[논문]RAW 264.7 대식세포에서 MAPKs 신호 전달 경로의 활성화를 통한 침향의 면역 자극 활성

지선영; 황보현; 이혜숙; 구영태; 김진수; 이기원; 노동진; 최영현

doi:10.5352/jls.2021.31.8.745

RAW 264.7 대식세포에서 MAPKs 신호 전달 경로의 활성화를 통한 침향의 면역 자극 활성
Immunostimulatory Activity of Agarwood through Activation of MAPK Signaling Pathway in RAW 264.7 Murine Macrophages 원문보기

생명과학회지 = Journal of life science, v.31 no.8, 2021년, pp.745 - 754

지선영 (동의대학교 항노화연구소) , 황보현 (동의대학교 항노화연구소) , 이혜숙 (동의대학교 항노화연구소) , 구영태 (광동제약(주) 천연물융합연구개발본부) , 김진수 (광동제약(주) 천연물융합연구개발본부) , 이기원 (광동제약(주) 천연물융합연구개발본부) , 노동진 (광동제약(주) 천연물융합연구개발본부) , 최영현 (동의대학교 항노화연구소)

초록
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면역 기능의 저하는 각종 감염에 대한 저항력의 부족을 초래하여 다양한 질병 유발에 기여하며, 면역 억제제의 부작용을 감소시키거나 면역력을 높이기 위해 면역 조절 생체 물질이 사용되고 있다. 침향은 침향나무의 방향족수지 부분이며 전통적으로 다양한 질병을 치료하기 위한 목적으로 사용되어왔다. 비록 선행 연구들에 의하여 침향이 신체의 면역력을 향상시킬 수 있다는 사실이 밝혀졌지만 이에 대한 근거는 여전히 부족한 실정이다. 본 연구에서는 인도네시아에서 구입한 A. malaccensisd 침향 메탄올 추출물의 면역 자극 효과를 RAW 264.7 대식세포 모델에서 평가하였다. 본 연구의 결과에 의하면 침향 추출물은 세포 독성이 없는 조건에서 식작용을 현저하게 향상시켰으며다. 또한 침향 추출물 처리된 RAW 264.7 세포는 활성화된 대식세포의 전형적인 형태를 보였으며, iNOS 발현 증가에 따른 NO 생성의 생성을 크게 증가시켰다. 아울러 TNF-α, IL-1β 및 IL-6과 같은 cytokine의 발현과 분비를 증가시켰으며, MAPKs 신호 전달 경로를 활성화시켰다. 따라서 본 연구의 결과는 고대 서적을 기반으로 침향의 효과를 확인하는 데 중요한 의미가 있으며, 침향이 잠재적인 면역 강화 효과가 있다는 근거를 제시하는 것이다.

Abstract ▼ AI-Helper

Deterioration of the immune function weakens the body's resistance to various infections, leading to a series of diseases. Immunomodulatory biomaterials have been used to reduce the side effects of immunosuppressants or to enhance immunity. Agarwood is the aromatic resinous portion of Aquilaria trees that has been traditionally used as a medicinal herb for the treatment of various diseases. Although previous studies have shown that agarwood can improve the body's immunity, evidence for this claim is still lacking. In this study, the immune-enhancing effects of the agarwood methanol extracts of Aquilaria malaccensis Lamk were evaluated in a RAW 264.7 macrophage model. Based on the results, the agarwood extracts markedly enhanced phagocytosis in the absence of cytotoxicity. The agarwood extract-treated RAW 264.7 cells exhibited the typical morphology of activated macrophages, which are spindle-shaped with elongated filopodia. Agarwood extract also significantly increased the production of nitric oxide (NO), which is associated with the increased expression of inducible NO synthase. Moreover, the secretion and expression levels of cytokines, such as tumor necrosis factor-α and interleukin (IL)-1β and IL-6, were increased by agarwood treatment. Notably, these are also associated with a mitogen-activated protein kinase signaling pathway. Taken together, our findings provide scientific evidence that agarwood has potential immune-enhancing effects in vitro.

