초록 ▼

본 년도 연구과제는 GLP 임상병리학적 평가기술의 확립을 위한 혈액 및 조직학적 기초자료 확보, 시험물질 투여 후 표적장기에 대한 분자생물학적 독성평가확립, 신경행동학적 지표의 계량화 확립을 위한 원숭이 일내 케이지내 행동량 측정 및 일내 행동량 주기성 확보 그리고 전용의자 구속후 스트레스 호르몬(코티졸) 변화정도의 파악을 연구목표로 설정하였다. 72마리의 수컷 동물(female 64마리)에서 WBC (White blood cell count), RBC (Red blood cell count), HGB (Hemoglobin conc

본 년도 연구과제는 GLP 임상병리학적 평가기술의 확립을 위한 혈액 및 조직학적 기초자료 확보, 시험물질 투여 후 표적장기에 대한 분자생물학적 독성평가확립, 신경행동학적 지표의 계량화 확립을 위한 원숭이 일내 케이지내 행동량 측정 및 일내 행동량 주기성 확보 그리고 전용의자 구속후 스트레스 호르몬(코티졸) 변화정도의 파악을 연구목표로 설정하였다. 72마리의 수컷 동물(female 64마리)에서 WBC (White blood cell count), RBC (Red blood cell count), HGB (Hemoglobin concentration), HCT (Hematocrit), MCV (Mean corpuscular volume), MCH (Mean corpuscular hemoglobin), MCHC (Mean corpuscular hemoglobin concentration), Platelet, Differential leucocyte count, Reticulocyte count 등 혈액학적 검사결과를 제시하였다. 혈청에서 AST(Aspartate aminotransferase), ALT Alanine aminotransferase), ALP(Alkaline phosphatase), GLU(Glucose), TP(Total protein), BUN(Blood urea nitrogen), CREA(Creatinine), TG(Triglyceride), PL-E(Phospholipid), T-CHO(Total cholesterol), T-BIL(Total bilirubin), A/G(Albumin Globulin ratio), ALB(Albumin), CPK(Creatine phosphokinase), IP(inorganic phosphorous), Ca (Calcium), Cl (Chloride), Na (Sodium), K (Potassium) 등 혈액생화학적 검사결과를 제시하였다. 또한 조직병리소견에 있어 특히 폐의 색소침착, 간, 신장, 심장, 타액선의 염증세포 침윤이 관찰되었다. 또한 고환, 부고환, 전립선 및 정낭은 거의 미성숙 소견을 나타내었다. 또한 표적장기에 대하여 2-DE기법을 적용하여 비장에서 분리된 단백질들은 acid 혹은 basic한 범위에서 특정 단백질들이 다량으로 존재하는 것을 확인함으로써 비장내 단백질들의 발현변화를 통한 분자생물학을 이용한 독성평가기술을 확립하였다. 또한 신경행동학적 평가에 있어 케이지내 주간과 야간에 행동량은 수컷에 있어 90.86% (L): 9.14%(D)이었으며 암컷에 있어 83.16%(L) : 16.83%(D)이었다. 주간의 행동량은 수컷이 암컷보다 더 많으며 야간의 행동량은 암컷이 수컷보다 더 많았다. 또한 4일간의 총 행동량은 수컷을 100%로 기준으로 볼 때 암컷은 약 1.5배가 더 많음이 관찰되었다. 또한 행동량을 주간과 야간으로 나누어 4일간 관찰하여 그 주기성을 관찰한 결과, 앞서 서술한 바와 같이 주간이 일내 총 행동량에서 수컷은 83.16% 및 90.86% 정도로 차지하였고 또한 그 주기성이 있음이 관찰되었다. 각간의 행동량에 있어 갑작스런 피크는 청소 및 사육관리를 위한 출입과 관련성이 있는 것으로 판단된다. 행동구속에 대한 스트레스 호르몬(코티졸)의 변화에 있어 monkey chair 구속 첫째 주에 1일째 2시간 동안 구속한 암수컷의 코티졸 측정치가 30분 구속한 측정치에 비해 통계학적 유의성있게 증가하였다. 또한 이후 수컷의 구속 4일째 및 5일째까지 2시간 동안 구속한 코티졸의 측정치가 구속 1일째 측정치에 비해 통계학적 유의성있게 감소하였으나 암컷은 유의성있는 변화가 관찰되지 않았다. 구속 둘째주에 있어 구속 1일째에 2시간 동안 구속한 암컷의 코티졸 측정치가 30분 구속한 측정치에 비해 통계학적 유의성있게 증가하였다. 수컷은 구속 4일째 및 5일째 2시간 동안 구속한 측정치가 구속 1일째 측정치에 비해 유의성있게 감소하였고, 암컷은 구속 4일째 및 5일째에 30분 및 2시간 동안 구속한 코티졸 측정치가 구속 1일째 측정치에 비해 유의성있게 감소하였다. 이러한 연구결과는 최근 바이오의약품 등 신약이 개발에 따른 원숭이를 이용한 유효성 및 독성평가의 수요도 급증하고 있는 시점에 있어 국내 원숭이를 이용한 독성평가에 꼭 필요한 정상적 생리학적 기초자료로 활용할 수 있는 자료이다. 따라서 원숭이에서의 혈액 및 조직학적 기초자료 의 범위, 행동학적 지표 및 스트레스 호르몬의 기초자료를 확보함으로써 과제의 1단계 일반독성평가기술을 확립하였다.

