[논문]당귀수산(當歸鬚散) 주정 추출물이 외상성 창상(外傷性 創傷) 병태모델의 회복능력에 미치는 영향

박지원; 심부용; 김동희

doi:10.6116/kjh.2014.29.5.55.

당귀수산(當歸鬚散) 주정 추출물이 외상성 창상(外傷性創傷) 병태모델의 회복능력에 미치는 영향
The effects of Danggwisusan on restoration ability in wound induced animal models 원문보기

大韓本草學會誌 = The Korea journal of herbology, v.29 no.5, 2014년, pp.55 - 63

박지원 (대전대학교 한의과대학 병리학교실) , 심부용 (대전대학교 한의과대학 병리학교실) , 김동희 (대전대학교 한의과대학 병리학교실)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : The purpose of this study was verification of the restoration ability effect of Danggwisusan extract(DG) in wound induced Rat. Methods : It needed to make a scar(around $2{\times}2cm^2$) on the top of the fascia in the back of the rats and then the rats were divided into 4groups(n=6). Control was not treated at all, where as DG was orally medicated DG, Terra was percutaneously applied Terramycin, and DG + Terra was both orally medicated DG and percutaneously applied Terramycin per day for three weeks. Results : 93% or higher cell viability was observed in all tested groups from 1, 10, $100{\mu}g/m{\ell}$ in RAW 264.7cells. The DG decreased NO and cytokine production activity dose dependently. The production of IL-$1{\beta}$, IL-6 and TNF-${\alpha}$ were decreased by 46%, 46% and 40% in DG treated $100{\mu}g/m{\ell}$. The size of wound was significantly decreasing in DG, Terra, DG + Terra. WBC was significantly reduced in DG and DG + Terra. Monocyte was significantly reduced in DG, Terra and DG + Terra. Neutrophil was also reduced in DG, DG + Terra but not meaningless. The mRNA expression of MMP-1 was significantly reduced in Terra, MMP-2 was significantly reduced in DG, Terra, DG + Terra, and MMP-9 was significantly reduced in DG + Terra. Conclusions : According to the results, we thought that DG showed anti-inflammatory activities on the RAW 264.7cells in mouse macrophage and in adult rat wound. Moreover, the progress of recovery was found visually, heamatologically, genetically and histopathologically. In conclusion, it could be thought that DG has effect on the treating of wound.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.

문제 정의

본 연구는 DG의 외상성 창상의 회복능력에 미치는 효능을 객관적으로 검증하고자 실험을 통하여 다음과 같은 결론을 얻었다.
전반적인 藥性은 平溫無毒하고, 味는 辛苦多甘鹹少하고, 歸經은 血과 관계가 깊은 肝, 心, 脾등에 편중되어 있으며 活血祛瘀, 通經活絡, 理氣止痛 등의 효능이 있어 瘀血로 인한 腫痛을 치료한다고 알려져 있다^11-13). 이에 當歸鬚散이 조직간의 出血과 관련된 병증 및 瘀血性腫痛의 효능이 입증되어, 나아가 外傷性創傷治癒에 대한 효과를 객관적으로 입증하고자 실험에 임하였다.
이에 저자는 當歸鬚散이 外傷으로 인한 창상에서의 한의학적인 실험적 연구 결과에 대한 보고가 미흡하여, in vitro 실험으로 lipopolysaccharide(LPS)로 유도 된 Raw 264.7에서 當歸鬚散의 항염증 효능을 관찰하고, in vivo 실험으로 외상성 창상을 유발 시킨 병태모델에 자연치유군, 당귀수산 투여군, 테라마이신 도포군, 당귀수산과 테라마이신 동시 처치군으로 실험군을 나눠 항염증, 창상의 면적, 혈액학적 검사, 유전자 발현 정도 및 조직학적 검사를 통하여 외상성 창상에 대한 당귀수산의 효능을 검증하고자 한다.