주제어

표/그림 (5)

그림 Fig. 1. Effects of agarwood extracts on the morphology and cell viability in RAW 264.7 macrophages. RAW 264.7 cells were treated with various concentrations of agarwood methanol extracts (IDNL and IDNH), red ginseng ethanol extract (RG) and LPS for 24 hr. (A) The representative morphological changes of cells were taken using an inverted microscope (x50 magnification). Filopodia portions are indicated by arrows. (B) Cell viability was assessed by an MTT assay. Data are expressed as the mean ± SD (*p<0.05, **p<0.01 and ***p<0.001 compared with the untreated cells). IDNL and IDNH are methanol extracts of agarwood taken from A. malaccensis Lamk, and VNL and VNH are methanol extracts of agarwood taken from A. crassna Pierre ex Lecomte.
그림 Fig. 2. Effect of agarwood extracts on the phagocytotic activity in RAW 264.7 macrophages. RAW 264.7 cells were treated with the indicated concentration of IDNL, IDNH, RG and LPS for 24 hr. (A and B) Representative flow cytometry histograms of phagocytosis using fluorescent FITC-IgG latex beads are presented. (C) The results of quantitative analysis of phagocytosis using fluorescent FITC-IgG latex beads are shown. Data are expressed as the mean ± SD (*p<0.05 and ***p<0.001 compared with the untreated cells). (D) The phagocytic cells were visualized by fluorescence microscopy. The nuclei were stained with DAPI (blue).
그림 Fig. 3. Effect of agarwood extracts on the secretion of NO and expression of iNOS and COX-2 in RAW 264.7 macrophages. RAW 264.7 cells were treated with the indicated concentration of IDNL, IDNH, VNL, VNH, RG and LPS for 24 hr. (A) The amounts of NO in the cell supernatant were measured using Griess reagent. (B) The protein expression of M1 macrophage markers including iNOS and COX-2 was investigated by Western blot analysis. Actin was used as an internal control. (C) The expression of each protein was indicated as a fold change relative to the control. (A and C) Data are expressed as the mean ± SD (*p<0.05, **p<0.01 and ***p<0.001 compared with the untreated cells).
그림 Fig. 4. Effect of agarwood extracts on the secretion and expression of pro-inflammatory cytokines in RAW 264.7 macrophages. RAW 264.7 cells were treated with the indicated concentration of IDNL, IDNH, RG and LPS for 24 hr. (A-C) The levels of TNF-α (A), IL-1β (B) and IL-6 (C) in the cell supernatant were measured with ELISA kits. (D) The protein expression of TNF-α, IL-1β and IL-6 was investigated by Western blot analysis. Actin was used as an internal control. (E-F) The expression of each protein was indicated as a fold change relative to the control. (A-C and D-G) Data are expressed as the mean ± SD (*p<0.05, **p<0.01 and ***p<0.001 compared with the untreated cells).
그림 Fig. 5. Activation of MAPKs signaling pathway by agarwood extracts (IDNL and IDNH) in RAW 264.7 macrophages. RAW 264.7 cells were treated with 10 μg/ml of IDNL and IDNH for the indicated times. (A and C) Total cell lysates were examined by Western blotting for the phosphorylation of ERK, JNK and p38. (B and D) Bar graphs represent the relative band density of the phosphorylated/unphosphorylated protein ratio in Western blot analysis. Data are expressed as the mean ± SD ( p<0.05, **p<0.01 and ***p<0.001 compared with the untreated cells).

AI 본문요약
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문제 정의

본 연구에서는 다양한 약리적 효능을 가진다고 알려진 침향의 면역 증진 효과를 조사하였다. 이를 위하여 인도네시아에서 구입한 각각 2가지 침향 메탄올 추출물을 사용하였으며, 대조물질로서 홍삼 추출물 및 LPS를 사용하였다.

제안 방법

Fig. 1A의 형태학적 결과를 바탕으로 침향 추출물에 의한 면역 자극 활성 여부의 조사를 위한 조건 설정을 위하여 RAW 264.7 세포의 증식에 미치는 침향 추출물의 영향을 조사하였다. 이를 위하여 동일한 조건에서 배양된 RAW 264.

