배양된 대황으로 모상근으로부터 추출한 물질에 대한 분획별 신장상피세포에 있어서의 세포 독성을 조사하였다. l 수층과 클로로포름 층으로부터 얻은 대황 모상근 추출물모두 농도의 증가에 따라 세포에 미치는 독성이 증가하였다. 2. 클로로포름층으로부터 얻은 대황 모상근 추출물이 수층으로부터 얻은 대황 추출물보다 세포에 미치는 독성이 크게 나타났다. 콜로로포름층 분획의 $MTT_{50}$, $NR_{50}$, $SRB_{50}$은 각각 289.3 ${\mu}g/ml$. 302.7 ${\mu}g/ml$. 433.8 ${\mu}g/ml$ 이었고, 수층 분획물의 $MTT_{50}$, $NR_{50}$, $SRB_{50}$은 각각 475.8 ${\mu}g/ml$. 428.3 ${\mu}g/ml$. 549.5 ${\mu}g/ml$ 이었다. 3. 세포독성 측정방법에 따라 차이를 보였으며 수층 분획의 경우 NR정량법에서 클로로포름 층 분획의 경우 MTT정량법에서 독성 정도가 더 높게 나타났다.
배양된 대황으로 모상근으로부터 추출한 물질에 대한 분획별 신장상피세포에 있어서의 세포 독성을 조사하였다. l 수층과 클로로포름 층으로부터 얻은 대황 모상근 추출물모두 농도의 증가에 따라 세포에 미치는 독성이 증가하였다. 2. 클로로포름층으로부터 얻은 대황 모상근 추출물이 수층으로부터 얻은 대황 추출물보다 세포에 미치는 독성이 크게 나타났다. 콜로로포름층 분획의 $MTT_{50}$, $NR_{50}$, $SRB_{50}$은 각각 289.3 ${\mu}g/ml$. 302.7 ${\mu}g/ml$. 433.8 ${\mu}g/ml$ 이었고, 수층 분획물의 $MTT_{50}$, $NR_{50}$, $SRB_{50}$은 각각 475.8 ${\mu}g/ml$. 428.3 ${\mu}g/ml$. 549.5 ${\mu}g/ml$ 이었다. 3. 세포독성 측정방법에 따라 차이를 보였으며 수층 분획의 경우 NR정량법에서 클로로포름 층 분획의 경우 MTT정량법에서 독성 정도가 더 높게 나타났다.
The purpose of this research was to investigate the effects of extracts from cultured hairy roots of R. undulatum on human kidney epithelial cells. Hairy roots were induced by a co-culture with A. rhizogenes ATCCl5834 and cultured in WPM medium. The cytotoxicity was measured by colorimetric assay us...
The purpose of this research was to investigate the effects of extracts from cultured hairy roots of R. undulatum on human kidney epithelial cells. Hairy roots were induced by a co-culture with A. rhizogenes ATCCl5834 and cultured in WPM medium. The cytotoxicity was measured by colorimetric assay using 3-(4,5-dimethythiazol-2-yl)-2,5- diphenyl-2H -tetrazolium bromide (MTT), neutral red (NR) and sulforhodamine protein B (SRB) with human kidney epithelial cell lines A498. MTT, NR and SRB quantities decreased propotionally in cultured A498 cells treated with the water or chloroform extracts of cultured hairy roots at increasing concentrations. These results suggest that extracts of cultured hairy 개ots are cytotoxic on human epithelial cells. The cytotoxicity of chloroforrm fraction was stronger than that of water fraction. The values of $MTT_{50}$, $NR_{50}$, $SRB_{50}$ of the extracts of chloroform fraction and those of water fraction were measured to be 289.3${\mu}g$/ml, 302.7${\mu}g$/ml. 433.8${\mu}g$/ml and 475.8${\mu}g$/ml. 428.3${\mu}g$/ml, 549.5${\mu}g$/ml in A498 cell line.
The purpose of this research was to investigate the effects of extracts from cultured hairy roots of R. undulatum on human kidney epithelial cells. Hairy roots were induced by a co-culture with A. rhizogenes ATCCl5834 and cultured in WPM medium. The cytotoxicity was measured by colorimetric assay using 3-(4,5-dimethythiazol-2-yl)-2,5- diphenyl-2H -tetrazolium bromide (MTT), neutral red (NR) and sulforhodamine protein B (SRB) with human kidney epithelial cell lines A498. MTT, NR and SRB quantities decreased propotionally in cultured A498 cells treated with the water or chloroform extracts of cultured hairy roots at increasing concentrations. These results suggest that extracts of cultured hairy 개ots are cytotoxic on human epithelial cells. The cytotoxicity of chloroforrm fraction was stronger than that of water fraction. The values of $MTT_{50}$, $NR_{50}$, $SRB_{50}$ of the extracts of chloroform fraction and those of water fraction were measured to be 289.3${\mu}g$/ml, 302.7${\mu}g$/ml. 433.8${\mu}g$/ml and 475.8${\mu}g$/ml. 428.3${\mu}g$/ml, 549.5${\mu}g$/ml in A498 cell line.
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문제 정의
그러나 이와 같은 탈분화된 세포는 배양과정에서 득정 물질의 생합성능이 불완전하기나 전혀 이루어지지 않은 경우가 많다. 따라서, 본 연구에서는 Agrobacterium 厂伍zoge/ies에 의해 대황의 형질전환을 유도하여 빠른 성장과 화학적 전형성능을 나타내는 모상근을 유용 2차대사물질의 생산에 활용하고자 하였다.
