruvic transaminase (GPT), and ammonia levels. Malondialdehyde (MDA) was measured both serum and liver tissue. In addition, nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oxidase, anti-oxidant, and inflammation-related proteins were investigated by western blot analysis. Histological examination further confirmed though hematoxylin and eosin stain. Results : The SC treatment reduced liver function markers like GOT and GPT and also remarkably decreased ammonia level. Moreover, the elevated MDA level in TAA-induced group was significantly reduced by SC treatment. NADPH oxidase expression associated with oxidative stress including NOX2, NOX4, and p47phox markedly inhibited by SC administration. SC treatment exerted anti-oxidant effect through the increase of anti-oxidant enzyme including superoxide dismutase (SOD), Catalase, and heme oxygenase-1 (HO-1). The protein expressions of inflammatory cytokines such as tumor necrosis factor-�� (TNF-��), IL-6, and IL-1�� induced by nuclear factor-kappa B (NF-��B) activation were modulated through blocking the phosphorylation of inhibitor of nuclear factor ��B�� (I��B)��. SC treatment also improved histological alterations. Conclusion : These findings suggested that SC administration may be a potential candidate for the prevention or treatment of ALI.

주제어

표/그림 (10)

그림 Fig. 1. Scavenging activity of SC on DPPH and ABTS free radical scavenging assays. (A): DPPH free radical scavenging acitivity of L-ascorbic acid and SC; (B) ABTS free radical scavenging acitivity of L-ascorbic acid and SC.
표 Table 1. Total polyphenol and Total flavonoid Contents of Spatholobus suberectus.
그림 Fig. 2. GOT and GPT levels in serum. (A): Glutamic oxaloacetic transaminase (GOT); (B): glutamic pyruvic transaminase (GPT). Normal; nomarl rat, Control; TAA-induced rat, S; TAA-induced rat with Silymarin 100 ㎎/㎏ body weight rat, SCL; TAA-induced rat with Spatholobi Caulis 100 ㎎/㎏ body weight rat, SCH TAA-induced rat with Spatholobi Caulis 200 ㎎/㎏ body weight rat. All data are expressed means ± SD (n=8). Significance: ^###p < 0.001 vs. the normal group, ^*p < 0.05, ^**p < 0.01 vs. control group.
그림 Fig. 3. Ammonia level in serum. Normal; nomarl rat, Control; TAA-induced rat, S; TAA-induced rat with Silymarin 100 ㎎/㎏ body weight rat, SCL; TAA-induced rat with Spatholobi Caulis 100 ㎎/㎏ body weight rat, SCH TAAinduced rat with Spatholobi Caulis 200 ㎎/㎏ body weight rat. All data are expressed means ± SD (n=8). Significance: ^###p < 0.001 vs. the normal group, ^**p < 0.01, ^***p < 0.001 vs. the control group.
그림 Fig. 4. Histopathological analysis. Liver tissue were stained with H&E (Scale bar: ×200). (A): Normal; (B): TAA-induced rat; (C): TAA-induced rat with Silymarin 100 ㎎/㎏ body weight rat; (D): TAA-induced rat with Spatholobi Caulis 100 ㎎/㎏ body weight rat; (E): TAA-induced rat with Spatholobi Caulis 200 ㎎/㎏ body weight rat.