대상 데이터

본 연구에서는 다양한 약리적 효능을 가진다고 알려진 침향의 면역 증진 효과를 조사하였다. 이를 위하여 인도네시아에서 구입한 각각 2가지 침향 메탄올 추출물을 사용하였으며, 대조물질로서 홍삼 추출물 및 LPS를 사용하였다. 본 연구의 결과에 의하면, RAW 264.

데이터처리

GraphPad Prism® version 5.0 (Graphpad Inc., San Diego, CA, USA)의 one-way ANOVA를 사용하여 통계 분석을 실시하였으며, Tukey's test로 사후 검정하여 p<0.05 값을 유의한 값으로 처리하였다.

이론/모형

MLB00C)의 함량을 각각의 enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kit (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)를 사용하여 제조사가 제시한 방법에 따라 측정하였다.

성능/효과

malaccensis 침향 메탄올 추출물인 IDNL과 IDNH는 25 μg/ml의 처리 농도까지 세포 생존율에 유의적인 영향을 미치지 않았으나, 50 μg/ml 처리 군에서 각각 78%와 70%의 세포 생존율을 나타내어, 대조군대비 유의적인 세포 독성을 보였다
malaccensis 유래 침향이 우수한 분비능을 보였다. 또한 침향 추출물에 의한 면역 증진 효과는 MAPKs 신호 전달계의 활성이 관여하고 있음을 확인하였다. 비록 본 연구의 결과가 침향의 면역 증진 가능성을 보는 줄 수 있는 근거로서 활용이 될 수 있으나, 보다 정확한 기전 연구의 수행을 위한 각 침향 추출물의 생리활성 성분 분석과 in vivo 모델에서의 효능 검증이 이루어져야 할 것이다.
이를 위하여 인도네시아에서 구입한 각각 2가지 침향 메탄올 추출물을 사용하였으며, 대조물질로서 홍삼 추출물 및 LPS를 사용하였다. 본 연구의 결과에 의하면, RAW 264.7 세포에서 2가지 종류의 침향 추출물 모두 세포 독성이 없는 저농도에서 M1 phenotype의 특징인 형태적 변형을 유도하였고 식작용 활성을 증가시켰으며, 이러한 효과는 A. malaccensis 유래 침향에서 서로 유사하였다.

후속연구

아울러 본 연구에서 확인된 M1 phenotype 유도에 관련된 유전자들의 발현 변화와 MAPKs 신호계를 중심으로 한 상위 및 하위 신호 전달계의 역할도 규명되어야 할 것이다. 따라서 본 연구 결과는 침향의 추가적인 생리활성을 연구하는 기초 자료로 활용될 것이다.
또한 침향 추출물에 의한 면역 증진 효과는 MAPKs 신호 전달계의 활성이 관여하고 있음을 확인하였다. 비록 본 연구의 결과가 침향의 면역 증진 가능성을 보는 줄 수 있는 근거로서 활용이 될 수 있으나, 보다 정확한 기전 연구의 수행을 위한 각 침향 추출물의 생리활성 성분 분석과 in vivo 모델에서의 효능 검증이 이루어져야 할 것이다. 아울러 본 연구에서 확인된 M1 phenotype 유도에 관련된 유전자들의 발현 변화와 MAPKs 신호계를 중심으로 한 상위 및 하위 신호 전달계의 역할도 규명되어야 할 것이다.
비록 본 연구의 결과가 침향의 면역 증진 가능성을 보는 줄 수 있는 근거로서 활용이 될 수 있으나, 보다 정확한 기전 연구의 수행을 위한 각 침향 추출물의 생리활성 성분 분석과 in vivo 모델에서의 효능 검증이 이루어져야 할 것이다. 아울러 본 연구에서 확인된 M1 phenotype 유도에 관련된 유전자들의 발현 변화와 MAPKs 신호계를 중심으로 한 상위 및 하위 신호 전달계의 역할도 규명되어야 할 것이다. 따라서 본 연구 결과는 침향의 추가적인 생리활성을 연구하는 기초 자료로 활용될 것이다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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