초록

본 발명은 재조합 대장균으로부터 재조합 단백질을 별도의 활성화 공정 없이 변형체를 포함하지 않으면서 고수율 및 고순도로 정제하는 방법에 관한 것으로, 재조합 단백질을 페리플라즘 내에서 발현하는 재조합 대장균으로부터 재조합 단백질을 고수율 및 고순도로 정제하는 방법에 관한 것이다.

대표청구항 ▼

(i) 목적하는 재조합 단백질을 페리플라즘 내로 발현하는 분리된 재조합 대장균 균체에 수크로즈가 함유된 완충용액을 가한 후, 원심분리 또는 마이크로필터를 수행하여 세포 침전물을 수득하고, 상기 세포 침전물에 수크로즈가 함유된 완충용액에 비해 삼투압이 낮은 용액을 처리하여, 페리플라즘 단백질을 포함하는 추출액을 수득하는 단계;(ii) 상기 (i) 단계에서 수득한 추출액에 염 또는 카오트로픽 제제 (chaotropic agent)를 첨가하여 원심분리 또는 마이크로필터를 수행하여 페리플라즘 단백질을 포함하는 상등액을 수득하는 단계; (i

(i) 목적하는 재조합 단백질을 페리플라즘 내로 발현하는 분리된 재조합 대장균 균체에 수크로즈가 함유된 완충용액을 가한 후, 원심분리 또는 마이크로필터를 수행하여 세포 침전물을 수득하고, 상기 세포 침전물에 수크로즈가 함유된 완충용액에 비해 삼투압이 낮은 용액을 처리하여, 페리플라즘 단백질을 포함하는 추출액을 수득하는 단계;(ii) 상기 (i) 단계에서 수득한 추출액에 염 또는 카오트로픽 제제 (chaotropic agent)를 첨가하여 원심분리 또는 마이크로필터를 수행하여 페리플라즘 단백질을 포함하는 상등액을 수득하는 단계; (iii) 상기 (ii) 단계에서 수득한 상등액을 소수성 상호작용 컬럼 크로마토그래피에 적용하여, 목적하는 재조합 단백질을 포함하는 분획물을 용출하는 단계; 및(iv) 상기 (iii) 단계의 소수성 상호작용 컬럼 크로마토그래피에서 용출된 분획물을 이온 교환 크로마토그래피에 적용하는 단계를 포함하는, 목적하는 재조합 단백질의 정제 방법.