그림 Fig. 5. MDA levels in serum and liver tissue. (A): Malondialdehyde (MDA) in serum; (B): malondialdehyde (MDA) in liver tissue. Normal; nomarl rat, Control; TAA-induced rat, S; TAA-induced rat with Silymarin 100 ㎎/㎏ body weight rat, SCL; TAA-induced rat with Spatholobi Caulis 100 ㎎/㎏ body weight rat, SCH TAA-induced rat with Spatholobi Caulis 200 ㎎/㎏ body weight rat. All data are expressed means ± SD (n=8). Significance: ^#p < 0.05, ^###p < 0.001 vs. the normal group, ^*p < 0.05, ^**p < 0.01 vs. the control group.
그림 Fig. 6. Expressions NADPH oxidase proteins in liver. (A): NADPH oxidase 2 (NOX2); (B); NADPH oxidase 2 (NOX2); (C): p47^phox. Normal; nomarl rat, Control; TAA-induced rat, S; TAA-induced rat with Silymarin 100 ㎎/㎏ body weight rat, SCL; TAA-induced rat with Spatholobi Caulis 100 ㎎/㎏ body weight rat, SCH TAA-induced rat with Spatholobi Caulis 200 ㎎/㎏ body weight rat. All data are expressed means ± SD (n=8). Significance: ^#p < 0.05, ^###p < 0.001 vs. the normal group, ^*p < 0.05, ^**p < 0.01 vs. the control group.
그림 Fig. 7. Expressions anti-oxidant proteins in liver. (A): heme oxygenase-1 (HO-1); (B): super oxide dismutase (SOD); (C): Catalase; (D): glutathione peroxidase-1/2 (GPx-1/2). Normal; nomarl rat, Control; TAA-induced rat, S; TAA-induced rat with Silymarin 100 ㎎/㎏ body weight rat, SCL; TAA-induced rat with Spatholobi Caulis 100 ㎎/㎏ body weight rat, SCH TAA-induced rat with Spatholobi Caulis 200 ㎎/㎏ body weight rat. All data are expressed means ± SD (n=8). Significance: ^#p < 0.05, ^##p < 0.01, ^###p < 0.001 vs. the normal group, ^*p < 0.05, ^**p < 0.01 vs. the control group.
그림 Fig. 8. Expression inflammation-related proteins in liver. (A): phosphorylation inhibitor of nuclear factor kappa Ba (p-IkBa); (B): nuclear factor-kappa B p65 (NF-kBp65). Normal; nomarl rat, Control; TAA-induced rat, S; TAA-induced rat with Silymarin 100 ㎎/㎏ body weight rat, SCL; TAA-induced rat with Spatholobi Caulis 100 ㎎/㎏ body weight rat, SCH TAA-induced rat with Spatholobi Caulis 200 ㎎/㎏ body weight rat. All data are expressed means ± SD (n=8). Significance: ^#p <0.05, ^###p <0.001 vs. the normal group, ^*p < 0.05, ^**p < 0.01 vs. the control group.
그림 Fig. 9. Expression inflammation-related proteins in liver. (A): tumor necrosis factor-α (TNF-α); (B): interleukin-6 (IL-6); (C): interleukin-1β (IL-1β). Normal; nomarl rat, Control; TAA-induced rat, S; TAA-induced rat with Silymarin 100 ㎎/㎏ body weight rat, SCL; TAA-induced rat with Spatholobi Caulis 100 ㎎/㎏ body weight rat, SCH TAA-induced rat with Spatholobi Caulis 200 ㎎/㎏ body weight rat. All data are expressed means ± SD (n=8). Significance: ^#p < 0.05, ^##p < 0.01 ^###p < 0.001 vs. the normal group, ^*p < 0.05, ^**p < 0.01 vs. the control group.