제안 방법

MMP-1은 55℃에서 2분, 95℃에서 10분, 60℃에서 15초, MMP-2은 61℃에서 2분, 95℃에서 10분, 60℃에서 15초, MMP-9은 57℃에서 2분, 95℃에서 10분, 60℃에서 15초, GAPDH는 57℃에서 2분, 95℃에서 10분, 60℃에서 15초 동안 각 30 cycles 조건으로 PCR을 수행하였으며, 사용된 primer 는 아래와 같다(Table 3). 1% agarose gel에 전기영동 후 유전자발현의 여부를 UV로 촬영하여 각 그룹별로 band를 확인하고, RNA 발현을 나타내었다.
24시간 동안 배양 한 후 세포배양액을 수거하여 배양액에 함유된 IL-1β, IL-6, TNF-α를 custom-made 4-plex cytokine Milliplex panel을 이용하여 측정하였다.
7 cells. Cells were treated with LPS (1 ㎍/㎖) and 1, 10, 100 (㎍/㎖) of DG for 24 hours. The results are expressed as mean ± S.
Terra군과 DG + Terra군에는 테라마이신을 창상 유발 후 1주 동안은 2일 주기, 유발 후 2주, 3주 동안은 3일 주기로 창상부위에 충분히 도포 하였다. DG투여량은 1첩을 성인 체중 60kg에 1회 투여용량으로 하고,1첩으로부터 얻은 시료를 마우스 체중 30g으로 기준하여 산출하였다. 창상면적은 유발 후 1일, 4일, 8일, 11일, 15일, 19일, 22일 총 3주간 Digimatic Caliper를 이용하여 측정 평균산출하였다.
5 mM MHCl₂)를 포함한 mixture에 각 샘플과 primer를 넣고 PCR을 시행하였다. MMP-1은 55℃에서 2분, 95℃에서 10분, 60℃에서 15초, MMP-2은 61℃에서 2분, 95℃에서 10분, 60℃에서 15초, MMP-9은 57℃에서 2분, 95℃에서 10분, 60℃에서 15초, GAPDH는 57℃에서 2분, 95℃에서 10분, 60℃에서 15초 동안 각 30 cycles 조건으로 PCR을 수행하였으며, 사용된 primer 는 아래와 같다(Table 3). 1% agarose gel에 전기영동 후 유전자발현의 여부를 UV로 촬영하여 각 그룹별로 band를 확인하고, RNA 발현을 나타내었다.
NO의 농도는 배양액 내의 nitric oxide 농도를 griess reagent system을 이용하여 측정하였다. Raw 264.
N1 buffer와 N2 buffer를 각각 10분간 반응 후 540 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. Nitrite standard의 농도별 표준곡선을 이용하여 배양액의 NO 농도를 결정하였다.
역전사 반응은 추출한 RNA를 RT premix kit의 mixture를 사용하여 first-strand cDNA를 합성하였으며, M-MLV RT를 불활성화시킨 후 합성이 완료된 cDNA를 사용하였다. RT-PCR은 DNA polymerase 1U/tube에 250 mM dNTPs mix, RT buffer (10 mM Tris-HCl, pH 9.0, 30 mM KCl, 1.5 mM MHCl₂)를 포함한 mixture에 각 샘플과 primer를 넣고 PCR을 시행하였다. MMP-1은 55℃에서 2분, 95℃에서 10분, 60℃에서 15초, MMP-2은 61℃에서 2분, 95℃에서 10분, 60℃에서 15초, MMP-9은 57℃에서 2분, 95℃에서 10분, 60℃에서 15초, GAPDH는 57℃에서 2분, 95℃에서 10분, 60℃에서 15초 동안 각 30 cycles 조건으로 PCR을 수행하였으며, 사용된 primer 는 아래와 같다(Table 3).
Raw 264.7 세포를 96 well plate에 2×104 cells/well로 분주하여 24시간 동안 배양 한 후 새로운 배양액으로 교체하였고 DG를 각각 1, 10, 100 (㎍/㎖)의 농도와 LPS 1 ㎍/㎖의 농도를 처리하여 다시 24시간 동안 배양하였다.
배양 후 10 ㎕의 WST solution을 첨가하여 세포배양기 (37℃, 5% CO₂에서 30분간 반응시켰다. 반응 후 450 ㎚에서 ELISA reader기를 이용해 흡광도의 변화를 측정한 후 대조군에 대한 세포 생존율을 백분율로 표시하였다.
쥐의 배부 창상피부조직에서 발현된 창상 인자를 측정하기 위해 RT-PCR을 시행하였다. 분리 한 피부조직을 동결시킨 뒤 조직을 파쇄하여 total RNA prep kit을 이용하여 RNA를 추출하였다. 역전사 반응은 추출한 RNA를 RT premix kit의 mixture를 사용하여 first-strand cDNA를 합성하였으며, M-MLV RT를 불활성화시킨 후 합성이 완료된 cDNA를 사용하였다.
분리된 혈청을 가지고 IL-1β, IL-6, TNF-α는 custom-made 6-plex cytokine Milliplex panel을 이용하여 Luminex로 측정하였다.
