초록 ▼

본 발명은 심장-뇌 혈관성 질환용 한약 조제물에 관한 것으로, 상기 조제물은 단삼(DANSHEN)과 삼칠(NOTOGINSENG)을 알카리수(LYE)로 추출하는 단계, 알코올로 침전시키는 단계, 농축시키는 단계 및 그외 약재 및 부형제를 첨가하는 단계에 의해 제조된다. 이후, HAPLY-MS 및 HAPLY 핑거프린트 아틀라스(FINGERPRINT ATLAS)로 상기 조제물의 물리화학적 특성을 확인한다. 본 발명의 핑거프린트 아틀라스를 이용하여, 생물학적으로 활성인 성분의 구조 및 상대적인 함량을 알 수 있다. 상기한 방법에 따

본 발명은 심장-뇌 혈관성 질환용 한약 조제물에 관한 것으로, 상기 조제물은 단삼(DANSHEN)과 삼칠(NOTOGINSENG)을 알카리수(LYE)로 추출하는 단계, 알코올로 침전시키는 단계, 농축시키는 단계 및 그외 약재 및 부형제를 첨가하는 단계에 의해 제조된다. 이후, HAPLY-MS 및 HAPLY 핑거프린트 아틀라스(FINGERPRINT ATLAS)로 상기 조제물의 물리화학적 특성을 확인한다. 본 발명의 핑거프린트 아틀라스를 이용하여, 생물학적으로 활성인 성분의 구조 및 상대적인 함량을 알 수 있다. 상기한 방법에 따른 단삼과 삼칠의 한약 조제물의 물리 화학적 특성은 종래 방법에 비해 우수하다.

대표청구항 ▼

심혈관성 질환 및 뇌혈관성 질환 치료용 한약 조제물로서,(1) 건성 가스 유속 10 L/min, 분무기 압력 60 psi, 건성 가스 온도 350 ℃, 모세관 전압 3500 v 및 m/z 스캔 범위 100-1200의 조건하에서 음이온 검출을 통한 HPLC-MS| 및(2) 건성 가스 유속 10 L/min, 분무기 압력 60 psi, 건성 가스 온도 350 ℃, 모세관 전압 3500 v, m/z 스캔 범위 100-800 및 분절 진폭(fragment amplitude) 1.5-3.0 v에서 음이온 검출을 통한 HPLC-MSn로 질량 분

심혈관성 질환 및 뇌혈관성 질환 치료용 한약 조제물로서,(1) 건성 가스 유속 10 L/min, 분무기 압력 60 psi, 건성 가스 온도 350 ℃, 모세관 전압 3500 v 및 m/z 스캔 범위 100-1200의 조건하에서 음이온 검출을 통한 HPLC-MS| 및(2) 건성 가스 유속 10 L/min, 분무기 압력 60 psi, 건성 가스 온도 350 ℃, 모세관 전압 3500 v, m/z 스캔 범위 100-800 및 분절 진폭(fragment amplitude) 1.5-3.0 v에서 음이온 검출을 통한 HPLC-MSn로 질량 분광 분석시,상기 조제물은 2개의 성분을 포함하며, 상기 성분은 각각 준분자 이온 질량 피크(m/z) 537[M-H]-, 제2 분절 이온(second fragment ion) 질량(m/z) 493[M-H-CO2]- 및 295[M-CO2-R-H2O]-, 및 제3 분절 이온(m/z) 159 및 109를 나타내며, 파장 327 nm에서 최대 흡광도를 가지는 것을 특징으로 하는, 한약 조제물.제 1항에 있어서, 이소리토스페름산(isolithospermic acid) A 및 B를 포함하는 것을 특징으로 하는 한약 조제물.제 1항에 있어서, 한약 조제물은(1) 건성 가스 유속 10 L/min, 분무기 압력 60 psi, 건성 가스 온도 350 ℃, 모세관 전압 3500 v 및 m/z 스캔 범위 100-1200의 조건하에서 음이온 검출을 통한 HPLC-MS| 및(2) 건성 가스 유속 10 L/min, 분무기 압력 60 psi, 건성 가스 온도 350 ℃, 모세관 전압 3500 v, m/z 스캔 범위 100-800 및 분절 진폭(fragment amplitude) 1.5-3.0 v에서 음이온 검출을 통한 HPLC-MSn를 포함하는 질량 분광 분석시,417, 717, 359, 717, 339 및 493 [M-H]-의 준분자 이온 질량 피크(m/z)를 가지는 성분들을 포함하며|417 [M-H]-의 성분은 175[M-CO2-R-H2O]- 및 373[M-H-CO2]-의 제2 분절 이온(m/z), 및 147, 157 및 133의 제3 분절 이온(m/z)을 가지며|717 [M-H]-의 성분은 519[M-R-H2O]- 및 321[M-2R-2H2O]-의 제2 분절 이온(m/z), 321[M-R-H2O]- 및 339[M-R]-의 제3 분절 이온(m/z), 및 279, 293, 249, 223 및 185의 제3 분절 이온(m/z)을 가지며|359 [M-H]-의 성분은 161[M-R-H2O]-, 179[M-R]-, 및 195의 제2 분절 이온(m/z)을 가지며|717 [M-H]-의 성분은 519[M-R-H2O]- 및 321[M-2R-2H2O]-의 제2 분절 이온(m/z), 321[M-R-H2O]- 및 339[M-R]-의 제3 분절 이온(m/z), 및 279, 293, 249, 223 및 185의 제4 분절 이온(m/z)을 가지며|339 [M-H]-의 성분은 321[M-H-H2O]- 및 295[M-H-CO2]-의 제2 분절 이온(m/z), 279 및 267의 제3 분절 이온(m/z), 및 251의 제4 분절 이온(m/z)을 가지며|493 [M-H]-의 성분은 295[M-R-H2O]-의 제2 분절 이온(m/z), 및 159 및 109의 제3 분절 이온(m/z)을 가지는 것을 특징으로 하는, 한약 조제물.