Abstract ▼

The purposes ofthe this year research wereto establish GLP-compliant clinical pathology evaluation method, molecular biological toxicology evaluation method for target organ following treatment, and assessment system of neurobehavioral parameter such as locomotion in cage during day, cyclicity of lo

The purposes ofthe this year research wereto establish GLP-compliant clinical pathology evaluation method, molecular biological toxicology evaluation method for target organ following treatment, and assessment system of neurobehavioral parameter such as locomotion in cage during day, cyclicity of locomotion, and changes of stress hormone (cortisol) in monkey restrained in monkey chair. In hematology, parameters included WBC (White blood cell count), RBC (Red blood cell count), HGB (Hemoglobin concentration), HCT (Hematocrit), MCV (Mean corpuscular volume), MCH (Mean corpuscular hemoglobin), MCHC (Mean corpuscular hemoglobin concentration), Platelet, Differential leucocyte count, Reticulocyte count. In serum chemistry, parameters included AST(Aspartate aminotransferase), ALT(Alanine aminotransferase), ALP (Alkaline phosphatase), GLU(Glucose), TP(Total protein), BUN(Blood urea nitrogen), CREA (Creatinine), TG(Triglyceride), PL-E(Phospholipid), T-CHO(Total cholesterol), T-BIL (Total bilirubin), A/G(Albumin Globulin ratio), ALB(Albumin), CPK(Creatine phosphokinase), IP(inorganic phosphorous), Ca (Calcium), Cl (Chloride), Na (Sodium), K (Potassium). Pigmentation of lungs, inflammatory cell infiltration of liver, kidneys, heart and salivary gland were observed in histopathology. Testes, epididymes, prostate and seminal vesicle appeared to be immature. In addition, the identification of specific proteins that is within acidic or basic range in proteins purified from spleen using 2-DE method was applied for toxicological evaluation method using molecular biology technique. In neurobehavioral evaluation, locomotor activity in the light and dark period in cage were 90.89% (L) : 9.14% (D) in males and 83.16% (L) : 16.83% (D) in females, respectively. The locomotor activity in light period was greater in males than females. Conversely, the locomotor activity in dark period was greater in females than males. From the observation for 4-days, the total locomotor activity in females was appeared to be 1.5 times greater than males. The cyclicity of locomotor activity in light period and dark period for 4 days showed 83.16% and 90.86% in males. The sudden peak in the profile of locomotor activity was considered to be related with cleaning and housing. There was a significant increase in cortisol level in monkeys restrained in monkey chair for 2 hours on Day 1 of first week compared with monkeys restrained for 30 minutes. Additionally, Males restrained in monkey chair for 2 hour on day 4 and day 5 showed a significant decrease in cortisol level compared with that of Day 1, while females did not show any change. In second week, females restrained for 2 hours in monkey chair on Day 1 showed significant increases in cortisol levels compared with those restrained for 30 min. Males restrained in monkey chair for 2 hour on day 4 and 5 showed a significant decrease in cortisol level compared with those of Day 1. Females restrained in monkey chair for 30 minute or 2 hours also showed significant decreases in cortisol level compared with those of Day 1. These results could be used as valuable and basic physiological data because the use of non-human primates are increasing in the safety/efficacy evaluation of newly developed drug including biotechnology-derived substances. Taken together, assessment methods for general toxicology were established through obtaining physiological basic data such as hematology, histology, neurobehavioral parameters (locomotor activity and cyclicity) and stress hormone (cortisol) in monkey.

목차 Contents

• 용역연구사업 연구결과보고서...1
• 제출문...2
• I. 연구결과보고서 요약문...3
• 1. 국문요약문...3
• 2. SUMMARY...4
• II. 총괄연구개발과제 연구결과...5
• 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...5
• 1.1 총괄연구개발과제의 목표...5
• 1.2 총괄연구개발과제의 목표달성도...6
• 1.3 국내.외 기술개발 현황...7
• 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법...9
• 1. 독성평가를 위한 GLP 임상병리학적 평가기술 확립...9
• 2. 신경행동학적 지표의 계량화 확립...18
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과...21
• 1. 독성평가를 위한 GLP 임상병리학적 평가기술 확립...21
• 2. 신경행동학적 지표의 계량화 확립...38
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...43
• 1. 독성평가를 위한 GLP 임상병리학적 평가기술 확립...43
• 2. 신경행동학적 지표의 계량화 확립...45
• 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과...47
• 5.1 활용성과...47
• 5.2 활용계획...48
• 제6장 기타 중요변경사항...48
• 제7장 참고문헌...49
• 제8장 첨부서류...51
• 총괄 연구과제 요약...52
• III. 위탁연구개발과제 연구결과...55
• 제1장 위탁연구개발과제의 최종 연구개발 목표...56
• 1.1 위탁연구개발과제의 목표...56
• 1.2 세부연구개발과제의 목표달성도...57
• 1.3 국내.외 기술개발 현황...57
• 제2장 세부연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법...59
• 1.1 연구내용...59
• 1.2. 연구방법...59
• 제3장 위탁연구개발과제의 최종 연구개발 결과...64
• 제4장 위탁연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...68
• 제5장 위탁연구개발과제의 연구성과...69
• 5.1 활용성과...69
• 5.2 활용계획...70
• 제6장 기타 중요변경사항...70
• 제7장 참고문헌...70
• 제8장 첨부서류...71
• 세부 연구과제 요약...72