7 세포는 96 well plate에 2×10⁴ cells/well로 분주하여 24시간 동안 배양하였다. 새로운 배양액으로 교체하였고, DG를 각각 1, 10, 100 (㎍/㎖)의 농도로 처리하여 다시 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 10 ㎕의 WST solution을 첨가하여 세포배양기 (37℃, 5% CO₂에서 30분간 반응시켰다.
제모 된 피부를 알콜로 깨끗이 소독한 후, 척추를 기준으로 고관절 정중앙에 2 × 2 ㎠ 의 정사각형 크기로 작도한다. 수술용 가위를 이용하여 피부를 근막 위까지 제거하여 창상을 유발하였다. 실험군은 자연치유를 한 Control군, DG만 투여한 DG군, 테라마이신(Oxytetracycline HCL 5mg + Polymaxin B Sulfate 10000 I.
실험 종료 후 ether로 마취한 상태에서 심장 천자법을 이용 하여 채혈하였다. 전혈 중 일부는 서울의과학연구소에 분석 의뢰하여 총 백혈구, 백혈구 중 호중구, 단핵구, 림프구를 측정하였고, 나머지 전혈은 실온에서 30분간 굳힌 뒤 3,000 rpm에서 15분간 원심 분리하여 혈청을 분리하였다.
실험 종료 후, 각 실험군 별로 적출한 창상 피부조직을 10% 중성 포르말린에 48시간 고정하여 고정이 완료된 조직 들을 흐르는 수돗물에서 12시간 수세한 뒤 조직 내 고정액을 완전 제거하였다. 조직의 탈수를 위해 60%에서부터 100% 알코올에 이르기까지 농도 상승 순으로 탈수하고, xylene에 투명과정을 거친 다음 파라핀 블럭을 제작하였다.
수술용 가위를 이용하여 피부를 근막 위까지 제거하여 창상을 유발하였다. 실험군은 자연치유를 한 Control군, DG만 투여한 DG군, 테라마이신(Oxytetracycline HCL 5mg + Polymaxin B Sulfate 10000 I.U)을 처치한 Terra군, DG를 투여하고 테라마이신을 함께 처치한 DG + Terra군으로 총 4그룹으로 나누고(n=6), 각 케이지에 한 마리씩 수용하였다.
분리 한 피부조직을 동결시킨 뒤 조직을 파쇄하여 total RNA prep kit을 이용하여 RNA를 추출하였다. 역전사 반응은 추출한 RNA를 RT premix kit의 mixture를 사용하여 first-strand cDNA를 합성하였으며, M-MLV RT를 불활성화시킨 후 합성이 완료된 cDNA를 사용하였다. RT-PCR은 DNA polymerase 1U/tube에 250 mM dNTPs mix, RT buffer (10 mM Tris-HCl, pH 9.
실험 종료 후 ether로 마취한 상태에서 심장 천자법을 이용 하여 채혈하였다. 전혈 중 일부는 서울의과학연구소에 분석 의뢰하여 총 백혈구, 백혈구 중 호중구, 단핵구, 림프구를 측정하였고, 나머지 전혈은 실온에서 30분간 굳힌 뒤 3,000 rpm에서 15분간 원심 분리하여 혈청을 분리하였다. 분리된 혈청을 가지고 IL-1β, IL-6, TNF-α는 custom-made 6-plex cytokine Milliplex panel을 이용하여 Luminex로 측정하였다.
제작된 블럭은 박절기 (microtome)를 이용해 3∼4 ㎛ 두께로 절편을 만들어 탈 파라핀 및 함수과정을 거친 다음 hematoxyline과 eosin (H&E) 염색을 실시하여 광학현미경상에서 관찰 및 사진 촬영 하였다.
실험 종료 후, 각 실험군 별로 적출한 창상 피부조직을 10% 중성 포르말린에 48시간 고정하여 고정이 완료된 조직 들을 흐르는 수돗물에서 12시간 수세한 뒤 조직 내 고정액을 완전 제거하였다. 조직의 탈수를 위해 60%에서부터 100% 알코올에 이르기까지 농도 상승 순으로 탈수하고, xylene에 투명과정을 거친 다음 파라핀 블럭을 제작하였다. 제작된 블럭은 박절기 (microtome)를 이용해 3∼4 ㎛ 두께로 절편을 만들어 탈 파라핀 및 함수과정을 거친 다음 hematoxyline과 eosin (H&E) 염색을 실시하여 광학현미경상에서 관찰 및 사진 촬영 하였다.
쥐의 배부 창상피부조직에서 발현된 창상 인자를 측정하기 위해 RT-PCR을 시행하였다. 분리 한 피부조직을 동결시킨 뒤 조직을 파쇄하여 total RNA prep kit을 이용하여 RNA를 추출하였다.
DG투여량은 1첩을 성인 체중 60kg에 1회 투여용량으로 하고,1첩으로부터 얻은 시료를 마우스 체중 30g으로 기준하여 산출하였다. 창상면적은 유발 후 1일, 4일, 8일, 11일, 15일, 19일, 22일 총 3주간 Digimatic Caliper를 이용하여 측정 평균산출하였다.
창상을 유발 한 후, 다음날부터 모든 군은 3주간 자유식이를 하였고, DG군과 DG + Terra군은 DG를 3주간 매일 1회 2㎖ (200㎎/㎏)씩 오전 10시에 경구투여 하였다. Terra군과 DG + Terra군에는 테라마이신을 창상 유발 후 1주 동안은 2일 주기, 유발 후 2주, 3주 동안은 3일 주기로 창상부위에 충분히 도포 하였다.

