점안약에 광범위하게 사용되는 보존제(preservatives)의 세포독성 및 항균활성 및 항진균 활성을 검정하였다. 세포독성은 L929 세포를 사용하였으며, 항균항진균 활성검정에 사용된 균주는 Pseudomonas aeruginosa ATCC27853, Staphylococcus aureus ATCC25923 등 2가지이고, 진균은 Trichoderma reesei A TCC6967을 사용하였다. 사용된 시약은 합성보존제인 benzalkoniumchloride(BAK)와 천연보존제인 키토산이며 키토산의 분자량은 60,000, 탈아세틸화도는 95%, 점도는 2cps였다. L929 세포에 대해 24hr, 48hr, 72hr에 대해 각각 농도에 따른 세포독성검정 결과 세포의 30% 이상 성장저해를 일으키는 농도는 BAK의 경우 0.001%였고, 키토산의 경우는 0.6%였으며 이 결과는 시간에 따라 유의성 있는 변화가 없었다. 각 각의 균에 대한 BAK 의 항균항진균 활성을 나타내는 최소저해농도는 P.aeruginosa에는 0.1%였고, S. aureus에는 0.001 %였으며 T reesel'에는 0.1%였다. 키토산은 P. aeruginosa의 경우 2%, S. aureus가 1%에서 2일간 정균작용을 나타내었다. 진균에 대해서는 농도 의존적으로 생육을 촉진시켰다. 천연보존제는 합성보존제에 비해 독성을 일으키지 않으며 약리작용이 있는 반면에 항균성이 떨어지므로 이에 대한 연구가 더 필요하다.
점안약에 광범위하게 사용되는 보존제(preservatives)의 세포독성 및 항균활성 및 항진균 활성을 검정하였다. 세포독성은 L929 세포를 사용하였으며, 항균항진균 활성검정에 사용된 균주는 Pseudomonas aeruginosa ATCC27853, Staphylococcus aureus ATCC25923 등 2가지이고, 진균은 Trichoderma reesei A TCC6967을 사용하였다. 사용된 시약은 합성보존제인 benzalkoniumchloride(BAK)와 천연보존제인 키토산이며 키토산의 분자량은 60,000, 탈아세틸화도는 95%, 점도는 2cps였다. L929 세포에 대해 24hr, 48hr, 72hr에 대해 각각 농도에 따른 세포독성검정 결과 세포의 30% 이상 성장저해를 일으키는 농도는 BAK의 경우 0.001%였고, 키토산의 경우는 0.6%였으며 이 결과는 시간에 따라 유의성 있는 변화가 없었다. 각 각의 균에 대한 BAK 의 항균항진균 활성을 나타내는 최소저해농도는 P.aeruginosa에는 0.1%였고, S. aureus에는 0.001 %였으며 T reesel'에는 0.1%였다. 키토산은 P. aeruginosa의 경우 2%, S. aureus가 1%에서 2일간 정균작용을 나타내었다. 진균에 대해서는 농도 의존적으로 생육을 촉진시켰다. 천연보존제는 합성보존제에 비해 독성을 일으키지 않으며 약리작용이 있는 반면에 항균성이 떨어지므로 이에 대한 연구가 더 필요하다.
Cytotoxicity and antibacterial activity of preservatives were examined. Fibroblast cell L929 was used for cytotoxicity experiment and Pseudomonas aeruginosa A TCC27853, Staphylococcus aureus ATCC25923. Trichoderma reesei ATCC6967 were used for antibacteria and antifungi. Benzalkoniumchloride(BAK) as...
Cytotoxicity and antibacterial activity of preservatives were examined. Fibroblast cell L929 was used for cytotoxicity experiment and Pseudomonas aeruginosa A TCC27853, Staphylococcus aureus ATCC25923. Trichoderma reesei ATCC6967 were used for antibacteria and antifungi. Benzalkoniumchloride(BAK) as synthetic preservative and chitosan as natural preservative were used. Minimum inhibitary concentration (MIC) of BAK was 0.1 % for P. aeruginsa and 0.001% for S. aureus and 0.1 % for T reesei MIC of chitosan was 2% for P. aeruginosa and 1 % for S. aureus.