제 1항에 있어서, 상기 한약 조제물은(1) 건성 가스 유속 10 L/min, 분무기 압력 60 psi, 건성 가스 온도 350 ℃, 모세관 전압 3500 v 및 m/z 스캔 범위 400-1500의 조건하에서 음이온 검출을 통한 HPLC-MS| 및(2) 건성 가스 유속 10 L/min, 분무기 압력 60 psi, 건성 가스 온도 350 ℃, 모세관 전압 3500 v, m/z 스캔 범위 400-1200 및 분절 진폭(fragment amplitude) 1.2-1.5 v에서 음이온 검출을 통한 HPLC-MSn을 포함하는 질량 분광 분석시, 931, 945, 799, 1107, 769, 769, 783, 637, 637, 945, 945, 781, 751, 751, 765, 783, 783, 765 및 765 [M-H]-의 준분자 이온 질량 피크(m/z)를 가지는 성분들을 포함하며,931 [M-H]-의 성분은 799[M-H-Xyl]-, 637[M-H-Xyl-Glc]-, 및 475[M-H-Xyl-2Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|945 [M-H]-의 성분은 799[M-H-Rham]-, 783[M-H-Glc]-, 637[M-H-Rham-Glc]-, 및 475[M-H-Rham-2Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|799 [M-H]-의 성분은 637[M-H-Glc]-, 및 475[M-H-2Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|1107 [M-H]-의 성분은 945[M-H-Glc]-, 783[M-H-2Glc]-, 621[M-H-3Glc]-, 및 459[M-H-4Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|769 [M-H]-의 성분은 637[M-H-Xyl]-, 및 475[M-H-Xyl-Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|769 [M-H]-의 성분은 637[M-H-Xyl]-, 및 475[M-H-Xyl-Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|783 [M-H]-의 성분은 637[M-H-Rham]-, 및 475[M-H-Rham-Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|637 [M-H]-의 성분은 475[M-H-Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|637 [M-H]-의 성분은 475[M-H-Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|945 [M-H]-의 성분은 783[M-H-Glc]-, 621[M-H-2Glc]-, 및 459[M-H-3Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|945 [M-H]-의 성분은 783[M-H-Glc]-, 621[M-H-2Glc]-, 및 459[M-H-3Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|781 [M-H]-의 성분은 619[M-H-Glc]-, 및 457[M-H-2Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|751 [M-H]-의 성분은 619[M-H-Xyl]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|751 [M-H]-의 성분은 619[M-H-Xyl]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|765 [M-H]-의 성분은 619[M-H-Rham]-, 및 457[M-H-Rham-Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|783 [M-H]-의 성분은 621[M-H-Glc]-, 및 459[M-H-2Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|783 [M-H]-의 성분은 621[M-H-Glc]-, 및 459[M-H-2Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|765 [M-H]-의 성분은 603[M-H-Glc]-, 및 441[M-H-2Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|765 [M-H]-의 성분은 603[M-H-Glc]-, 및 441[M-H-2Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지는 것을 특징으로 하는, 한약 조제물.