대상 데이터

마취제(졸레틸 0.5 ㎖ + 럼푼 0.1㎖)을 이용하여 Rat를 마취한 후, 배부(背部)의 피부를 깨끗이 제모 한다. 제모 된 피부를 알콜로 깨끗이 소독한 후, 척추를 기준으로 고관절 정중앙에 2 × 2 ㎠ 의 정사각형 크기로 작도한다.
본 실험에 사용한 당귀수산(Danggwisusan 이하 DG로 표기)의 구성 약재들은 ㈜옴니허브에서 구입하였고, 대전대학교 TBRC-RIC에서 정선 후 사용하였다. 그 내용과 분량(1첩)은 다음과 같다(Table 1).
사용된 시약은 dulbecco's modified eagle's medium (DMEM : Gibco BRL Co., U.S.A.), 우태아혈청 (fetal bovine serum: FBS, Invitrogen Co., U.S.A.), lipopolysaccharide (LPS : Sigma Co., U.S.A.), cell viability assay kit (Daeillab sevice, Korea), nitric oxide detection kit (Intron Biotechnology, Korea), penicillin (Hyclone, Co., U.S.A.), mouse cytokine milliplex map immunoassay kit (Millipore Co., U.S.A.), total RNA prep kit (Intronbio., Korea), terramycin(PT. Pfizer., Indonesis)을 사용하였으며, 기기는 rotary vacuum evaporator (Büchi B-480 Co., Switzerland), freeze dryer (EYELA FDU-540 Co., Japan), ELISA reader (Molecular Devices Co., U.S.A.), Luminex (Millipore Co., U.S.A.), PCR machine (Thermal Dynamic., U.S.A), Digimatic Caliper (Mitutoyo, Japan), 주정추출에 사용 된 주정은 ㈜주정판매월드(Jeonju, Korea)에서 구입하여 사용하였다.
실험에 사용된 랫은 수컷 6주령의 Wistar Rat (170-200g)을 ㈜라온바이오(Korea)사에서 구입하여 실험하였다. 동물은 2주간의 안정기를 가지면서 순화를 시켰으며, 희생 당일까지 일반 고형사료(㈜퓨리나, Korea)를 공급하고 자유 식이하면서 물을 충분히 공급하였다.

데이터처리

실험 결과는 실험 결과는 SPSS 11.0의 unpaired student's T-test 및 ANOVA test를 사용하여 통계처리 하였으며 p <0.05, p < 0.01 및 p < 0.001 수준에서 유의성을 검정하였다.

