초록 ▼

본 과제에서는 유산균발현시스템을 이용하여 항원을 유산균 표면에 발현시켜서 백신소재를 개발하고자 하므로, 재조합 단백질의 복잡한 공정을 거치지 않고 백신 단가가 훨씬 저렴하고 운반, 저장 등이 쉽고, 경구백신이기 때문에 투여가 매우 간편하고, 유산균 자체가 면역능을 증가시키는 adjuvant 활성이 있으므로 따로 adjuvant를 사용할 필요가 없는 자궁경부암 복합백신을 개발하고자 하였다. 따라서 예방 면역능이 확인된 capsid 항원인 L1과 L2, 치료백신으로 이용되는 E7등을 유산균 표면에 각각 따로 발현시킨 후에 혼합사용하면

본 과제에서는 유산균발현시스템을 이용하여 항원을 유산균 표면에 발현시켜서 백신소재를 개발하고자 하므로, 재조합 단백질의 복잡한 공정을 거치지 않고 백신 단가가 훨씬 저렴하고 운반, 저장 등이 쉽고, 경구백신이기 때문에 투여가 매우 간편하고, 유산균 자체가 면역능을 증가시키는 adjuvant 활성이 있으므로 따로 adjuvant를 사용할 필요가 없는 자궁경부암 복합백신을 개발하고자 하였다. 따라서 예방 면역능이 확인된 capsid 항원인 L1과 L2, 치료백신으로 이용되는 E7등을 유산균 표면에 각각 따로 발현시킨 후에 혼합사용하면 예방 및 치료능을 가진 복합백신으로 용이하게 사용할 수 있으므로 다른 항원이 발현된 유산균을 혼합 사용하여 다가 백신 (multivalent vaccine) 후보물질을 개발 및 생산 하고자 아래와 같은 연구 내용을 수행 하였다.
$\circ$ 유산균 표면발현 벡터 (pHCE1LB)에 HPV16항원 L1, L2,E7을 클로닝
$\circ$ HPV16항원 L1, L2, E7의 발현 확인
$\circ$ 유산균 표면발현된 HPV16항원 L1,L2,E7의 humoral mucosal immunity (IgA, IgG) 분석
$\circ$유산균 표면발현된 HPV6항원 L1, E7의 cellular immunity 분석
$\circ$유산균 표면발현된 HPV16항원 E7의 암세포 challlenge 반응 연구
$\circ$ 유산균 표면발현된 HPV16항원 E7의 세포성 점막면역 연구
$\circ$ HPV16 항원의 표면 발현을 증가를 위한 연구 및 표면발현 유산균 배양조건 최적화
$\circ$ 유산균 균주별 면역능 증진 효과 분석에 의한 최적 균주 선별
$\circ$ 재조합 유산균주의 대량생산 및 산업화 준비 연구 수행

Abstract ▼

The mounting of a specific immune response against the human papillomavirus type 16 E7 protein (HPV16 E7) is important for eradication of HPV16 E7-expressing cancer cells from the cervical mucosa. To induce a mucosal immune response by oral delivery of the E7 antigen, we expressed the HPV16 E7 antig

The mounting of a specific immune response against the human papillomavirus type 16 E7 protein (HPV16 E7) is important for eradication of HPV16 E7-expressing cancer cells from the cervical mucosa. To induce a mucosal immune response by oral delivery of the E7 antigen, we expressed the HPV16 E7 antigen on the surface of Lactobacillus casei by employing a novel display system in which the poly-g-glutamic acid (g-PGA) synthetase complex A (PgsA) from Bacillus subtilis (chungkookjang) was used as an anchoring motif. After surface expression of the HPV16 E7 protein was confirmed by Western blot, flow cytometry, and immunofluorescence microscopy, mice were orally inoculated with L. casei-PgsA-E7. E7-specific serum IgG and mucosal IgA productions were enhanced after oral administration and significantly enhanced after boosting. Systemic and local cellular immunities were significantly increased after boosting, as shown by increased counts of Lymphocytes (SI=9.71.8) and IFN-g secreting cells [51086 spot-forming cells $(SFC)/10^6cells$] among splenocytes and increased IFN-g in supernatants of vaginal lymphocytes. Furthermore, in an E7-based mouse tumor model, animals receiving orally administered L. casei-PgsA-E7 showed reduced tumor size and increased survival rate versus mice receiving control (L. casei-PgsA) immunization. These results collectively indicate that the oral administration of E7 displayed on lactobacillus induces cellular immunity and anti-tumor effects in mice.

목차 Contents

• 표지...1
• 제출문...2
• 보고서 초록...3
• 요약문...4
• SUMMARY...5
• CONTENTS...6
• 1. Introduction...7
• 2. Current HPV Vaccine Technology...11
• 3. Methods and Results...13
• 4. Discussion (The Attainment of Goal)...43
• 5. Application...49
• 6. Related Technical Information...51
• 7. References...53