보고서 정보
주관연구기관 |
건양대학교 KonYang University |
연구책임자 |
이회영
|
참여연구자 |
유영춘
,
박창교
,
이장순
,
윤성영
,
박준홍
,
안재형
|
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
|
발행년월 | 2003-11 |
과제시작연도 |
2003 |
주관부처 |
식품의약품안전청 |
사업 관리 기관 |
식품의약품안전청 Korea Food & Drug Administration |
등록번호 |
TRKO201000016474 |
과제고유번호 |
1470000982 |
사업명 |
식품의약품안전성관리 |
DB 구축일자 |
2013-04-18
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키워드 |
DNA백신.항암활성.면역조절.세포성 면역.DNA vaccine.antitumor activity.immune modulation.cellular immunity.
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초록
▼
DNA 백신은 항원 단백질을 발현하는 유전자를 체내에 투여함으로써 항원에 대한 면역반응을 유도하는 것으로 박테리아에 의한 감염뿐만 아니라 간염 B 바이러스, AIDS, 암치료에도 영역을 넓혀가고 있는 상황이다. 특히, DNA 백신을 암백신으로 응용하면 강력한 면역반응이 장기간 지속되고 유해물질의 오염이 없어 안전하며 간단하고 quality control이 용이하다는 장점들이 있다. 그러나 외국에서는 DNA 백신이 임상에 활발이 적용되고 있는 데에 반하여 국내에서는 아직 DNA 암백신의 개발과 효능평가에 대한 지침이 미흡한 상황이다.
DNA 백신은 항원 단백질을 발현하는 유전자를 체내에 투여함으로써 항원에 대한 면역반응을 유도하는 것으로 박테리아에 의한 감염뿐만 아니라 간염 B 바이러스, AIDS, 암치료에도 영역을 넓혀가고 있는 상황이다. 특히, DNA 백신을 암백신으로 응용하면 강력한 면역반응이 장기간 지속되고 유해물질의 오염이 없어 안전하며 간단하고 quality control이 용이하다는 장점들이 있다. 그러나 외국에서는 DNA 백신이 임상에 활발이 적용되고 있는 데에 반하여 국내에서는 아직 DNA 암백신의 개발과 효능평가에 대한 지침이 미흡한 상황이다. 따라서 본 연구는 임상현장에서 발생할 수 있는 문제점과 DNA 암백신에 대한 약리학적 평가기술을 개발함으로써 DNA 암백신의 효능평가에 대한 기술과 규정을 확립하고자 하였다. 총 3년으로 계획된 본 연구는 일차년도에 항암 DNA 백신용 vector 제조법을 확립하고 in vitro 실험법을 통하여 DNA vector를 스크리닝 하고자 하였다. 또한 DNA 백신의 효능평가에 필요한 실험법으로써 T cell proliferation assay, cytokine production assay, CTL 및 DTH 등 면역학적 실험법을 확립하고, 마우스를 이용한 암전이 모델, 혈관신생모델 및 종양증식 실험 등 in vivo 항암실험법을 확립하였다. 본 연구에서 얻어진 결과를 요약하면 다음과 같다.
1. VDGF 수용체(FLK-1)를 encoding하는 DNA백신의 제조 시스템을 구축하였으며, FLK-1항원의 제조법와 생화학적 동정법을 확립하였다.
2. 마우스를 이용한 항종양 활성의 스크리닝법을 확립하기 위하여, B16-BL6과 colon 26 암세포에 의한 2종류의 폐전이 모델(자연전이모델과 실험적 전이모델)을 확립하였으며, 종양세포(B16-BL6)에 의해 유도되는 혈관신생의 억제효과를 판정할 수 있는 tumor-induced angiogenesis실험법을 구축하였다. 또한 종양의 증식억제를 in vivo에서 측정할 수 있는 실험법을 개발하였다.
