초록 ▼

본 연구는 제주 재래감률인 당유자의 기능성 규명을 위해 시기별, 부위별로 각각 과일과 잎에 대해 계통별 용매추출을 수행하고 다양한 용매 분획물을 확보한 후 각 분획물의 생리활성을 탐색한다.
1. 당유자의 기능성 규명을 위한 생리활성 검사
○ 기존문헌 특허분석을 통한 토종감귤 당유자의 기능성 조사한다
○ 시기별, 부위별 다양한 추출물을 확보하고 당유자 조추출물에 대해 항산화, 항염증, 항암효능 등의 다양한 생리활성을 탐색한다.
2. 당유자의 부위별, 시기별 추출물의 생리활성 성분 분석
○ 생리활성 보유한 당

본 연구는 제주 재래감률인 당유자의 기능성 규명을 위해 시기별, 부위별로 각각 과일과 잎에 대해 계통별 용매추출을 수행하고 다양한 용매 분획물을 확보한 후 각 분획물의 생리활성을 탐색한다.
1. 당유자의 기능성 규명을 위한 생리활성 검사
○ 기존문헌 특허분석을 통한 토종감귤 당유자의 기능성 조사한다
○ 시기별, 부위별 다양한 추출물을 확보하고 당유자 조추출물에 대해 항산화, 항염증, 항암효능 등의 다양한 생리활성을 탐색한다.
2. 당유자의 부위별, 시기별 추출물의 생리활성 성분 분석
○ 생리활성 보유한 당유자 부위별 추출물의 활성 성분 도출하기 위한 계통적 용매 추출을 실시하고 각 분획물의 생리 활성을 탐색한다.
○ 활성 성분 규명을 위한 당유자의 전처리 조건 및 HPLC 분석 조건 확립을 통하여 flavonoid 및 limonoid 성분을 분석한다.
○ LC/MS, GC/MS 분석 조건을 최적화하고 생리활성 보유한 용매분획물의 조성을 규명한다.
3. 당유자의 생리활성 성분을 활용한 가공제품 개발
○ 당유자 추출물 함유한 건강음료 개발을 위한 생과즙 함유 시제품을 제작하고 소비자의 기호도를 조사한다.

Abstract ▼

The flavonoid contents of dangyuja (Citrus grandis Osbeck) were measured during fruit growth and maturation by HPLC and liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS). The contents of flavonoids in peel decreased gradually throughout the growth and the highest concentration hesperidin, neohesperidi

The flavonoid contents of dangyuja (Citrus grandis Osbeck) were measured during fruit growth and maturation by HPLC and liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS). The contents of flavonoids in peel decreased gradually throughout the growth and the highest concentration hesperidin, neohesperidin, naringin was observed in immature fruits. Among the sequential solvent fractions obtained from crude extracts, hexane and chloroform fractions showed potential inhibitory activity on the mRNA expression of IL-6, iNOS and COX-2 at the concentration of 100 ug/mL, in RAW264.7 cells. EtOAc fraction showed inhibitory activity on the thymus and activation-regulated chemokine and macrophage-derived chmokine in HaCaT cells.
Crude extract of young dangyuja (Citrus grandis Osbeck) fruit was investigated for its antioxidant activity as measured by 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) free radical scavenging activity. Among the samples, including 4 Citrus species and various solvent-extracted-fractions of young dangyuja fruit, the water-extracted fraction (WF) and butanolextracted fraction (BF) showed the greatest DPPH free radical scavenging activity. WF and BF were further examined for their antioxidant activities by three different in vitro assays. The cell viability tests using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide (MTT) reduction assay showed that both fractions significantly reduced $H_2O_2$,-induced cytotoxicity in HepG2 cells dose-dependently. Generation of the reactive oxygen species (ROS) was also reduced in cells pretreated with both fractions. In addition, BF showed a higher level of lipid peroxidation inhibitory capacity than water fraction in $H_2O_2$-treated HepG2 cells. Taken together, these results indicate that young dangyuja fruit can be used as an easily accessible source of natural antioxidants.
The antioxidant activities of the extracts of Citrus grandis Osbeck leaves were also evaluated. The highest phenolic content was obtained from the ethyl acetate fraction (EF) (202.1 $\pm$ 0.8 mg GAE/g dried extract) and it exhibited the highest 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) free radical scavenging activity. The cytoprotective effects of EF on oxidative damage induced by tert-butyl hydroperoxide in a human hepatoma cell line, HepG2 cells, were investigated to understand the intracellular antioxidant mechanisms. Treatroent of HepG2 cells with EF prior to oxidative stress was found to inhibit reactive oxygen species (ROS) generation, lipid peroxidation, and DNA damage in a dose-dependent manner. GC-MS studies on EF resulted in tentative identification of 19 compounds representing 94.3% of the total content. Taken together, these results demonstrated that EF has excellent antioxidant activities and thus C. grandis Osbeck leaves have great potential as a source for natural antioxidant which can be applied in food products.
The study was carried out to examine the anti-proliferative effects of the various solvent fractions of the inunature dangyuja (Citrus grandis Osbeck) fruit on cancer cell lines. The human U937 leukernia (U937) cells were the most susceptible to the hexane fraction of immature dangyuja (HFID) and their growth was inhibited in a dose-dependent manner ($IC_{50}$=ca. 60 ${\mu}g$/mL). With the HFID, apoptosis-related experiroents, (a) Annexin V staining; (b) DNA fragmentation (c) reverse transcription-polymerase chain reaction of BCL-2 and BAX gene; (d) Westem blot analysis of Bcl-2, Bax, poly (ADP-ribose) polymerase (PARP), and Caspase-3 expressions; (d) Caspase-3 activity assay, were carried out on U937 cells. IDH- induced cell death was characterized by morphological changes of chromatin condensation and apoptotic body formation. The molecular mechanism behind IDH induced apoptosis of U937 cells rnight be via rnitochondria -mediated s.업naling pathway, as demonstrated by increases in the ratio of BAX/BCL-2 gene and Bax/Bcl-2 protein expression. Furthermore, proteolytic cleavages of caspase-3 and PARP, casapse-3 activity in the IDH - treated cells were significantly increased compared with those in control group GC and GC-MS analysis of IDH showed that major constituents of the IDH fraction were rich in steroids and coumarins, particularly -sitosterol (17.5%), 7-methoxy-8-(2-oxo-3-methylbutyl) coumarin (6.8%), stigmasterol (3.8%), campesterol (3.4%). Taken together, the results of our studies present the first evidence of IDH as an apoptosis inducer in U937 cells and these findings may open interesting perspectives to the strategy in human leukemia cancer treatment.