AI 본문요약
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문제 정의

본 연구는 TAA로 유발한 급성 간 손상 동물모델에서 鷄血藤 추출물의 간 보호효과를 분석하여 다음과 같은 결론을 얻었다.
본 연구는 鷄血藤 추출물이 Thioacetamide (TAA)로 유발된 급성 간 손상 모델에서 간 보호에 대해 연구하였고, 유의성 있는 결과를 나타내었기에 보고하는 바이다.
이에 본 연구에서는 급성 간손상을 유도 하기 위해 TAA를 6주령의 SD-rat 수컷을 3일간 200 ㎎/㎏/day로 복강투여하여 급성 간 손상을 유발하였으며, 鷄血藤 추출물을 TAA와 함께 3일간 경구투여하였다. 간 보호효과를 증명하기 위해 부검 후 얻은 혈청과 간 분석, MDA 측정, 산화스트레스, 항산화, 염증관련 인자 및 조직학적 변화를 관찰하였다.

제안 방법

5. SCH 투여군은 TAA에 의해 유도된 과도한 간 손상 병변을 개선시켰다.
Glutamic oxaloacetic transaminase (GOT)와 glutamic pyruvic transaminase (GPT)는 assay kit (asanpharm Co., Ltd, Seoul, Korea)로 측정하였다.
In vitro의 수치는 mean ± SEM로 표시하였고, in vivo의수치는 mean ± SD로 표시하였다. SPSS program for windows version 25 (SPSS Inc.
block을 제작한다. Microtome으로 5-μm 두께의 조직 절편을 제작하여 hematoxylin & eosin (H&E) 염색을시행한 뒤, xylene clearing을 거쳐 permount로 처리한 후, 광학현미경 (DSCHX50V, Sony, Tokyo, Japan)를 이용하여 촬영하였다.
. 鷄血藤의 총 분량 300 g 에 10배수인 증류수 3000 mL를 가해 열탕 추출기에서 2시간 추출하여 얻은 추출액을 여과한 후, 감압 추출장치 (N-1100, Eyela, Japan)로 농축하였다. 동결 건조기 (FreeZone 1, Labconco, France)를 이용해 완전히 건조시켜 鷄血藤 추출물 (SC)은 18.
이에 본 연구에서는 급성 간손상을 유도 하기 위해 TAA를 6주령의 SD-rat 수컷을 3일간 200 ㎎/㎏/day로 복강투여하여 급성 간 손상을 유발하였으며, 鷄血藤 추출물을 TAA와 함께 3일간 경구투여하였다. 간 보호효과를 증명하기 위해 부검 후 얻은 혈청과 간 분석, MDA 측정, 산화스트레스, 항산화, 염증관련 인자 및 조직학적 변화를 관찰하였다.
간 조직 세포질을 얻기 위해 100 mM Tris-HCl (pH 7.4), 5 mM Tris–HCl (pH 7.5), 2 mM MgCl₂, 15 mM CaCl2, 1.5 M sucrose, 0.1 M DTT, protease inhibitor cocktail을 첨가한 buffer A를 넣고 tissue grinder (BioSpec Product, Oklahoma, USA)로 분쇄 후, 10% NP-40 용액을 첨가하였다. ice 위에서 20분간 방치 시킨 후, 12,000 rpm으로 2분간 원심분리하여 세포질을 포함하고 있는 상층액을 분리하였다.
간 조직에서 western blot을 실행하여 산화적 스트레스인 자인 NOX2, NOX4 및 p47phox의 발현을 확인하였다. NOX2는 정상군 (1.
간 조직에서 western blot을 실행하여 염증성 매개인자인 p-IkBa와 NF-kBp65의 발현을 확인하였다. 그 결과, p-IkBa 는 정상군 (1.
간 조직에서 western blot을 실행하여 염증성사이토카인인 TNF-α, IL-6 및 IL-1β의 발현을 확인하였다. 그 결과, TNF-α의 발현량은 정상군 (1.
간 조직에서 western blot을 실행하여 항산화 관련 단백질 인 HO-1, SOD, Catalase 및 GPx-1/2의 발현을 확인하였다. HO-1은 정상군 (1.
