초록 ▼

1. 섬유아세포 4주의 5계대 이하(low passage: 1, 2, 3, 4))와 15계대 이상 (high passage: 1', 2')을 이용하여 시행하였음
2. 계획대로 세포 배양 시 피펫 등은 1회용으로 사용하고 있으며 시간을 정하여 같은 시간에 한 종류의 세포만을 다룸으로써 가능한 세포 간의 유전자 혼합을 예방하였음.
3. 계대별 세포 증식 및 독성 관찰 결과 (in vitro)
1) MTT assay
계대에 따른 세포 증식의 유의한 변화는 없는 것으로 관찰됨 (아래 그림 참고)
2) Ki67 면

1. 섬유아세포 4주의 5계대 이하(low passage: 1, 2, 3, 4))와 15계대 이상 (high passage: 1', 2')을 이용하여 시행하였음
2. 계획대로 세포 배양 시 피펫 등은 1회용으로 사용하고 있으며 시간을 정하여 같은 시간에 한 종류의 세포만을 다룸으로써 가능한 세포 간의 유전자 혼합을 예방하였음.
3. 계대별 세포 증식 및 독성 관찰 결과 (in vitro)
1) MTT assay
계대에 따른 세포 증식의 유의한 변화는 없는 것으로 관찰됨 (아래 그림 참고)
2) Ki67 면역조직화학 검사
계대에 따른 세포 증식 표지자로 Ki67의 발현정도를 비교한 결과 계대에 따른 유의한 차이는 없는 것으로 관찰됨 (아래 그림 참고)
3) TUNEL assay
계대에 따른 세포 사멸을 관찰한 결과 계대에 따른 유의한 차이는 없는 것으로 관찰됨 (아래 그림 참고)
4) Western Blotting
계대에 따른 세포 사멸을 관찰하기 위해 세포 사멸에 관련된 단백질 중 caspase-3, 8, 9와 인산화 p38을 관찰한 결과 caspase-3, 8, 9의 잘려진 조각은 발견되지 않았으며 p38의 인산화도 관찰되지 않았음 (아래 그림 참고)
5) Comet assay
유전자 독성을 계대별로 관찰한 결과 유의한 차이는 없는 것으로 확인됨 (아래 그림 참고)
6) Mycoplasma 검사
PCR로 확인한 결과 검출된 감염균은 없었음
7) 세포 주기 (cell cycle) 검사
낮은 계대와 높은 계대의 세포를 PI (Propidium iodide)으로 염색한 후 FACS를 이용하여 세포주기를 비교한 결과 높은 계대의 세포가 낮은 계대세포에 비해 G2 arrest된 세포가 30.4% 증가하였다 (그림 참고)
4. 배양한 섬유아세포 동물 이식 (in vivo)
배양된 세포의 안전성과 효력을 평가하기 위해 6마리Sprague-Dawley rat의 dermis에 각각 낮은 계대 3개와 높은 계대 3개의 세포(1x107개)를 주입한 후 2주 후에 이식된 쥐의 피부, 간, 비장을 분리하여 임상적 및 조직학적 염증반응을 관찰하였다.
1) 임상적 조직학적 염증 반응 관찰
육안으로 본 결과 6마리 모두에서 이식된 피부조직에 임상적 염증반응인 홍반이나 부종 등의 피부증상은 관찰되지 않았으며, 조직학적 염증반응은 H&E 염색 후 염증세포의 침윤정도, 위치 및 종류 등을 조사한 결과 아무런 염증 반응이 관찰되지 않았다. 간과 비장에서도 임상적 조직학적 염증반응이 관찰되지 않았다 (그림 참조).
2) 이식된 세포의 생존과 사멸정도를 관찰
배양된 섬유아세포를 미리 Brdu로 labeling 해서 쥐의 피부조직에 주입한 후 이식된 쥐의 피부조직을 분리해서 anti-Brdu antibody 로 면역염색한 결과 세포의 계대에 따라 차이를 보였다. 낮은 계대의 세포는 Brdu 염색이 강하게 보이는 반면 높은 계대의 세포는 Brdu가 염색된 세포의 수가 현저히 줄었다.

목차 Contents

• 용역연구사업 연차 실적.계획서 ...1
• 표지 ...2
• 연구과제제안서(RFP) ...4
• 제출문 ...5
• 목차 ...6
• □ 당해년도 연구개발사업 실적 ...7
• 1. 연구개발과제의 최종 연구개발목표와 당해년도 연구개발목표 ...7
• 2. 연구개발과제의 당해년도 연구개발내용 ...8
• 3. 연구개발과제의 당해년도 연구성과 ...10
• 4. 연구수행에 따른 문제점 및 대책 ...11
• 5. 실적요약문 ...12
• □ 차년도 연구개발사업 계획 ...19
• <총괄연구과제> ...20
• 1. 요약문 ...20
• 2. 연구개발비 총괄표 ...21
• 3. 연구책임자 인적사항 및 연구개발실적 (변경된 경우만 작성) ...29
• 4. 참여연구원 편성표 ...31
• 5. 총괄연구과제의 차년도 연구개발목표 ...33
• 6. 총괄연구과제의 차년도 연구개발계획 ...34
• 7. 연차별 연구수행일정 ...36
• 8. 첨부서류 ...37
• <제0세부연구과제> ...38
• 1. 요약문 ...39
• 2. 차연도 연구개발비 총괄표 (세부과제) ...40
• 3. 제0세부연구과제의 차년도 연구개발목표 ...43
• 4. 제0세부연구과제의 차년도 연구개발계획 ...43
• 5. 첨부서류 ...43