3. 면역학적 작용기전의 해석에 필요한 실험법으로서 CTL assay, DTH반응, T세포 활성화 분석법 등 in vivo 및 in vitro실험법을 확립하여, 동물실험에서 얻어진 항종양 활성을 면역학적 관점에서 해석하였다.
4. 상기의 실험법을 통해 DNA백신을 투여함으로서 종양의 전이를 예방적 및 치료적 차원에서 억제하는 것으로 확인되었으며, 이러한 DNA백신의 항암활성은 T세포에 의한 세포성 면역기구의 증가뿐만 아니라 종양관련 항원에 대한 체액성 면역의 향상에 기인하는 것으로 밝혀졌다.
Abstract
▼
The DNA vaccines are simple rings of DNA containing a gene encoding an antigen, and a promoter/terminator to make the gene express in mammalian cells. They are a promising new approach for various infections by bacteria, hepatitis B virus, AIDS, and cancer through generating all types of desired imm
The DNA vaccines are simple rings of DNA containing a gene encoding an antigen, and a promoter/terminator to make the gene express in mammalian cells. They are a promising new approach for various infections by bacteria, hepatitis B virus, AIDS, and cancer through generating all types of desired immunity: cytolytic T lymphocytes (CTL), T helper cells and antibodies. While clinical implications of DNA vaccines have been actively and effectively applied to the cancer patients throughout the world, research and development concerning cancer DNA vaccine in Korea underdeveloped. Therefore, this research is focused to develop techniques and pharmacological effects of cancer DNA vaccine that can be used in the clinical field near future. Our research is planed for 3 years, and we have set the goal for first year with designing cloning and in vitro screening methods of cancer DNA vaccines. Furthermore, we have tried to develop T cell proliferation assay, macrophage-mediated tumoricidal activity assay, CTL assay, and in vivo tumoricidal and antimetastatic methods for pharmacological evaluation of cancer DNA vaccines. We have cloned cDNA of murine vascular endothelial growth factor receptor 2 (VEGFR2, also known as FLK-1) from mouse embryo cells and cDNA of HER-2/neu from human breast cancer cell line MDA-MB-435 through variation of several RT-PCR condition. In order to isolate FLK-1 antigen for immunological reaction assay, FLK-1 cDNA was transfected into Cos-1, B16-BL6 or EL-4 cells, and these cells were used as target cells for CTL assay. For the analysis of antitumor activity of the DNA vaccines, we established various experimental in vivo systems using mice to examine lung metastasis, tumor-induced angiogenesis and tumor growth. Furthermore we analyzed immunological mechanisms related to antitumor activity of the DNA vaccines, and found that the DNA vaccines significantly enhanced antigen-specific CTL activity, DTH reaction and cytokine production from T lymphocytes. In addition to the cellular immune responses, the DNA vaccines was able to augment humoral immune response like antigen-specific antibody responses. In this study, we demonstrated the availability of the DNA vaccines for cancer immunotherapy, and suggested the experimental systems needed for evaluation of their efficacy.
목차 Contents
- 용역연구개발사업최종보고서 ...1
- 제출문 ...2
- 연구사업 최종보고서 요약문 ...3
- Project Summary ...4
- 목차 ...5
- 제1장 서론 ...6
- 제2장 국·내외 기술 개발 현황 ...8
- 제3장 연구개발 수행 및 결과 ...8
- 가. 연구내용 ...9
- 나. 실험적 접근방법 ...10
- 다. 연구결과 ...13
- 제4장 연구개발 목표 달성도 및 대외 기여도 ...21
- 가. 연구개발목표 달성도 ...21
- 나. 대외기여도 ...21
- 제5장 연구개발 결과의 활용성과 및 계획 ...23
- 가. 계량적 성과 ...23
- 나. 성과내용기술 ...23
- 다. 활용계획 ...23
- 제6장 기타 중요변경사항 ...24
- 제7장 참고 문헌 ...24
- 총괄 연구과제 요약 ...26
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