[논문]고련환(苦練丸)의 항산화 및 항염증 효과에 관한 실험 연구

윤예슬; 양승정; 조성희

doi:10.15204/jkobgy.2024.37.2.001

고련환(苦練丸)의 항산화 및 항염증 효과에 관한 실험 연구
An Experimental Study on the Antioxidant and Anti-inflammatory Effects of Goryeon-hwa

大韓韓方婦人科學會誌 = The Journal of Korean obstetrics & gynecology, v.37 no.2, 2024년, pp.1 - 16

윤예슬 (동신대학교 한의과대학 한방부인과교실) , 양승정 (동신대학교 한의과대학 한방부인과교실) , 조성희 (동신대학교 한의과대학 한방부인과교실)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives: The purpose of this study is to evaluate the antioxidant and anti-inflammatory effects of Goryeon-hwan (GRH), which is mentioned in ≪Donguibogam≫ that treats leukorrhea. Methods: In this study, the antioxidant efficacy of GRH was evaluated by measuring the total polyphenol and flavonoid content, DPPH radical scavenging activity, ABTS radical scavenging activity, and ROS production through RAW264.7 cells. The concentration of GRH cytotoxicity was confirmed through the cell viability of RAW264.7 cells, and the production of NO, the production of Cytokine through ELISA assay, and the expression of genes through Real-time PCR were measured to evaluate anti-inflammatory efficacy. Protein phosphorylation and protein expression were measured through Western blot analysis. Results: As a result of the experiment, GRH contained polyphenol and flavonoid, and concentration-dependent increased DPPH radical scavenging activity and ABTS radical scavenging activity and decreased ROS production. The anti-inflammatory efficacy measurement results showed a significant decrease in NO and Cytokine production in the GRH administration group compared to the control group. In terms of gene expression and protein expression, there was a significant decrease in iNOS, COX-2, IL-1β, IL-6, and TNF-α depending on the concentration, and a significant increase in HO-1 and NQO1. Protein phosphorylation measurements showed a concentration-dependent significant decrease in the GRH group at ERK and p38. Conclusions: As a result, the study experimentally confirmed the antioxidant and anti-inflammatory effects of GRH, suggesting that it may be used as a treatment for various gynecological inflammatory diseases including vaginitis.

주제어

표/그림 (14)

표 Table 1. The Prescription of GRH
표 Table 2. Real-Time PCR Primer Sequences
그림 Fig. 1. DPPH radical scavenging activity of GRH.
그림 Fig. 2. ABTS radical scavenging activity of GRH.
표 Table 3. Cell Viability of GRH in RAW264.7 Cells
그림 Fig. 3. Effect of GRH on reactive oxygen species level in RAW264.7 cells.
그림 Fig. 4. Effect of GRH on nitric oxide level in RAW264.7 cells.
그림 Fig. 5. Effect of GRH on prostaglandin E2 level in RAW264.7 cells.
그림 Fig. 6. Effect of GRH on interleukin 1 beta level in RAW264.7 cells.
그림 Fig. 7. Effect of GRH on interleukin 6 level in RAW264.7 cells.
그림 Fig. 8. Effect of GRH on tumor necrosis factor alpha level in RAW264.7 cells.
그림 Fig. 9. Effect of GRH on ERK protein phosphorylation level in RAW264.7 cells.
그림 Fig. 10. Effect of GRH on JNK protein phosphorylation level in RAW264.7 cells.
그림 Fig. 11. Effect of GRH on p38 protein phosphorylation level in RAW264.7 cells.

AI 본문요약
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문제 정의

이에 본 연구에서는 고련환(Goryeon-hwan, GRH)의 항산화 효능 및 염증 억제 기전에 관련하는 인자들의 유전자 및 단백질 발현량을 통해 그 기전을 규명하고자 생쥐 유래 대식세포주인 RAW264.7 세포로 in vitro 연구를 시행하였고, GRH의 항산화 및 염증 반응 개선 효능 및 그 작용 기전을 탐구하여 유의한 결과를 얻었기에 이를 보고하는 바이다.

제안 방법

GRH군은 100, 200, 400 ng/mL의 lipopolysaccharide(LPS)를 처리하여 염증반응을 유도하고 고련환을 각각 100, 200, 400 ug/mL 농도로 처리한 실험군이며, 대조군으로 사용된 Control군은 LPS를 처리하지 않은 실험군, LPS군은 200 ng/mL의 LPS를 처리하여 염증반응을 유도한 실험군이다. 모든 실험은 3회 반복하여 결과를 도출하였다.

대상 데이터

한국 세포주 은행(Korean Cell Line Bank, KCLB)에서 생쥐 유래 대식세포주인 RAW264.7 세포를 구입하여 사용하였으며, DMEM 배지에 10%의 FBS를 추가하여 37℃, 5% CO2 조건이 유지되는 세포배양기에서 세포를 배양하였다. 세포의 계대 배양은 2-3일 주기로 진행하였다.

데이터처리

연구 결과 측정된 수치는 SPSS Statistics Version 21.0(IBM, U.S.A.)을 이용하여 mean±standard error of mean으로 나타냈다
유의성을 확인하기 위해서는 Tukey’s HSD test를 이용해 유의수준을 0.05로 설정하여 검정을 시행하였으며, p＜0.05, p＜0.01 및 p＜0.001의 3가지 유의수준으로 나누어 표기하였다.
)을 이용하여 mean±standard error of mean으로 나타냈다. 통계적 비교에 있어 두 그룹 사이의 비교는 independent sample t-test를 사용하였고, 여러 그룹 사이의 비교는 analysis of variance(ANOVA)를 사용하였다. 유의성을 확인하기 위해서는 Tukey’s HSD test를 이용해 유의수준을 0.

성능/효과

2) C-Jun NH2-terminal kinase(JNK) 단백질의 인산화를 측정한 결과, GRH는 LPS군에 비해 유의적인 변화가 나타나지 않았다(Significance of results, +++ ; p＜0.001 compared to control)(Fig. 10).
1. GRH은 항산화 효과를 가진 폴리페놀과 플라보노이드를 함유하고 있고, 항산화 측정에 사용되는 DPPH 소거능과 ABTS 소거능에서 농도 의존적인 증가가 나타났다. 생쥐 유래 대식세포인 RAW 264.
GRH의 세포 독성 발생 농도를 알아보기 위하여 RAW264.7 세포의 생존율을 알아본 결과, GRH는 400 μg/ml 이하의 농도에서 99% 이상의 세포 생존율을 보였으며 정상 세포에 대한 독성은 나타나지 않았다.
GRH의 항염증 효능을 평가한 결과, GRH 투여군의 NO, Cytokine(PEG2, IL-1 β, IL-6, TNF-α) 생성량에서 LPS군에 비해 농도 의존적이고 유의성 있는 감소가 나타났다.

후속연구

이상의 결과를 통해 고련환의 항산화 및 염증 반응 개선 효과를 실험적으로 확인할 수 있었고, 이를 바탕으로 향후 추가적인 세포 실험과 충분한 임상 적용 연구를 통해 고련환을 외음부 및 질 감염, 자궁목점막염, 골반 염증성 질환 등 여성 생식기 제반 염증에 다양하게 활용 가능할 것으로 사료된다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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