암브룩스, 인코포레이티드 / 미국 캘리포니아주 ***** 라호야 노스 터레이 파인스 로드 ***** 수트 ***
대리인 / 주소
강승옥;
김진회
(Kang Seung Ok)
서울 중구 충무로 *가 **-* 극동빌딩 **층(리인터내셔날특허법률사무소);
서울 중구 충무로 *가 **-* 극동빌딩 **층(리인터내셔날특허법률사무소)
심사진행상태
거절결정(일반)
법적상태
거절
초록
본 발명은 일반적으로 인간 성장 호르몬(hGH)을 생산, 정제 및 분리하는 방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 재조합 숙주 또는 배양 배지 예를 들어, 효모, 곤충, 포유동물 및 박테리아 세포로부터 실질적으로 정제된 hGH를 생산, 정제 및 분리하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법은 또한 중합체 또는 기타 분자에 결합되어 있는 hGH를 정제하는데에도 유용하다.
대표청구항▼
(A) 생육을 촉진하는 조건 하에 비천연 암호화 아미노산(NON-NATURALLY ENCODED AMINO ACID)을 함유하는 액상 영양 배지 중에서, 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH를 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 배양하는 단계; (B) 상기 세포에 의한, 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH의 생산을 유도하는 단계; 및(C) 상기 세포 또는 배양 배지로부터 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 상기 HGH를 정제하는 단계를 포함하는 방법.제1항에 있어서, 상기 하나 이상의 비천연 암호화 아미노산은 세포 생육 중에
(A) 생육을 촉진하는 조건 하에 비천연 암호화 아미노산(NON-NATURALLY ENCODED AMINO ACID)을 함유하는 액상 영양 배지 중에서, 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH를 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 배양하는 단계; (B) 상기 세포에 의한, 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH의 생산을 유도하는 단계; 및(C) 상기 세포 또는 배양 배지로부터 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 상기 HGH를 정제하는 단계를 포함하는 방법.제1항에 있어서, 상기 하나 이상의 비천연 암호화 아미노산은 세포 생육 중에 연속적으로, 유도 이전 시점, 유도 시점 또는 유도 이후 시점으로 이루어진 군으로부터 선택되는 시점에 첨가하는 것인 방법.제2항에 있어서, 상기 하나 이상의 비천연 암호화 아미노산은 유도와 동시에 첨가하는 것인 방법.제2항에 있어서, 상기 하나 이상의 비천연 암호화 아미노산은 유도 약 1 시간 전에 첨가하는 것인 방법.(A) 제1항의 (C) 단계로부터 얻어진 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH와 음이온 교환 크로마토그래피 매트릭스를, 상기 매트릭스에 상기 HGH가 결합할 수 있는 조건 하에 접촉시키는 단계;(B) 상기 매트릭스로부터 HGH를 용리 및 수집하는 단계;(C) 상기 단계 (B)로부터 얻어진 HGH와 소수성 상호 작용 크로마토그래피(HIC) 매트릭스를, 상기 매트릭스에 상기 HGH가 결합할 수 있는 조건 하에 접촉시키는 단계; 및(D) 상기 HIC 매트릭스로부터 상기 HGH를 용리 및 수집하여, 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 실질적으로 순수한 HGH를 제공하는 단계를 포함하는 방법.제1항에 있어서, 상기 재조합 숙주 세포는 원핵 생물 세포 및 진핵 생물 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.제1항에 있어서, 상기 실질적으로 정제된 HGH는 성숙 HGH, 성숙 HGH 변이체, HGH 폴리펩티드 및 HGH 폴리펩티드 변이체로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.제5항에 있어서, 상기 방법은 상기 단계 (A) 이후의 추가 단계로서, 음이온 교환 크로마토그래피로부터 용리된 HGH와 하이드록시아파타이트 크로마토그래피 매트릭스를, 상기 매트릭스에 상기 HGH가 결합할 수 있는 조건 하에 접촉시킨 후, 상기 하이드록시아파타이트 크로마토그래피 매트릭스로부터 상기 HGH를 용리 및 수집하는 단계를 포함하는 것인 방법.(A) HGH-PEG 컨쥬게이트를 형성하기에 충분한 조건 하에, 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH와 유도체화된 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 반응시키는 단계; 및(B) 상기 HGH-PEG 컨쥬게이트와 음이온 교환 매트릭스를, 상기 매트릭스에 상기 HGH가 결합할 수 있는 조건 하에 접촉시킨 후, 상기 음이온 교환 크로마토그래피 매트릭스로부터 상기 HGH를 용리 및 수집함으로써 상기 HGH-PEG 컨쥬게이트를 분리 및 정제하여, 실질적으로 정제된 HGH-PEG 컨쥬게이트를 제공하는 단계를 포함하는 방법.