성능/효과

1. 세포 독성평가에서는 93% 이상의 세포 생존율을 나타내어 안정성이 확인되었다.
2. DG의 항염증 효능은 in vitro 실험에서 NO 생성 저해 능과 IL-1β, IL-6, TNF-α 소거능, 그리고 in vivo 실험에서 혈청 내의 IL-1β, IL-6, TNF-α 소거능 모두 농도 의존적인 감소와 유의적인 결과가 도출되었다.
3. 창상면적은 자연치유군에 비해 DG, Terra, DG + Terra 투여군에서 10일, 14일, 17일, 21일째 유의적인 감소 결과가 도출되었다.
4. 혈액 검사에서 총 백혈구는 DG, DG + Terra 투여군에서, 단핵구는 DG, Terra, DG + Terra 투여군에서 유의적인 감소 결과를 나타내었고, 호중구에서는 DG, DG + Terra 투여군에서 감소하였지만 유의성은 없는 결과를 도출하였다.
5. MMP-1, 2, 9 mRNA 발현에서는 DG, Terra, DG + Terra 투여군 모두 감소를 나타내었고, MMP-1에서는 DG 투여군, MMP-2에서는 DG, Terra, DG + Terra 투여군, MMP-9에서는 DG + Terra 투여군에서 유의적인 결과가 도출되었다.
6. 병리조직학적 검사상 DG, Terra, DG + Terra 투여군 모두 콜라겐의 증착과 만성염증의 감소를 나타냈었고, 또한 피부의 재상피화가 감소하며, 색이 옅어지는 결과를 도출하였다.
DG 투여군의 NO 생성량은 대조군을 100 ± 2.7%로 나타냈을 때, 정상군은 36.8 ± 2.6%, DG 투여군은 1, 10, 100 (㎍/㎖) 농도에서 95.7 ± 1.2%, 93.7 ± 1.1%, 86.1 ± 2.5%로 나타나, 농도의존적인 감소와 100 ㎍/㎖ 농도에서 유의성 있는 (** p < 0.01) 감소를 나타내었다 (Fig. 2).
창상 피부조직을 Hematoxylin & Eosin 염색하여 관찰한 결과, Control군에서는 콜라겐의 증착과 피부의 재 상피화가 두텁게 일어났으며, 만성염증이 나타났다. DG, Terra, DG + Terra 모든 투여군에서 콜라겐의 증착과 만성염증이 감소함을 나타내었고, 피부의 재 상피화 역시 DG, Terra, DG + Terra 투여군 모두에서 감소하고, 색이 옅어지며, 혈관의 재형성이 나타났다(Fig. 15).
DG의 IL-1β 생성량을 측정한 결과, 대조군이 36.9 ± 2.1 pg/㎖, 정상군이 13.2 ± 1.2 pg/㎖, DG 투여군은 1, 10, 100 (㎍/㎖) 농도에서 30.2 ± 2.2 pg/㎖, 22.0 ± 2.4 pg/㎖, 19.6 ± 1.6 pg/㎖로 나타나, 대조군에 비해 모든 농도에서 농도 의존적이며 유의성(* p < 0.05, ** : p < 0.01, *** : p< 0.001) 있는 감소를 나타내었다(Fig. 3).
DG의 IL-6 생성량을 측정한 결과, 대조군이 8779.2 ±651.1 pg/㎖, 정상군이 2.8±1.6 pg/㎖, DG 투여군은 1, 10, 100 (㎍/㎖) 농도에서 3626.2 ± 382.3 pg/㎖, 4851.0± 610.4 pg/㎖, 4727.7 ± 449.7 pg/㎖로 나타나, 대조군에 비해 모든 농도에서 농도 의존적이며 유의성(** : p < 0.01, *** : p < 0.001) 있는 감소를 나타내었다(Fig. 4).
DG의 TNF-α 생성량을 측정한 결과, 대조군이 1686.0 ±198.4 pg/㎖, 정상군이 251.6±33.7 pg/㎖, DG 투여군은 1, 10, 100 (㎍/㎖) 농도에서 1375.1 ± 88.6 pg/㎖, 1341.7± 92.2 pg/㎖, 1004.5 ± 127.8 pg/㎖로 나타나, 대조군에 비해 모든 농도에서 농도 의존적이며 유의성(* : p < 0.05, ** : p < 0.01) 있는 감소를 나타내었다(Fig. 5).
RAW 264.7 세포의 세포 생존율을 측정한 결과, 대조군을 100.0 ± 1.0%로 나타냈을 때, DG 투여군 1, 10, 100 (㎍/㎖) 농도에서 105.5 ± 3.1%, 98.4 ± 3.5%, 93.4 ± 2.1%의 세포 생존율을 나타내었다(Fig. 1).
본 실험에 앞서 DG 시료의 안전성을 확인하고자 마우스 유래 대식 세포주인 Raw 264.7 세포를 대상으로 하여 시료의 독성을 확인 한 바 안전성이 확인되었다.
선행 연구에 따르면 급성 창 상기에는 MMP-1, 2, 9 mRNA가 급격히 증가하고, 창상 회복기나 육아 형성 및 재형성 단계에는 점차 줄어든다고 하였고, 만성창상에서는 MMP-2, 9 mRNA가 지속적으로 높은 농도로 나타나며, 이는 육아조직 형성 부족을 야기한다고 보고 하였다^29,30). 본 실험에서 MMP-1, 2, 9 mRNA의 발현양은 자연치유군에 비해 DG, Terra, DG + Terra 투여군 모두 감소을 나타내어, 선행 연구와 비교, 부합되는 결과가 나타나, 창상 치유와 육아조직의 재형성이 잘 이루어지고 있다고 추측할 수 있다.