Cytotoxicity and antibacterial activity of preservatives were examined. Fibroblast cell L929 was used for cytotoxicity experiment and Pseudomonas aeruginosa A TCC27853, Staphylococcus aureus ATCC25923. Trichoderma reesei ATCC6967 were used for antibacteria and antifungi. Benzalkoniumchloride(BAK) as synthetic preservative and chitosan as natural preservative were used. Minimum inhibitary concentration (MIC) of BAK was 0.1 % for P. aeruginsa and 0.001% for S. aureus and 0.1 % for T reesei MIC of chitosan was 2% for P. aeruginosa and 1 % for S. aureus.
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문제 정의
2)키토산은 천연항균제로 알려져 있는데 다른 약리작용도 뛰어나 건강식품, 증점제, 보습제 등의 용도로 사용되고 있으며 각 분야에서 연구가 활발하게 이루어지고 있다. 이에 본 연구는 식품의약품 안전청의 세포독성 검사 방법과 유사하지만 더 민감한 방법을 이용하여, 보존제의 세포증식 저해 및 안정성에 대한 기초자료를 조사하기 위해 섬유모세포를 배양하여 세포증식 저해정도를 비색반응 검사로 검정하여 비교하고자 시행하였다. 키토산의 점안약 보존제로서의 연구는 아직 없으므로 향후 이 분야의 응용에 기초자료로 사용될 수 있다.
제안 방법
Bovine Serum (FI3S) 오I b'ungizone(30/zE/m(0. /、北让崩。1:宙(10燃/诚)로 구성되며, 세포는 3일마다 계대하였다. 세포의 배양은 37C, 5% C。?로 조정된 CO? 항온기 (Forma Co.
5% 용액을 만들어 이것에 보존제를 농도별로 처리한 후 멸균되어진 petri dish(87xi5 mm)에 분주하여 응고시킨 다음, 여기에 각각의 실험 균주를 도말하였다. 배양조건은 37‘C, 24hr, 48hr, 72hr에서 배양하여 균의 증식이 억제된 정도를 대조군과 비교하여 최소억제농도(MIC)를 구하였다.
점안약에 광범 위 하게 사용되는 보존제 (preservatives) 의 세포독성 및 항균활성 및항진균 활성을 검정하였다. 세포독성은 L929세포를 사용하였으며 항균항진균 활성검정에 사용된 균주는 Pseudomonas aeruginosa ATCC27853, Staphylococcus aureus ATCC25923 등 2가지이고, 진균은 Trichoderma reesei ATCC6967을 사용하였 다.
대상 데이터
az/eus였으며, Muller-Hinton Broth (MERCK, 21 g/L) 를 배지로 사용하였다. T. reesei를 항진균 검정에 사용하였고, Potato Dextrose Broth(DIFCO, 24g/L)를 배지로 사용하였다. 한천 1.
세포독성은 L929세포를 사용하였으며 항균항진균 활성검정에 사용된 균주는 Pseudomonas aeruginosa ATCC27853, Staphylococcus aureus ATCC25923 등 2가지이고, 진균은 Trichoderma reesei ATCC6967을 사용하였 다. 사용된 시약은 합성 보존제 인 benzalkoniumchloride (BAK) 와 천연보존제인 키토산이며 키토산의 분자량은 60, 000, 탈아세틸화도는 95%, 점도는 2cps였다. L929세포에 대해 24hr, 48hr, 72hr에 대해 각각 농도에 따른 세포독성검정결과 세포의 30%이상 성장저해를 일으키는 농도는 BAK의 경우 0.
세포독성 검정에 사용된 세포주는 생쥐섬유모세포(L929 Cell)이며 배양액은 a —MEM (Minimum Essential Medium Alpha Medium(GIBCO))이고, 10%의 Fetal Bovine Serum (FI3S) 오I b'ungizone(30/zE/m(0. /、北让崩。1:宙(10燃/诚)로 구성되며, 세포는 3일마다 계대하였다.