제안 방법
NR assay : Borenfreund 와 Purener (19S4)의 낭법에 따라 신 장세포에 분액별 대 황모 상근 추출물을 농도별로 첨가하고 50“g/mC의 neutral red을 처리하여 를 3시간 후 ELISA reader로 홉광도를 측정하였다.
클로로포름층은 회수하고 수층에 다시 동량의 클로로포름을 가하여 분획하는 방법으로 2회 반복하여 시행하였다. 글로로포름층은 50℃에서 농축 건조시켰으며 수층은 감압 농축한 후 동결 건조하여 수층 분획으로 하였다.
대황의 모상근으로부터 표준엑스를 추출하여 사람의 신장 상피세포에 데한 세포독성을 조사하였다. Table 1 과 2는 MTT방법에 의한 세포독성조사 결과로 수층분획은 10 “g/ml의 농도까지는 데조군에 비교할 때 99.
베양된 대황의 모상근으로부터 추출한 물질에 대한 분획별 신장상피세포에 있어서의 세포 독성을 조사하였다.
추출물은 여과 후 감압 농축하고 증류수를 가하여 현탁 시킨 후 분액여두에 넣고 동량의 클로로포름을 가하여 분획시켰다. 클로로포름층은 회수하고 수층에 다시 동량의 클로로포름을 가하여 분획하는 방법으로 2회 반복하여 시행하였다. 글로로포름층은 50℃에서 농축 건조시켰으며 수층은 감압 농축한 후 동결 건조하여 수층 분획으로 하였다.
대상 데이터
세포r= : 세포주는 human kidney epithelial cell A49£로 한沖세 포■世주은헹으로부터 분양 반아 사용하였다.
이론/모형
MTT assay : Mosmann (1983)의 방법에 따라 신장세포에 대황 모상근의 분획별 추출물을 농도별로 처리하고 24시간 배양한 다음 MTT 500 “g/W을 침가하어 3시간 후 ELISA reader료 홉광도를 측정하였다.
SRB assay : Skehan 등(1990)의 방법에 따라 신장세포에 분획벌 대황 모상근 추출물을 농도별로 첨가하고 0.4% SRB용엑을 넣어 20~30분 동안 반응시킨 후 ELISA reader로 565 nm에서 흡광도를 측정하였다.
성능/효과
1. 수증과 클로로포름 층으로부터 얻은 대황 모상근 추출물 모두 농도의 증가에 따라 세포에 미치는 독성이 증가하였다.
2. 클로로포름층으로부터 얻은 대황 모상근 추출물이 수층으로부터 얻은 대황 추출물보다 세포에 미치는 독성이 크게 나타났다. 클로로포름층 분획의 MTTso, NR50, SRBw은 각각 289.
3. 세포독성 측정방법에 따라 차이를 보였으며 수층 분획의 경우 NR정량법에서 클로로포름 층 분획의 경우 MTT정량법에서 독성 정도가 더 높게 나타났다.
SRB방법을 이용한 세 포독성조사 결과 수층으로부터 얻은 대 왕추출물의 경우 50 “g/ml 농도에서 대조군의 97.8%가 영향을 받았으며 100 z/g/ml 농도에서 대조곤의 92.9%로 비교적 세포에 미치는 영향이 적었디..
이러한 결과는 Lee 등(1997)이 인체 피부암세포에 적용하여 세포수 싱존율, MTT정량 및 SRB정량을 실시한 결과와 비교할 때 메탄올, 에탄을, 클로로포름증으로부터 얻은 추출액이 세포에 미치는 영향과 항암작용에 있어 서로 차이를 모인다는 결괴와 유사하였다. 따라서 추출시 사용하는 용매에 따라 세포에 미치는 영향이 다름을 확인할 수 있었다. 조사방법에 따른 차이는 수층으로 얻은 대황 추출물의 경우 NK방법에서 클로로포름층으로부터 얻은 대황 추출물의 경우 MTT정량방법에서 다른 방법보다 동일 농도에서 민감하게 나타났는데 이러한 결과는 실힘에 사용하는 물질에 따라 조사 방법의 차이를 갖는 기 보고된 결과들과 일치하있다(Han 등, 1998).
수층과 클로로포름층으로부터 얻은 대황 모상근의 추출물을 사람의 신장세포인 A498 세포주에 치리하고 MTT, NR, 그리고 SRB정량법에 의해 세포독성을 측정한 결과 분획별 추출물의 처리농도의 증가에 따라 세포에 미치는 독성은 증가하였다. 특히, 클로로포름층으로부터 얻은 추출물이 세포에 미치는 영향은 수층으里부티 얻은 추출물 M다 세포에 미치는 영향이 크게 나타났디.
8“g/ml이었다. 클로로포름충의 분획물은 1 座/ml에서 대조군의 93.9%이었고, 첨가한 추출물의 농도 증가에 따라 세포에 미치는 독성효과가 크게 나타났다. 클로로포름층의 MTTso 농도는 289.
또힌, , Han 등(1998)은 클로로포름층의 분획별 처리구에서 항암활성의 차이를 보았다. 본 실험에서 두 가지 종류의 분획층에 따른 세포독성의 차이는 각 층에 포함된 약리물질의 생리 생화학적인 작용 특성에 따른 차이가* 있을 것으로 추정되므로 각 분획증의 성분 분석에 관한 연구를 계속 실시할 필요가 있을 것으로 사료되었다.
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