준비된 membrane에 각각의 1차 antibody (1:1000)를 처리하여 4℃에서 overnight 시킨 다음, PBS-T로 6분마다 5회 세척하고, 각각 처리된 1차 항체 (1:1000)에 사용되는 2차 항체 (1:3000)를 사용하여 상온에서 1시간 30분 반응시킨 후, PBS-T로 6분마다 5회 세척하였다. 그리고 enhanced chemiluminescence (ECL)용액에 노출시킨후, Sensi-Q 2000 Chemidoc (Lugen Sci Co. Ltd, Seoul, Korea)에 감광시켜 단백질 발현을 확인한 다음, 해당 band를 ATTO Densitograph Software (ATTO Corporation, Tokyo, Japan)를 사용하여 band를 정량하였다. 각각의 단백질 수준은 정상군의 단백질 수준으로 나눈 후 상대적 비로 나타내었다 (represented as 1).
사용하였다. 모든 쥐는 일정한 시간에 1회/1일 체중을 측정하였다. 정상군을 제외한 나머지 군은 1회/1일 3일 동안 TAA 200 ㎎/㎏ body weight를 복강 투여하였으며, 약물처리 군은 해당 약물을 3일간 경구 투여하였다²⁴⁾.
시료 10 µL에 증류수 790 µL, Folin-Ciocalteu’s phenolreagent 50 µL를 혼합하여, 실온에서 1분간 반응시킨 후, 150 µL의 20% sodium carbonate를 첨가하였다. 실온에서 2시간 반응시킨 후, UV 분광광도계 (Infinite M200, Tecan, Salzburg, Austria)를 이용하여 765 ㎚에서 흡광도를 측정한다. 표준물질로 gallic acid를 사용하여 표준 검량 선을 구하고, 시료의 총 폴리페놀 함량을 산출하였다.
실험군은 정상군 (Normal), 대조군 (Control), 실리마린 추출물을 100 ㎎/㎏ body weight 로 투여한 군 (S), 鷄血藤 추출물을 100 ㎎/㎏ body weight로 투여한 군 (SCL), 鷄血藤 추출물을 200 ㎎/㎏ body weight로 투여한 군 (SCH)으로 각군별로 8마리씩 5군으로 나눈 뒤, 1주일간 적응시킨 다음 실험에 사용하였다. 모든 쥐는 일정한 시간에 1회/1일 체중을 측정하였다.
모든 쥐는 일정한 시간에 1회/1일 체중을 측정하였다. 정상군을 제외한 나머지 군은 1회/1일 3일 동안 TAA 200 ㎎/㎏ body weight를 복강 투여하였으며, 약물처리 군은 해당 약물을 3일간 경구 투여하였다²⁴⁾. 실험종료 당일 마취 후, 복대정맥에서 혈액을 채취하여 4, 000 rpm, 4℃에서 10분간 원심 분리 후 –80 ℃에 보관하였으며, 실험동물의 간 조직은 적출하여 –80 ℃에 보관하였다.
간 조직 세포질의 NOX2, NOX4, p47^phox, HO-1, SOD, Catalase, GPx-1/2, IκBα, p-IκBα, TNF-α, IL-6, IL-1β 및 β-actin과 핵의 NF-κBp65와 histone 단백질 발현을 측정하기 위하여, 10 ㎍의 단백질을 8 ~ 15% SDS-polyacrylamide gel을 이용하여 전기영동 후, acrylamide gel을 nitrocellulose membrane으로 이동시켰다. 준비된 membrane에 각각의 1차 antibody (1:1000)를 처리하여 4℃에서 overnight 시킨 다음, PBS-T로 6분마다 5회 세척하고, 각각 처리된 1차 항체 (1:1000)에 사용되는 2차 항체 (1:3000)를 사용하여 상온에서 1시간 30분 반응시킨 후, PBS-T로 6분마다 5회 세척하였다. 그리고 enhanced chemiluminescence (ECL)용액에 노출시킨후, Sensi-Q 2000 Chemidoc (Lugen Sci Co.
실온에서 2시간 반응시킨 후, UV 분광광도계 (Infinite M200, Tecan, Salzburg, Austria)를 이용하여 765 ㎚에서 흡광도를 측정한다. 표준물질로 gallic acid를 사용하여 표준 검량 선을 구하고, 시료의 총 폴리페놀 함량을 산출하였다.
diethylene glycol 1 mL와 시료 추출물 100 µL, 1 N NaOH 10 µL를 혼합하여 37℃에서 1시간 반응 시킨 후, 420 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 표준물질로는 naringin을 사용하였으며, 표준 검량선을 구하고, 추출물의 총 플라보노이드 함량을 산출하였다.