(A) 생육을 촉진하는 조건 하에, 비천연 암호화 아미노산을 함유하는 액상 영양 배지 중에서, 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH를 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 배양하는 단계; (B) 상기 세포에 의한, 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH의 생산을 유도하는 단계; (C) 상기 (B) 단계로부터 얻어진 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH와 음이온 교환 크로마토그래피 매트릭스를, 상기 매트릭스에 상기 HGH가 결합할 수 있는 조건 하에 접촉시킨 후, 상기 매트릭스로부터 상기 HGH를 용리 및 수집하는 단계;(D) 상기 단계 (C)의 음이온 교환 크로마토그래피로부터 용리된 HGH와 하이드록시아파타이트 크로마토그래피 매트릭스를, 상기 매트릭스에 상기 HGH가 결합할 수 있는 조건 하에 접촉시킨 후, 상기 하이드록시아파타이트 크로마토그래피 매트릭스로부터 상기 HGH를 용리 및 수집하는 단계; (E) 상기 단계 (D)로부터 얻어진 HGH와 소수성 상호 작용 크로마토그래피(HIC) 매트릭스를, 상기 매트릭스에 상기 HGH가 결합할 수 있는 조건 하에 접촉시킨 후, 상기 HIC 매트릭스로부터 상기 HGH를 용리 및 수집하여 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH를 제공하는 단계; (F) HGH-PEG 컨쥬게이트를 형성하기에 충분한 조건 하에, 상기 단계 (E)로부터 얻어진 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH와 유도체화된 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 반응시키는 단계; 및(G) 상기 HGH-PEG 컨쥬게이트와 음이온 교환 매트릭스를, 상기 매트릭스에 상기 HGH가 결합할 수 있는 조건 하에 접촉시킨 후, 상기 음이온 교환 크로마토그래피 매트릭스로부터 상기 HGH를 용리 및 수집함으로써 상기 HGH-PEG 컨쥬게이트를 분리 및 정제하여, 실질적으로 정제된 HGH-PEG 컨쥬게이트를 제공하는 단계를 포함하는, 실질적으로 정제된 HGH-PEG 컨쥬게이트를 분리하는 방법.(A) 생육을 촉진하는 조건 하에, 비천연 암호화 아미노산을 함유하는 액상 영양 배지 중에서, 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH를 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 배양하는 단계; (B) 상기 세포에 의한, 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH의 생산을 유도하는 단계; (C) 상기 단계 (B)로부터 얻어진 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH와 음이온 교환 크로마토그래피 매트릭스를, 상기 매트릭스에 상기 HGH가 결합할 수 있는 조건 하에 접촉시킨 후, 상기 매트릭스로부터 상기 HGH를 용리 및 수집하는 단계;(D) 상기 단계 (C)로부터 얻어진 HGH와 소수성 상호 작용 크로마토그래피(HIC) 매트릭스를, 상기 매트릭스에 상기 HGH가 결합할 수 있는 조건 하에 접촉시킨 후, 상기 HIC 매트릭스로부터 상기 HGH를 용리 및 수집하여 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH를 제공하는 단계; (E) HGH-PEG 컨쥬게이트를 형성하기에 충분한 조건 하에, 상기 단계 (D)로부터 얻어진 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH와 유도체화된 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 반응시키는 단계; 및(F) 상기 HGH-PEG 컨쥬게이트와 음이온 교환 매트릭스를, 상기 매트릭스에 상기 HGH가 결합할 수 있는 조건 하에 접촉시킨 후, 상기 음이온 교환 크로마토그래피 매트릭스로부터 상기 HGH를 용리 및 수집함으로써 상기 HGH-PEG 컨쥬게이트를 분리 및 정제하여, 실질적으로 정제된 HGH-PEG 컨쥬게이트를 제공하는 단계를 포함하는, 실질적으로 정제된 HGH-PEG 컨쥬게이트를 분리하는 방법.(A) 생육을 촉진하는 조건 하에, 비천연 암호화 아미노산을 함유하는 액상 영양 배지 중에서, 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH를 생산할 수 있는 재조합 숙주 세포를 배양하는 단계; (B) 상기 세포에 의한, 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH의 생산을 유도하는 단계; (C) HGH-PEG 컨쥬게이트를 형성하기에 충분한 조건 하에, 비천연 암호화 아미노산을 포함하는 HGH와 유도체화된 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 반응시키는 단계; 및(D) 상기 HGH-PEG 컨쥬게이트를 정제하는 단계를 포함하는 방법.
발명자의 다른 특허 :
연구과제 타임라인
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이 특허에 인용된 특허 (1)
[국제]
IN VIVO INCORPORATION OF UNNATURAL AMINO ACIDS |
SCHULTZ PETER,
WANG LEI,
ANDERSON JOHN CHRISTOPHER,
CHIN JASON W K,
LIU DAVID R,
MAGLIERY THOMAS J,
MEGGERS ERIC L,
MEHL RYAN AARON,
PASTRNAK MIRO,
SANTORO STEPHEN WILLIAM,
ZHANG ZHIWEN
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