본 연구에서도 DG, Terra, DG + Terra 투여군에서 10일 이후부터 유 의성(** p < 0.01, *** p < 0.001) 있는 면적 감소 효과를 나타내었다.
실험 종료 후 창상 면적을 측정한 결과, Control군은 80%, DG 투여군은 93%, Terra 투여군은 92%, DG + Terra 투여군은 94%의 감소를 나타내었고, DG, Terra, DG + Terra 투여군에서 각각 10일, 14일, 17일, 21일째 유의성 있는(* p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001) 감소를 나타내었다(Table 3, Fig. 6-A, B).
이에 DG가 in vitro 실험에서 LPS로 유도한 Raw 264.7세포에서의 NO, IL-1β, IL-6, TNF-α 생성에 미치는 영향과 in vivo 실험에서 혈청에서의 IL-1β, IL-6, TNF-α 생성에 미치는 영향을 측정 한 결과, 모두 농도 의존적인 감소와 더불어 유의성(* p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001) 있는 감소를 나타내어 항염증에 효능이 있음을 나타내었다.
창상 피부조직에서의 MMP-1, 2, 9 발현양을 측정한 결과, DG, Terra, DG + Terra 모든 군이 Control군에 비해 모두 감소를 나타내었고, MMP-1에서는 Terra군, MMP-2에서는 DG, Terra, DG + Terra군, MMP-9에서는 DG + Terra군에서 유의성 (* p < 0.05, ** p < 0.01)있는 감소를 나타내었다(Fig. 14).
창상 피부조직을 Hematoxylin & Eosin 염색하여 관찰한 결과, control군에서는 콜라겐의 증착과 피부의 재상피화가 두텁게 일어나고 만성염증이 생겼으나, DG, Terra, DG + Terra 투여군 모두 콜라겐의 증착과 만성염증의 감소를 나타냈었고, 또한 피부의 재상피화가 감소하며, 색이 옅어졌다.
혈액 내 IL-1β 생성량을 측정한 결과, Control군이 106.0± 9.7 pg/㎖, DG군이 89.1 ± 9.5 pg/㎖, Terra군이 85.3± 9.8 pg/㎖, DG + Terra군이 83.7 ± 9.9 pg/㎖로 나타났고, Terra군과 DG + Terra군에서 유의성 (* : p < 0.05) 있는 감소를 나타내었다(Fig. 7).
혈액 내 IL-6 생성량을 측정한 결과, Control군이 916.3± 137.7 pg/㎖, DG군이 871.7 ± 67.2 pg/㎖, Terra군이 812.2 ± 69.1 pg/㎖, DG + Terra군이 805.5 ± 61.0 pg/㎖ 로 나타났고, Terra군과 DG + Terra군에서 유의성 (* : p <0.05) 있는 감소를 나타내었다(Fig. 8).
혈액 내 TNF-α 생성량을 측정한 결과, Control군이 66.4± 11.1 pg/㎖, DG군이 50.4 ± 9.6 pg/㎖, Terra군이 47.3± 6.7 pg/㎖, DG + Terra군이 45.2 ± 6.1 pg/㎖로 나타났고, 모든 군에서에서 유의성 (** : p < 0.01, *** : p <0.001) 있는 감소를 나타내었다(Fig. 9).
혈액 내 백혈구에 대한 단핵구의 비율은 Control군이 1.45± 0.61%, DG군이 0.30 ± 0.14%, Terra군이 0.30 ± 0.19%, DG + Terra군이 0.25 ± 0.11 %로 나타나, 모든 군에서 유의성 있는(* p < 0.05) 감소를 나타내었다(Fig. 13).
혈액 내 백혈구에 대한 림프구의 비율은 Control군이 90.20± 8.72%, DG군이 95.43 ± 1.24%, Terra군이 93.38 ±3.20%, DG + Terra군이 97.77 ± 0.77 %로 나타나, 모든 군에서 큰 차이를 보이지는 않았다(Fig. 12).
혈액 내 백혈구에 대한 호중구의 비율은 Control군이 2.80± 1.01%, DG군이 2.28 ± 0.55%, Terra군이 2.97 ± 0.19%, DG + Terra군이 1.87 ± 0.46 %로 나타나, DG군과 DG + Terra군에서는 감소를 나타내었으나 유의성은 없었다(Fig. 11).
혈액 내의 총 백혈구 생성량은 Control군이 11.78 ± 1.29 Thous/uL, DG군이 5.98 ± 1.85 Thous/uL, Terra군이 9.73± 2.15 Thous/uL, DG + Terra군이 6.13 ± 1.32 Thous/uL 로 나타나, DG군과 DG + Terra군에서 유의성 있는(** p <0.01) 감소를 나타내었다(Fig. 10).