제 1항에 있어서, 상기 한약 조제물은(1) 건성 가스 유속 10 L/min, 분무기 압력 60 psi, 건성 가스 온도 350 ℃, 모세관 전압 3500 v 및 m/z 스캔 범위 100-1200의 조건하에서 음이온 검출을 통한 HPLC-MS| 및(2) 건성 가스 유속 10 L/min, 분무기 압력 60 psi, 건성 가스 온도 350 ℃, 모세관 전압 3500 v, m/z 스캔 범위 100-800 및 분절 진폭(fragment amplitude) 1.5-3.0 v에서 음이온 검출을 통한 HPLC-MSn를 포함하는 질량 분광 분석시, 417, 717, 359, 717, 339 및 493 [M-H]-의 준분자 이온 질량 피크(m/z)를 가지는 성분들을 포함하며,417 [M-H]-의 성분은 175[M-CO2-R-H2O]- 및 373[M-H-CO2]-의 제2 분절 이온(m/z), 및 147, 157 및 133의 제3 분절 이온(m/z)을 가지며|717 [M-H]-의 성분은 519[M-R-H2O]- 및 321[M-2R-2H2O]-의 제2 분절 이온(m/z), 321[M-R-H2O]- 및 339[M-R]-의 제3 분절 이온(m/z), 및 279, 293, 249, 223 및 185의 제3 분절 이온(m/z)을 가지며|359 [M-H]-의 성분은 161[M-R-H2O]-, 179[M-R]-, 및 195의 제2 분절 이온(m/z)을 가지며|717 [M-H]-의 성분은 519[M-R-H2O]- 및 321[M-2R-2H2O]-의 제2 분절 이온(m/z), 321[M-R-H2O]- 및 339[M-R]-의 제3 분절 이온(m/z), 및 279, 293, 249, 223 및 185의 제4 분절 이온(m/z)을 가지며|339 [M-H]-의 성분은 321[M-H-H2O]- 및 295[M-H-CO2]-의 제2 분절 이온(m/z), 279 및 267의 제3 분절 이온(m/z), 및 251의 제4 분절 이온(m/z)을 가지며| 493 [M-H]-의 성분은 295[M-R-H2O]-의 제2 분절 이온(m/z), 및 159 및 109의 제3 분절 이온(m/z)을 가지며, 상기 한약 조제물은 (1) 건성 가스 유속 10 L/min, 분무기 압력 60 psi, 건성 가스 온도 350 ℃, 모세관 전압 3500 v 및 m/z 스캔 범위 400-1500의 조건하에서 음이온 검출을 통한 HPLC-MS 및(2) 건성 가스 유속 10 L/min, 분무기 압력 60 psi, 건성 가스 온도 350 ℃, 모세관 전압 3500 v, m/z 스캔 범위 400-1200 및 분절 진폭(fragment amplitude) 1.2-1.5 v에서 음이온 검출을 통한 HPLC-MSn 수행을 포함하는 질량 분광 분석시,931, 945, 799, 1107, 769, 769, 783, 637, 637, 945, 945, 781, 751, 751, 765, 783, 783, 765 및 765 [M-H]-의 준분자 이온 질량 피크(m/z)를 가지는 성분들을 더 포함하며,931 [M-H]-의 성분은 799[M-H-Xyl]-, 637[M-H-Xyl-Glc]-, 및 475[M-H-Xyl-2Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|945 [M-H]-의 성분은 799[M-H-Rham]-, 783[M-H-Glc]-, 637[M-H-Rham-Glc]-, 및 475[M-H-Rham-2Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|799 [M-H]-의 성분은 637[M-H-Glc]-, 및 475[M-H-2Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|1107 [M-H]-의 성분은 945[M-H-Glc]-, 783[M-H-2Glc]-, 621[M-H-3Glc]-, 및 459[M-H-4Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|769 [M-H]-의 성분은 637[M-H-Xyl]-, 및 475[M-H-Xyl-Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|769 [M-H]-의 성분은 637[M-H-Xyl]-, 및 475[M-H-Xyl-Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|783 [M-H]-의 성분은 637[M-H-Rham]-, 및 475[M-H-Rham-Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|637 [M-H]-의 성분은 475[M-H-Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|637 [M-H]-의 성분은 475[M-H-Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|945 [M-H]-의 성분은 783[M-H-Glc]-, 621[M-H-2Glc]-, 및 459[M-H-3Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|945 [M-H]-의 성분은 783[M-H-Glc]-, 621[M-H-2Glc]-, 및 459[M-H-3Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|781 [M-H]-의 성분은 619[M-H-Glc]-, 및 457[M-H-2Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|751 [M-H]-의 성분은 619[M-H-Xyl]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|751 [M-H]-의 성분은 619[M-H-Xyl]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|765 [M-H]-의 성분은 619[M-H-Rham]-, 및 457[M-H-Rham-Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|783 [M-H]-의 성분은 621[M-H-Glc]-, 및 459[M-H-2Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|783 [M-H]-의 성분은 621[M-H-Glc]-, 및 459[M-H-2Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며|765 [M-H]-의 성분은 603[M-H-Glc]-, 및 441[M-H-2Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지며| 765 [M-H]-의 성분은 603[M-H-Glc]-, 및 441[M-H-2Glc]-의 분절 이온(m/z)을 가지는 것을 특징으로 하는, 한약 조제물.제 1항에 있어서, 상기 조제물은 살비아놀산(Salvianolic acid) D, 살비아놀산 E, 로즈마린산, 살비아놀산 B, 살비아놀산 G, 살비아놀산 A, 단센수(Danshensu), 프로토카테추알데하이드(Protocatechualdehyde), 이소리토스페름산(isolithospermic acid) A, 이소리토스페름산 B, 탄시논(Tanshinone) I, 탄시논 IIA, 노토진세노사이드(Notoginsenoside) R1, 진세노사이드 Re, 진세노사이드 Rg1, 진세노사이드 Rb1, 노토진세노사이드 R2, 노토진세노사이드 R2 이소., 진세노사이드 Rg2, 진세노사이드 Rh1, 진세노사이드 Rh1 이소., 진세노사이드 Rd, 진세노사이드 Rd 이소., 진세노사이드 Rf-H2O, 노토진세노사이드 R2-H2O, 진세노사이드 Rg6 또는 F4, 진세노사이드 20(R)-Rg3, 진세노사이드 20(S)-Rg3, 진세노사이드 Rk1, 진세노사이드 Rg5, 진세노사이드 Rk3, 및 진세노사이드 Rh4를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 한약 조제물.제 1항에 있어서, 상기 조제물은 HPLC 스펙트럼에서 총 피크 면적에 대한 단일 피크의 면적 비가 2% 보다 높은 8개의 피크를 가지며, 이들 8개의 피크의 평균 체류 시간은 각각 6.04, 9.90, 16.89, 17.84, 20.31, 23.74, 27.73 및 31.02이고, 체류 시간의 RSD%는 각각 0.31, 0.25, 0.61, 0.70, 0.96, 0.76, 0.50 및 1.18이고, 평균 피크 면적은 각각 1627.92, 2575.54. 366.89, 381.40, 186.08, 555.35, 281.91 및 1852.33이고, 피크 면적의 RSD%는 각각 5.91, 13.53, 10.92, 13.81, 12.04, 10.48, 18.08 및14.84이고, 총 피크 면적에 대한 단일 피크 면적 비는 각각 19.6%-22.0%, 28.5-37.4%, 4.2%-5.2%, 4.2%-5.5%, 2.1%-2.7%, 6.4%-7.8%, 3.0%-4.3% 및 20.2%-27.2%인, 물리 화학적 파라미터를 가지며,상기 물리 화학적 파라미터는 (1) 필터: 옥타데실실릴-실리카 겔, 유속: 1.000 ml/min 및 검출 파장: 280 nm의 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)에서(2) 이동상 A: 0.02% 인산 수용액, 이동상 B: 80% 