활성을 검정하였다. 세포독성은 L929세포를 사용하였으며 항균항진균 활성검정에 사용된 균주는 Pseudomonas aeruginosa ATCC27853, Staphylococcus aureus ATCC25923 등 2가지이고, 진균은 Trichoderma reesei ATCC6967을 사용하였 다. 사용된 시약은 합성 보존제 인 benzalkoniumchloride (BAK) 와 천연보존제인 키토산이며 키토산의 분자량은 60, 000, 탈아세틸화도는 95%, 점도는 2cps였다.
reesei를 항진균 검정에 사용하였고, Potato Dextrose Broth(DIFCO, 24g/L)를 배지로 사용하였다. 한천 1.5% 용액을 만들어 이것에 보존제를 농도별로 처리한 후 멸균되어진 petri dish(87xi5 mm)에 분주하여 응고시킨 다음, 여기에 각각의 실험 균주를 도말하였다. 배양조건은 37‘C, 24hr, 48hr, 72hr에서 배양하여 균의 증식이 억제된 정도를 대조군과 비교하여 최소억제농도(MIC)를 구하였다.
항균성검정에 사용된 균주는 P. aeruginosa , S. az/eus였으며, Muller-Hinton Broth (MERCK, 21 g/L) 를 배지로 사용하였다. T.
이론/모형
세포독성검정은 Mosmann(1983) 의 방법으로 세포소기관인 mitochondria의 활성을 조사해 세포활성을 측정하는데, 96 Well plate에 세포주를 24시간 전배양 후 benzalkoniumchloride와 키토산이 농도별로 포함된 medium을 처리 하여 시간 별로 24hr, 48hr, 72hr 후 MTT가 포함된 배양액으로 배양한 다음 20분 경과 후 Dimetylsulfoxide(DMSO)로 formazan을 용해시켜 ELISA Reader로 570 nm에서 홉광도를 측정하여 대조군과 비교하여 30%이상 세포증식저해가 있을 때를 독성이 있는 것으로 하였다.
성능/효과
사용된 시약은 합성 보존제 인 benzalkoniumchloride (BAK) 와 천연보존제인 키토산이며 키토산의 분자량은 60, 000, 탈아세틸화도는 95%, 점도는 2cps였다. L929세포에 대해 24hr, 48hr, 72hr에 대해 각각 농도에 따른 세포독성검정결과 세포의 30%이상 성장저해를 일으키는 농도는 BAK의 경우 0.001%였고, 키토산의 경우는 0.6%였으며 이 결과는 시간에 따라 유의성 있는 변화가 없었다. 각각의 균에 대한 BAK 의 항균항진균 활성을 나타내는 최소저해농도는 P.
L929세포의 24hr, 48hr, 72hr에 대해 각각 보존제의 농도에 따른 세포독성검정결과 세포의 30%이상 성장저해를 일으키는 농도는 BAK의 경우 0.001%였고, 키토산의 경우는 0.6%였으며 이 결과는 시간에 따라 유의성 있는 변화가 없었다. 각각의 균에 대한 BAK 의 항균항진균 활성을 나타내는 최소저해농도는 P.
6%였으며 이 결과는 시간에 따라 유의성 있는 변화가 없었다. 각각의 균에 대한 BAK 의 항균항진균 활성을 나타내는 최소저해농도는 P. aeruginosa가 0.1%였고, S. aureus가 0.001%였으며 T. reeseP\ 0.1%였다. 키토산은 P.
진균에 대해서는 농도 의존적으로 생육을 촉진시켜서 항진균 기능은 없는 것으로 나타났다. 눈의 정상세균총으로 분류되는 P. aeruginosa와 S. aureus0^ 대한 BAK의 항균성은 각각 0.1%와 0.001%로 나타나 BAK가 P. aeruginosa에는 약하고, S. 에는 강한 항균작용을 나타냄을 보였으며, 항진균성도 떨어짐을 보였다. 점안약에 사용되는 농도 범위가 0.
aureus가 1%에서 48시간 동안 정균작용을 나타냈으며, 48시간 후에는 균의 성장을 촉진 시켰다. 진균에 대해서는 농도 의존적으로 생육을 촉진시켜서 항진균 기능은 없는 것으로 나타났다. 눈의 정상세균총으로 분류되는 P.
후속연구
이에 본 연구는 식품의약품 안전청의 세포독성 검사 방법과 유사하지만 더 민감한 방법을 이용하여, 보존제의 세포증식 저해 및 안정성에 대한 기초자료를 조사하기 위해 섬유모세포를 배양하여 세포증식 저해정도를 비색반응 검사로 검정하여 비교하고자 시행하였다. 키토산의 점안약 보존제로서의 연구는 아직 없으므로 향후 이 분야의 응용에 기초자료로 사용될 수 있다.
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