대상 데이터

, LTD (Siheung, Korea) 에서구입하였으며, ECL Western Blotting Detection Reagents 는 GE Healthcare (Arlington Height, IL, USA)로부터 구입하여 사용하였다. Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 2 (NOX2), nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4 (NOX4), p47^phox, inhibitor of nuclear factor κBα (IκBα), phospho-IκBα (p-IκBα), nuclear factor-κBp65 (NF-κBp65), tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-6 (IL-6), interleukin-1β (IL-1β), hemeoxygenase-1 (HO-1), SOD, GPx-1/2, Catalase, β-actin, histone와 2차 항체인 rabbit lgG antibody, mouse lgG antibody는 GeneTex, Inc. (San Antonio, TX, USA)에서 구입하여 사용하였다. 단백질 정량을 위한 bicinchoninic acid (BCA) protein assay kit는 Thermo Scientific (Rockford, IL, USA)에서 구입하였으며, protease inhibitor mixture, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) 는 Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
Louis, MO, USA)에서 구입하여 사용하였다. Phosphoric acid는 Duksan company (Ansan, Korea), n-Butanole daejung CHEMICALS & METALS CO., LTD (Siheung, Korea) 에서구입하였으며, ECL Western Blotting Detection Reagents 는 GE Healthcare (Arlington Height, IL, USA)로부터 구입하여 사용하였다. Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 2 (NOX2), nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4 (NOX4), p47^phox, inhibitor of nuclear factor κBα (IκBα), phospho-IκBα (p-IκBα), nuclear factor-κBp65 (NF-κBp65), tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-6 (IL-6), interleukin-1β (IL-1β), hemeoxygenase-1 (HO-1), SOD, GPx-1/2, Catalase, β-actin, histone와 2차 항체인 rabbit lgG antibody, mouse lgG antibody는 GeneTex, Inc.
(San Antonio, TX, USA)에서 구입하여 사용하였다. 단백질 정량을 위한 bicinchoninic acid (BCA) protein assay kit는 Thermo Scientific (Rockford, IL, USA)에서 구입하였으며, protease inhibitor mixture, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) 는 Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (Osaka, Japan) 에서 구입하였다.
본 실험에 사용된 2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), 7 mM 2, 2'-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) (ABTS), gallic acid, Folin-Ciocalteu'sphenol reagent, diethylene glycol, sodium hydroxide, naringin, 1, 1, 3, 3-tetramethoxypropane, 2-thiobarbituric acid, thioacetamide (TAA), potassium persulfate, phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)는 Sigma Aldrich Co., Ltd. (St. Louis, MO, USA)에서 구입하여 사용하였다. Phosphoric acid는 Duksan company (Ansan, Korea), n-Butanole daejung CHEMICALS & METALS CO.
본 연구에 사용한 鷄血藤은 옹기한약국 (대구, 한국) 에서구입한 것을 대구한의대학교 한의과대학 노성수 교수가 대한약전 외 한약(생약)규격집에 맞추어 관능검사 후 약전규격에 적합한 것만을 정선하여 사용하였다²³⁾. 鷄血藤의 총 분량 300 g 에 10배수인 증류수 3000 mL를 가해 열탕 추출기에서 2시간 추출하여 얻은 추출액을 여과한 후, 감압 추출장치 (N-1100, Eyela, Japan)로 농축하였다.
생후 6주령의 Sprague–Dawley (SD) 체중 200 g 내외의 흰쥐 (대한바이오링크, 충북)를 구매하여, 물과 고형사료 (조단백질 18% 이상, 조지방 5.0% 이상, 조섬유 5.0% 이하, 조회분 8.0% 이하, 칼슘 1.0% 이상, 인 0.85% 이상, 칼륨 0.55% 이상, 나트륨 0.25% 이상, 마그네슘 0.15% 이상, NIH-41, Zeigler Bros, Inc., Gardners, PA, USA)를 충분히 공급하고, 1주간 실험실 환경에 적응시킨 후, 실험에 사용하였다. 동물사육실의 조건은 conventional system으로 온도 22 ± 2 ℃, 습도 50 ± 5%, 명암주기는 12시간 주기로 조절하였다.

데이터처리

mean ± SD로 표시하였다. SPSS program for windows version 25 (SPSS Inc., Chicago, IL USA)로 one-way analysis of variance (ANOVA)검정을 실시하였으며, 각 자료의 통계적 유의성은 least significant difference (LSD) method로 검증하였고, 정상군과 대조군, 대조군과 약물투여군 사이에 유의성은 p-value < 0.05 일 경우 유의성이 있다고 판정하였다.

이론/모형

2-thiobarbituric acid-reactive substances (TBARS) 물질은 Mihara와 Uchiyama²⁹⁾의 방법으로 측정하였으며, 표준물질로는 1, 1, 3, 3, -tetramethoxypropane를 사용하였다. 시료와 1% phosphoric acid을 혼합해 0.
鷄血藤 추출물의 항산화 활성을 평가하기 위해 DPPH 및 ABTS free radical 소거능 방법을 사용하여 측정하였으며, 표준물질로는 L-ascorbic acid을 사용하였다. 鷄血藤 추출물의 항산화 활성을 측정한 결과, DPPH free radical 소거능은 IC50 = 3.
총 폴리페놀 함량은 Folin-Denis법²⁷⁾에 의해 측정하였다. 시료 10 µL에 증류수 790 µL, Folin-Ciocalteu’s phenolreagent 50 µL를 혼합하여, 실온에서 1분간 반응시킨 후, 150 µL의 20% sodium carbonate를 첨가하였다.
총 플라보노이드 함량은 Lister등²⁸⁾의 방법에 의해 구하였다. diethylene glycol 1 mL와 시료 추출물 100 µL, 1 N NaOH 10 µL를 혼합하여 37℃에서 1시간 반응 시킨 후, 420 ㎚에서 흡광도를 측정하였다.
추출물의 ABTS free radical 소거능은 Re 등의 방법을 참고하여 측정하였다²⁶⁾. 7 mM ABTS용액과 2.
추출물의 DPPH free radical 소거능 측정은 Blosis법25)을참고하여 측정하였다. 60 μM DPPH용액 100 µL와 추출물을 농도별로 희석한 용액 100 µL를 혼합하여 30분간 암소 상태로 방치 후 540 ㎚에서 측정하였다.
혈중 암모니아 측정은 ammonia assay kit (Abcam,Cambridge, UK)의 프로토콜에 따라 측정하였다.