아세토니트릴-0.02% 인산 수용액, 및 농도 구배 용출: 0에서 8분까지 이동상 A는 90%에서 78%로, 이동상 B는 10%에서 22%로 일정하게 농도를 변화시키고, 8분부터 15분까지 이동상 A는 78%에서 74%로, 이동상 B는 22%에서 26%로 농도를 변화시키고, 15분부터 55분까지 이동상 A는 74%에서 48%로, 이동상 B는 26%에서 52%로 변화시킴으로써 용출시켜 결정하며, 및상기 고성능 액체 크로마토그래피에서 샘플 용액은 한약 조제물 10환의 무게를 정확하게 측정하여 10 ml의 측정 병에 넣는 단계, 상기 조제물을 용해시키기에 충분한 함량의 증류수를 첨가하여 15분간 초음파 처리하면서 교반하는 단계, 증류수를 추가로 첨가하여 총 부피를 10 ml로 조절하는 단계, 제조된 용액을 원심 분리 또는 여과하여 샘플 용액을 수득하는 단계, 샘플 용액 10 ㎕을 HPLC 시스템에 주입하는 단계, 및 샘플 용액을 HPLC하여 HPLC 스펙트럼을 수득하는 단계를 따라 제조 및 분석되는 것을 특징으로 하는, 한약 조제물.제 7항에 있어서, 평균 체류 시간이 6.04, 9.90, 16.89, 17.84, 20.31, 23.74, 27.73 및 31.02인 상기 8개의 피크는 각각 단센수, 프로토카테추알데하이드, 이소리토스페름산 A, 이소리토스페름산 B, 살비아놀산 D, 로즈마린산, 살비아놀산 B 및 살비아놀산 A인 것을 특징으로 하는, 한약 조제물.단삼(Radix Salviae Miltiorrhizae)과 삼칠(Radix Notoginseng)의 무게를 측정하는 단계|상기 약재 총 무게에 대해 0.5 내지 4.0 중량%로, 소듐 하이드록사이드, 소듐 바이카보네이트, 소듐 카보네이트, 포타슘 하이드록사이드, 포타슘 바이카보네이트, 포타슘 카보네이트 또는 이들의 혼합물을 첨가하는 단계|상기 제조되는 혼합물을 3-6배의 물에서 2-4회 달이는 단계|상기 혼합물을 여과하고, 모은 여과물을 농축하는 단계|상기 제조되는 농축물에 에탄올 함량이 65-70%가 되도록 70% 이상의 에탄올을 첨가하는 단계|상기 제조되는 혼합물을 정치하여 상층액을 분리하는 단계|상기 상층액으로부터 에탄올을 제거하고, 상대 밀도가 1.20 - 1.50이 될때까지 단삼-삼칠 추출물인 잔사를 농축하는 단계|상기 추출물에 보르네올 또는 강진향(Lignum Dalbergiae Odoriferae) 오일을 혼합하는 단계| 및상기 제조되는 혼합물에 부형제를 첨가하여 조제물을 수득하는 단계|를 포함하는 것을 특징으로 하는, 제 1항 내지 8항중 어느 한항에 따른 한약 조제물의 제조 방법.제 9항에 있어서, 상기 부형제는 전분, 덱스트린, 락토스, 미세결정형 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸 셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜, 마그네슘 스테아레이트, 미세 실리콘 젤, 자일리톨, 락티톨, 글루코스, 글리신, 만니톨, 메틸 전분 소듐, 가교된 소듐 카르복실 메틸 셀룰로스, 가교된 폴리비닐피롤리돈 또는 수중의 가교된 폴리비닐피롤리돈, 또는 이들 두가지 이상으로 이루어진 혼합물이고,상기 조제물은 주사제, 정제, 서방성 정제, 드롭 환제, 과립제, 주사용 분말, 캡슐제, 미세과립제 또는 경구 붕괴제의 투여 형태인 것을 특징으로 하는, 한약 조제물의 제조 방법.제 10항에 있어서, 상기 조제물은 드롭 환제의 투여 형태인 것을 특징으로 하는, 한약 조제물의 제조 방법.제 11항에 있어서, 단삼(Radix Salviae Miltiorrhizae)과 삼칠(Radix Notoginseng)의 무게를 측정하는 단계|상기 약재의 총 무게에 대해 0.5 내지 4.0 중량%의 소듐 바이카보네이트를 첨가하는 단계|제조되는 혼합물을 4-5배의 물에서 2-3시간 동안 달인 후, 3-4배의 물에서 1-2시간 달이는 단계|상기 혼합물을 여과하고, 비중이 1.16 - 1.20이 될때까지 모은 여과물을 농축하는 단계|상기 제조되는 농축물에 에탄올 함량이 65-70%가 되도록 70% 이상의 에탄올을 첨가하는 단계|상기 혼합물을 8-12시간 동안 정치시켜 상층액을 분리하는 단계|상기 상층액으로부터 에탄올을 제거하고, 단삼-삼칠 추출물인 잔사의 상대 밀도가 1.32 - 1.40이 될때까지 농축시키는 단계|상기 잔사에 보르네올 또는 강진향(Lignum Dalbergiae Odoriferae) 오일, 및 폴리에틸렌 글리콜 6000을 균일하게 혼합하는 단계| 상기 제조되는 혼합물에 열을 가하여 용해시키는 단계|상기 제조되는 용해물을 차가운 액체 파라핀 또는 메틸 실리콘 오일에 드롭-환 장치를 이용하여 점적하는 단계|제조되는 드롭 환제를 수거하고 오일 잔류물을 제거하는 단계| 및환제를 체질하여 원하는 조제물을 수득하는 단계| 를 포함하는 것을 특징으로 하는, 한약 조제물의 제조 방법.