후속연구

이상의 외상성 창상에 대한 실험으로, DG, Terra, DG + Terra 투여군이 in vitro, in vivo에서 단독 치료보다는 병행 치료 시 유의한 결과가 도출되었음을 실험적으로 입증되었으며, 향 후 많은 피부 병증에 대한 한방과 양방의 병행 치료에 대하여 심도 깊은 연구가 필요하다고 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	한의학적인 창상의 치료법은 어떻게 구분되는가?	한의학적인 창상의 치료법은 初期, 成膿, 潰後의 세단계로 나누며, 치료법칙도 이에 따라 消, 托, 補의 세가지의 기본법칙으로 분류된다. 그 중 消法은 병변의 손상을 초기에 消散시키고, 托法은 화농되어 있지 않거나 부패한 조직을 조속히 화농시켜 消退하며, 補法은 창상 후기에 국한적으로 파궤된 후 장기간에 걸쳐 유합되지 않는 경우에 사용한다고 알려져 있다3).
	DG의 외상성 창상의 회복능력에 미치는 효능에 대한 실험을 통하여 알 수 있는 사실은 무엇인가?	1. 세포 독성평가에서는 93% 이상의 세포 생존율을 나타내어 안정성이 확인되었다. 2. DG의 항염증 효능은 in vitro 실험에서 NO 생성 저해 능과 IL-1β, IL-6, TNF-α 소거능, 그리고 in vivo 실험에서 혈청 내의 IL-1β, IL-6, TNF-α 소거능 모두 농도 의존적인 감소와 유의적인 결과가 도출되었다. 3. 창상면적은 자연치유군에 비해 DG, Terra, DG + Terra 투여군에서 10일, 14일, 17일, 21일째 유의적인 감소 결과가 도출되었다. 4. 혈액 검사에서 총 백혈구는 DG, DG + Terra 투여군에서, 단핵구는 DG, Terra, DG + Terra 투여군에서 유의적인 감소 결과를 나타내었고, 호중구에서는 DG, DG + Terra 투여군에서 감소하였지만 유의성은 없는 결과를 도출하였다. 5. MMP-1, 2, 9 mRNA 발현에서는 DG, Terra, DG + Terra 투여군 모두 감소를 나타내었고, MMP-1에서는 DG 투여군, MMP-2에서는 DG, Terra, DG + Terra 투여군, MMP-9에서는 DG + Terra 투여군에서 유의 적인 결과가 도출되었다. 6. 병리조직학적 검사상 DG, Terra, DG + Terra 투여군 모두 콜라겐의 증착과 만성염증의 감소를 나타냈었고, 또한 피부의 재상피화가 감소하며, 색이 옅어지는 결과를 도출하였다.
	창상 치유는 어떠한 과정을 거치며 진행되는 과정인가?	창상은 외부의 물리적 요인에 의해 조직이 손상을 받아 세포학적 또는 해부학적 연속성이 파괴된 상태이며, 炎症期, 上皮化期, 增殖期, 成熟期 크게 네 단계의 치유과정으로 구분하나 명확한 시기와 순서가 정해져 있지 않고 서로 중첩되어 연속적으로 진행된다. 창상 치유는 외상에 대한 인체 내 조직반응을 수반하는 복구과정이며, 재상피화, 창상수축, 유아조직 형성 및 교원질 합성 등 여러 과정을 지나 조직을 회복시키는 복잡한 생물학적 과정이다. 이러한 과정은 동시에 이루어지며, 반흔을 형성하거나, 조직의 재생을 유도하여 창상면적이 감소된다14,15).

참고문헌 (30)

Lee YG. Effect of Astragali Radix on Dermoepidermal Recovery to Wound Tissues in Rats' Skin. Dongguk University. 2004.
Chang JH, Hwang SH, Lee EJ, Nobuaki O, Lee JH. Effect of Panax ginseng C.A. Meyer Extract (Ginseol K-b1) on UVB-induced Skin Damage in Hairless Mice. East Asian Soc Dietary Life. 2012 ; 22(2) : 224-30.
Liu ZY. wai ek pi fu ke de bian zheng lun zhi. Seo won dang. 1987 : 35
Lee YH, Kim WS. Morphological Observation on the Effects of Hyperbaric Oxygenation to the Cutaneous Wound Healing. Chungnam Med J. 1991 ; 18(1) : 89-97.
Kim TY, Jo NJ, Jeong HS, Kim MS. The Effects of Pulsed Ultrasound Treatment and Cold Therapy in the Process of Acute Wound Healing. J Korean Acad Clin Electrophysiol. 2007 ; 5(2) : 23-33.
Han CD, Lee WM, Lee HB, Hahn MH, Yu WW. Effects of Steroid and Nonsteroidal Anti-inflammatory Drugs on Acute Wound Healing and Collagen Synthesis in Rat Skin. J Korean Orthop Assoc. 2003 ; 38(4) : 393-9