성능/효과

1. DPPH와 ABTS free radical 소거능을 통해 鷄血藤 추출물의 측정 결과, DPPH의 IC₅₀ 값은 3.27 ± 0.06 ㎍/㎖ 이며 ABTS IC₅₀ 값은 7.85 ± 0.07 ㎍/㎖로 뛰어난 소거 능을 나타냈다.
10. 염증성 사이토카인인 TNF-α, IL-6 및 IL-1β의 발현을 측정한 결과, TNF-α는 鷄血藤 투여군에서 모 두유 의성 있게 감소하였으나, IL-6와 IL-1β에서는 SCH 투여군에서 유의성 있게 감소하였다.
2. 鷄血藤 추출물의 총 폴리페놀과 플라보노이드 함량 측정 결과, 총 폴리페놀 함량은 266.10 ± 0.9 GAE/g이며 총 플라보노이드 함량은 32.89 ± 0.47 NE/g로 나타냈다.
3. 간 손상 지표인 GOT와 GPT의 측정 결과, GOT는 감소하는 경향은 보였으나 유의성이 없었고 GPT는 SCH 투여군에서만 유의성 있게 감소하였다.
4. 鷄血藤 투여군은 TAA로 유발된 급성 간손상 모델에서 혈중의 암모니아를 유의성 있게 감소시켰다.
6. 혈청과 조직에서 MDA측정 결과, 혈청에서 SCH 투여군은 유의하게 감소하였으며, 조직에서는 鷄血藤 투여군 모두 유의성 있게 감소하였다.
7. 산화적 스트레스 관련된 인자인 NOX2, NOX4 및 p47^phox 의 발현을 측정한 결과, NOX2와 NOX4는 鷄血藤 투여군에서 모두 유의하게 감소하였으나, p47^phox는 SCH 투여군에서 유의성 있게 감소하였다.
8. 鷄血藤 투여군은 항산화 관련된 인자인 HO-1, SOD, Catalase 및 GPx-1/2의 발현을 측정한 결과, HO-1, SOD 및 Catalasee 유의하게 증가되었지만 GPx-1/2 은 증가하는 경향만 나타났다.
9. 염증성 매개인자인 NF-kBp65와 p-IkBa의 발현을 측정한 결과, NF-kBp65은 SCH 투여군에서 유의하게 감소하였고, p-IkBa는 鷄血藤 투여군에서 모두 유의성 있게 감소하였다.
01) 에서는 유의하게 증가하였다. Catalase의 단백질 발현은 정상 군 (1.00 ± 0.06)에 비해 대조군 (0.65 ± 0.04; p < 0.001)은 유의성 있게 감소하였으며, 대조군에 비하여 SCL 투여군 (0.86 ± 0.06; p < 0.05) 및 SCH 투여군 (0.94 ± 0.06; p < 0.01)은 유의하게 증가하였다. GPx-1/2의 단백질 발현은 정상군 (1.
22 IU/L)투여군은 감소하는 경향을 나타냈다. GPT에서는 정상군 (13.69 ± 0.51 IU/L)에 비해 대조군 (40.17 ± 2.54 IU/L; p<0.001)은 유의성 있게 증가 하였고, 대조군에 비하여 SCH (32.87 ± 1.73 IU/L; p<0.05)투여군은 유의하게 감소하였다(Fig. 2).
01)은 유의하게 증가하였다. GPx-1/2의 단백질 발현은 정상군 (1.00 ± 0.10)에 비해 대조군 (0.74 ± 0.07; p < 0.05)은 유의성 있게 감소하였으며, SC를 투여한 모든 군은 대조군에 비해 증가하는 경향을 나타냈다 (Fig. 7).
간 조직에서 western blot을 실행하여 항산화 관련 단백질 인 HO-1, SOD, Catalase 및 GPx-1/2의 발현을 확인하였다. HO-1은 정상군 (1.00 ± 0.05)에 비해 대조군 (0.64 ± 0.01;p < 0.01)은 유의하게 감소하였으며, 대조군에 비하여 SCL 투 여군 (0.84 ± 0.08; p < 0.05)과 SCH 투여군 (0.90 ± 0.09; p < 0.0)은 유의하게 증가하였다. SOD의 단백질 발현은 정상군 (1.
스트레스와 과산화 정도를 파악할 수 있다. MDA 수치를 혈청과 조직에서 측정 결과, 혈액에서 SCH 투여군에서는 대조군에 비해 유의성 있게 감소하였으며, 조직에서는 鷄血藤 투여군이 대조군 대비 유의성 있게 감소하였다.
