초록 ▼

현재 대부분의 체외 진단키트 제조사들은 진단키트의 검정이나 품질관리를 위해 국제표준품이나 상용화된 표준패널을 사용하고 있다. 이들 물질들은 가격이 고가이고 사용량에 제한이 따르며 국내에서 유행하는 B형간염 바이러스(hepatitis B virus, HBV)의 genotype과 subtype을 반영하지 못하는 한계가 있다. 진단키트의 민감도를 평가하기 위해서는 저역가 검체를 사용하는 것이 중요하나 이들 검체를 확보하는 것은 매우 어렵다. 본 연구에서는 HBV 진단키트 품질관리를 위한 국내에서 유행하는 HBV의 특성이 반영되고 농도가

현재 대부분의 체외 진단키트 제조사들은 진단키트의 검정이나 품질관리를 위해 국제표준품이나 상용화된 표준패널을 사용하고 있다. 이들 물질들은 가격이 고가이고 사용량에 제한이 따르며 국내에서 유행하는 B형간염 바이러스(hepatitis B virus, HBV)의 genotype과 subtype을 반영하지 못하는 한계가 있다. 진단키트의 민감도를 평가하기 위해서는 저역가 검체를 사용하는 것이 중요하나 이들 검체를 확보하는 것은 매우 어렵다. 본 연구에서는 HBV 진단키트 품질관리를 위한 국내에서 유행하는 HBV의 특성이 반영되고 농도가 낮은 검체로 구성된 표준패널을 확립하고자 하였다.
대한적십자사 혈액원 선별검사에서 양성결과를 보이는 혈액 중 효소면역검사(enzyme immunoassay, EIA) 결과 흡광도 값(O.D.) 1.0 이하의 혈액 371단위와 화학발광면역검사법(chemiluminescence, CIA) 결과 S/C 10.0 이하로 낮은 역가를 보이는 혈액 105단위, 총 476단위의 양성혈액을 수집하였다. 모든 혈액에 대하여 선별검사로 EIA 3종, CIA 1종 총 4종의 시약을 이용하여 선별검사를 실시하였다. 선별검사 결과 CIA 검사에서 양성이거나 2종 이상의 검사시약에서 양성결과를 보이는 혈액 78단위를 선별하여 HBV DNA 정량검사, HBV genotyping 그리고 subtyping을 실시하였다. HBV DNA 정량검사결과 양성인 혈액에 대하여 중화검사를 실시하여 최종양성을 확인하였다. 저농도 후보물질 선별을 위해 상업용 저농도 패널에 대한 각 시약의 반응도를 확인하였다. 검사결과를 바탕으로 저농도 HBsAg 양성후보물질 13단위와 HBsAg 음성인 혈액 2단위를 포함하여 15단위의 후보물질을 선별하였다. 선정된 후보물질에 대해 보존제 Bronidox를 첨가하여 패널을 제조하였다. 후보품에 대해서는 국내의료기관 검사실에서 많이 사용하고 있는 CIA 검사시약 2종, ECA 검사시약 1종, MEIA 1종, EIA 3종 등 7종의 검사시약을 사용하여 7개 검사기관에서 공동연구를 수행하였다. 공동연구결과 모든 시약에서 음성결과를 보이는 후보물질 2단위와 HBsAg 농도가 낮은 저역가의 양성 후보물질 11단위를 포함하여 총 13개의 표준패널을 선정하였다. 11개의 양성패널은 HBsAg의 평균 S/C값이 10.0 이하 HBsAg 평균농도 1.0 IU/mL 이하로 구성되었다. 확립된 패널은 HBV genotype C, subtype adr인 검체로 구성되었다.
본 연구결과 국내 HBV genotype과 subtype이 반영된 저농도 HBsAg 표준패널을 확립하였으며 HBV 진단키트 품질관리를 위한 품질관리물질로 활용될 수 있을 것이다.

Abstract ▼

Currently International Standards or commercially available reference panels are used for the validation or quality assessment of Korean in-vitro diagnostic medical devices. However, due to their high cost and limited quantity a sustainable supply cannot be guaranteed. Also, these materials might no

Currently International Standards or commercially available reference panels are used for the validation or quality assessment of Korean in-vitro diagnostic medical devices. However, due to their high cost and limited quantity a sustainable supply cannot be guaranteed. Also, these materials might not reflect the viral characteristics common in Korea. This study was conducted to establish a low titer performance panel for quality control of HBV diagnostic kits.
371 plasma units with OD values less than 1.0 on EIA screening and 105 units with S/C ratio less than 10.0 on CIA were collected from Korean Red Cross blood centers. HBsAg testing with three EIA assays and one CIA assay was performed on all units. Units with reactive results on CIA or units that were reactive on more than two assays were further subjected to HBV DNA quantification, HBV genotyping and subtyping. Units reactive on HBV DNA quantification were confirmed with HBsAg neutralization test. To select candidate materials, the reactivity of a commercial low titer performance panel to various HBsAg assays was determined. Based on these results, 13 HBsAg positive units and two HBsAg negative units were selected as candidate materials. After addition of Bronidox as a preservative, the candidate materials were distributed into the final containers. Collaborative study was conducted using two CIA assays, one ECA assay, one MEIA assay, and three EIA assays. Based on the results of the collaborative study, 11 HBsAg positive units and two HBsAg negative units were selected to constitute the low titer performance panel. The mean S/C ratio and mean concentration of the HBsAg positive units was less than 10.0 and 1.0 IU/mL, respectively. The panel members were constituted with samples of genotype C and subtype adr.
As a result of this study, a low titer performance panel for quality control of HBV diagnostic kits has been established.

목차 Contents

• 연구결과보고서 ...1
• 표지 ...2
• 제출문 ...4
• 목차 ...5
• I. 연구결과보고서 요약문 ...6
• 한글요약문 ...6
• Summary ...8
• II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...10
• 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...10
• 1.1 총괄연구개발과제의 목표 ...10
• 1.2 총괄연구개발과제의 목표달성도 ...11
• 1.3 국내·외 연구동향 ...11
• 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ...14
• 2.1 HBV 저농도 표준패널 확보를 위한 선별검사 ...14
• 2.2 HBV Genotyping 및 Subtyping ...14
• 2.3 HBV DNA 정량검사 ...18
• 2.4 HBsAg 중화검사 ...18
• 2.5 HBV 염기서열 분석을 통한 변이형 연구 ...18
• 2.6 표준패널 후보 물질 선정 및 분병 ...20
• 2.7 표준패널 후보 물질에 대한 공동연구 및 안정성 평가 ...20
• 2.8 HBV 진단키트 품질관리 저농도 표준패널 확립 ...21
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ...22
• 3.1 HBV 저농도 표준패널 확보를 위한 선별검사 결과 ...22
• 3.2 HBV Genotyping & Subtyping ...23
• 3.3 HBV DNA 정량검사 ...24
• 3.4 HBV 중화검사 ...24
• 3.5 HBV 염기서열 분석을 통한 변이형 연구 ...25
• 3.6 표준패널 후보 물질 선정 및 분병 ...25
• 3.7 표준패널 후보물질에 대한 공동연구 ...26
• 3.8 HBV 진단키트 품질관리 저농도 표준패널 확립 ...28
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...29
• 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과 ...32
• 5.1 활용성과 ...32
• 5.2 활용계획 ...33
• 제6장 기타 중요변경사항 ...34
• 제7장 참고문헌 ...35
• III. 총괄 연구과제 요약 ...37