상세보기
Yoo YC, Yoo SG. The effects of compound madecassol on the wound healing. Arch Plast Surg. 1998 ; 25(8) : 1451-58.
Li C. Ui hak ib mun. Bub in moon hwa sa. 2009.
Heo Jun. Dong ui bo gam. Bub in moon hwa sa. 2012 : 1046-47, 1052.
Herbal medicine. Seoul : Younglimsa. 2007. 154-155, 236-38, 396-99, 462-64, 476-77, 583-85, 629-631.
Lee GH. Study on the Effects of Dangguixusan(當歸鬚散) on Experimental Blood Stasis Model Induced by Compression. Kyunghee Univ Oriental Med J. 1998 ; 22(1) : 22-38.
Kim YS. Study on the Effects of Angelicae sinensis Radix on Thrombosis. Kor J Herbology. 2000 ; 15(1) : 53-7.
Joe WA, Jang MJ, Cheon SJ, Sung JY, Choi EY, Kang BY, Jung SY, Jeung YS, Kim YS, An BJ, Lee CE, Lee JT. Cosmeceutical activities and Anti-inflammatory effects of Shell from Persicae semen. Kor J Herbology. 2006 ; 21(2) 87-93.
Textbook of plastic surgery. Chapter3. 2009 : 83-89.
Yang Jl. The Effect of Sildenafil on Wound Healing in Rat. Dong-A University. 2010.
Harding KG, Morris HL, Patel GK. Healing chronic wounds. BMJ. 2002 ; 324 : 160-3.

상세보기
Clark RA. Biology of dermal wound repair. Dermatol Clin. 1993 ; 11(4) : 647-66.
Mauch C, Krieg T, Bauer EA. Role of the extracellular matrix in the degradation of connective tissue. Arch Dermatol Res. 1994 ; 287(1) : 107-14.

상세보기
Lewis JS, Lee JA, Underwood JC, Harris AL, Lewis CE. Macrophage responses to hypoxia: relevance to disease mechanisms. J Leukoc Biol 1999 ; 66(6) : 889-900.

상세보기
Kurkinen M, Vaheri A, Roberts PJ, Stenman S. Sequential appearance of fibronectin and collagen in experimental granulation tissue. Lab Invest 1980 ; 43(1) : 47-51.
Woodley DT, O'Keefe EJ, Prunieras M. Cutaneous wound healing: a model for cell-matrix interactions. J Am Acad Dermatol 1985 ; 12(2 Pt 2) : 420-33.

상세보기
Choi WH, Oh YS, Ahn JY, Kim SR, Ha TY. Antioxidative and Protective Effects of Ulmus davidiana var. japonica Extracts on Glutamate-Induced Cytotoxicity in PC 12 Cells. Korean Soc Food Sci Technol. 2005 ; 37(3) : 479-83.
Jung HM, Han HS, Lee YJ. Effect of Fermented Epimedii Herba Extract on the Cytotoxicity and Immuno modulating Activity. Kor J Herbology. 2013 ; 28(6) : 111-7.

원문보기 상세보기
Ryu IH, Cho HB, Kim SB, Seo YJ, Choi CM. The Inhibitory Effect of Picrasmae Lignum on Inflammatory Responses. J Orient Gynecol. 2011 ; 24(1) : 1-14.
Kim DH, Hwang EY, Son JH. Anti-Inflammatory Activity of Carthamus tinctoriousSeed Extracts in Raw 264.7 cells. J Life Sci. 2013 ; 23(1) : 55-62.

원문보기 상세보기
Lee DG. An experimental study on the wound healing effects of alginate in full rhickness excisional wound models of rat. Daegu Catholic University. 2004.
Dang CM, Beanes S, Lee H, Zhang Xl, Soo C, Ting K. Scarless Fetal Wounds Are Associated with an Increased Matrix Metalloproteinase-to-Tissue-Derived Inhibitor of Metalloproteinase Ratio. Plast Reconstr Surg. 2003 ; 111(7) : 2273-85.

상세보기
Gross J, Lapiere CM. Collagenolytic activity in amphibian tissues: a tissue culture assay. Proc Natl Acad Sci U S A. 1962 ; 48(6) : 1014-22.

상세보기
Soo C, Shaw W, Zhang XL, Longaker M. Howard E, Ting K. Differential expression of matrix metalloproteinases and their tissue-derived inhibitors in cutaneous wound repair. Plast Reconstr Surg. 2000 ; 105(2) : 638-47.

상세보기
Wysocki AB, Staiano-Coico L, Grinnell F. Wound Fluid from Chronic Leg Ulcers Contains Elevated Levels of Metalloproteinases MMP-2 and MMP-9. J Invest Dermatol. 1993 ; 101(1) : 64-8.

상세보기

저자의 다른 논문 :

LOADING...

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증