01)은 유의하게 감소하였다. NF-kBp65의 단백질 발현은 정상군 (1.00 ± 0.05)에 비하여 대조군 (1.23 ± 0.03; p<0.05)은 유의하게 증가하였고, 대조군에 비하여 SCH 투여군 (0.93 ± 0.05; p<0.01)은 유의하게 감소하였다(Fig. 8).
0)은 유의하게 증가하였다. SOD의 단백질 발현은 정상군 (1.00 ± 0.07)에 비하여 대조군 (0.58 ± 0.04; p < 0.01)은 유의성 있게 감소하였고, 대조군에 비하여 SCL 투여군 (0.91 ± 0.09; p < 0.01)과 SCH 투여군 (0.90 ± 0.10; p < 0.01) 에서는 유의하게 증가하였다. Catalase의 단백질 발현은 정상 군 (1.
01)은 대조군에 비해 모두 유의성 있게 감소하였다. p47phox의 단백질 발현은 정상군 (1.00 ± 0.05)에 비하여 대조군 (1.21 ± 0.03; p < 0.05)은 유의성 있게 증가하였고, 대조군에 비해 SCH 투여군 (0.95 ± 0.04; p < 0.01)에서 유의하게 감소하였다(Fig. 6).
鷄血藤 추출물의 총 폴리페놀와 플라보노이드 함량을 측정 결과, 총 폴리페놀 함량은 266.10 ± 0.99 ㎎ gallic acid equivalents (GAE)/g이며, 총 플라보노이드 함량은 32.89 ± 0.47 ㎎ naringin equivalent (NE)/g으로 뛰어난 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량을 나타냈다 (Table 1).
추출물의 항산화 활성을 측정한 결과, DPPH free radical 소거능은 IC50 = 3.27 ± 0.06 ㎍/㎖으로 나타났으며, ABTS free radical 소거능은 IC₅₀ = 7.85 ± 0.07 ㎍/㎖으로 나타났다 (Fig. 1).
간 손상 지표로 사용하는 GOT와 GPT에서 측정한 결과, GOT에서는 대조군에 비해 鷄血藤 투여군에서 감소하는 경향은 보였으나, 유의성이 나타나지 않았다. GPT에서는 대조군에 비해 SCH 투여군에서 유의하게 감소하였다.
간 조직에 H&E 염색을 한 후, 광학 현미경을 이용하여 관찰한 결과, 정상군에서는 간 손상 및 병변이 관찰되지 않았지만, 대조군에서는 TAA에 의한 간 손상 병변 정도가 늘어난 것을 확인하였으며, SCH 투여군에서는 대조군에 비하여 간 손상 병변 정도가 개선되는 모습이 나타났다(Fig. 4).
간 조직을 이용하여 산화적 스트레스 관련 인자인 NOX2, NOX4 및 p47^phox의 발현을 측정결과, NOX2와 NOX4은 鷄血藤 투여군에서 대조군 대비 유의성 있게 감소하였으나, p47^phox 는 SCH 투여군에서 대조군 대비 유의성 있게 감소하였다.
간 조직을 이용하여 염증 반응의 전사인자인 p-IkBa와 NF-kBp65의 발현을 측정한 결과, p-IkBae 鷄血藤 투여군에서 모두 유의성 있게 감소하였으며, NF-kBp65은 SCH 투여군에서 대조군 대비 유의성 있게 감소하였다. 염증성 사이토카인인 TNF-α, IL-6 및 IL-1β의 발현을 측정한 결과, TNF-α는 鷄血藤 투여군에서 대조군 대비 유의성 있게 감소하였으나, IL-6와 IL-1β에서는 SCH 투여군에서만 대조군 대비 유의성 있게 감소하였다.
간 조직을 이용하여 항산화 관련된 단백질인 HO-1, SOD, Catalase 및 GPx-1/2의 발현을 측정 결과, HO-1, SOD 및 Catalase는 대조군 대비 鷄血藤 투여군에서 모두 유의성 있게 증가하였다.
TNF-α, IL-6 및 IL-1β의 발현을 확인하였다. 그 결과, TNF-α의 발현량은 정상군 (1.00 ± 0.04) 대비 대조군 (1.40 ± 0.09; p<0.01)에서 유의하게 증가하였으며, 대조군에 비하여 SCL 투여군 (1.12 ± 0.08; p<0.05)과 SCH 투여군 (1.05 ± 0.11; p<0.01)은 유의하게 감소하였다. Ⅱ.
NF-kBp65의 발현을 확인하였다. 그 결과, p-IkBa 는 정상군 (1.00 ± 0.10)에 비하여 대조군 (1.59 ± 0.04; p<0.001)은 유의하게 증가하였으며, 대조군에 비하여 SCL 투여군 (1.26 ± 0.07; p<0.05)과 SCH 투여군 (1.17 ± 0.11; p<0.01)은 유의하게 감소하였다. NF-kBp65의 단백질 발현은 정상군 (1.
따라서 鷄血藤 추출물은 급성 간 손상 시 산화적 스트레스와 관련된 인자인 NOX2, NOX4 및 p47^phox의 발현을 감소하며, 항산화 관련된 인자인 HO-1, SOD, Catalase 및 GPx-1/2의 발현을 증가시켜 높은 항산화능으로 p-IkBa, NF-kBp65, TNF-α, IL-6 및 IL-1β 염증 관련 인자의 발현을 억제시켜급성 간 손상에 보호 효과가 있다고 사료된다.
. 따라서 혈중 암모니아 수치를 측정 결과, 鷄血藤 투여군에서 모두 대조군에 비해 유의성 있게 감소하였다.
대조군 대비 유의성 있게 감소하였다. 염증성 사이토카인인 TNF-α, IL-6 및 IL-1β의 발현을 측정한 결과, TNF-α는 鷄血藤 투여군에서 대조군 대비 유의성 있게 감소하였으나, IL-6와 IL-1β에서는 SCH 투여군에서만 대조군 대비 유의성 있게 감소하였다.
이는 鷄血藤 추출물은 뛰어난 항산화능으로 TAA로 유발한 급성 간손상 모델에서 산화적 스트레스, 염증성매개인자 및 염증성 사이토카인을 억제하고, 항산화에서는 증가하는 경향이 나타나며, 간 손상을 보호 효과가 있다고 판단된다.
조직병리학적 분석 결과, SCH 투여군에서는 TAA에 의해 손상된 간세포를 보호함으로서 간보호 효과를 발휘하는 것으로 판단된다.
05)투여군은 유의하게 감소하였다. 조직에서 MDA 측정 결과, 정상군 (7.21 ± 0.39 nmol/㎎)에 비해 대조군 (9.68 ± 1.08 nmol/㎎; p<0.05)은 유의성 있게 증가하였으며, 대조군에 비하여 SCL 투여군 (7.33 ± 0.38 nmol/ ㎎; p<0.05)과 SCH 투여군 (6.57 ± 0.23 nmol/㎎; p< 0.01)에서 둘 다 대조군에 비해 유의성 있게 감소하였다(Fig. 5).
혈중 ammonia 농도 측정 결과, 정상군 (8.22 ± 0.21 nmol/ µL)에 비하여 대조군 (12.29 ± 0.55 nmol/µL)은 유의성 있게 증가하였으며 (p<0.001), 대조군에 비하여 SCL 투여군 (10.11 ± 0.30 nmol/µL; p<0.01)와 SCH 투여군 (9.68 ± 0.58 nmol/µL; p<0.001)에서 유의하게 감소하였다 (Fig. 3).
혈청 내에서 간 독성 지표인 GOT와 GPT 측정 결과, GOT 에서 정상군 (43.65 ± 2.06 IU/L)에 비해 대조군 (75.90 ± 2.83 IU/L; p<0.001)은 유의성 있게 증가 하였고, 대조군에 비하여 SCL (70.16 ± 3.78 IU/L)와 SCH (70.63 ± 2.22 IU/L)투여군은 감소하는 경향을 나타냈다. GPT에서는 정상군 (13.
혈청에서 MDA 측정 결과, 정상군 (0.95 ± 0.11 nmol/㎖) 에 비해 대조군 (2.72 ± 0.08 nmol/㎖; p<0.001)은 유의성 있게 증가하였으며, 대조군에 비하여 SCH (2.18 ± 0.11 nmol/㎖; p<0.05)투여군은 유의하게 감소하였다. 조직에서 MDA 측정 결과, 정상군 (7.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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