목차 Contents

• 표지...1
• 제출문...2
• 요약문...3
• SUMMARY...7
• 목 차...11
• 제 1장 연구개발과제의 개요...14
• 제 1절 연구개발의 필요성...14
• 1. 기술적 측면...14
• 2. 정제.산업적 측면...15
• 3. 사회.문화적 측면...15
• 제 2절 연구개발의 목표 및 범위...16
• 1. 연구 개발 목표...16
• 2. 연구 내용 및 범위...16
• 제 2 장 국내외 기숭개발 현황...19
• 제 1절 국내외 관련기술의 현황...19
• 제 2절 앞으로의 전망...20
• 제 3 장 연구개발 수행 내용 및 컬과...22
• 제 1절 당유자의 전처리 조건 및 HPLC 분석조건 확립...22
• 제 2절 메탄올 추출물의 계통적 추출 분획물에 대한 flavonoids 및 limonoids 분석...26
• 1. Flavonoids 분석...26
• 2. Limonoids 분석...31
• 제 3절 미지의 성분 분자구조 규명...34
• 1. LC-MS를 이용한 미지의 Flavonoids 및 Limonoids 성분 분자구조 규명...34
• 2. 당유자의 휘발성 향기 성분 동정 및 정량...38
• 제 4절 당유자 마성숙과 추출물의 기능성 탐색...45
• 1. 시료확보...45
• 2. 미성숙 분획물의 염증인자 억제효과...45
• 3. 미성숙 분획물의 항산화 효능...52
• 4. 골다공증 억제 효능...56
• 5. 숙취제거 효능...57
• 6. 당유자 미성숙 헥산 분획물의 암세포의 사멸 효능...59
• 제 5절 성숙파의 부위별 (통파, 과피, 내피) 계통적 추출 분획물 확보 및 생리활성 평가...68
• 1. 계통적 용매 분획물 확보...68
• 2. 염증억제효능 평가...69
• 제 6절 당유자 잎 추출물의 생리활성 탐색...79
• 1. 계통적 용매 분획물 확보...79
• 2. 당유자 잎의 염증인자 억제효과...79
• 3. 당유자 잎 CHCl3, 분획물의 암세포의 사멸 효과...91
• 4. 당유자 잎 ethyl acetate 분획물의 항산화효능...107
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도...113
• 제 1절 평가의 착안점 및 달성도...113
• 1. 연구평가의 착안점...113
• 2. 연구개발 목표의 달성도...115
• 제 2절 관련분야의 기여도...116
• 1. 기대효과...116
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획...118
• 제 1절 연구성과 활용...118
• 1. 산업재산권...118
• 2. 학술지 개제...118
• 3. 학술대회 발표...119
• 4. 산업체 이전활용 계획...123
• 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보...134
• 제 1절 기능성 식품으로서의 감귤...134
• 1. 주요 성분의 이용 가능성...134
• 제 2절 감귤의 기능성 성분 이용기술...135
• 1. 과피 함유 기능성 성분의 이용...135
• 2. 기능성 성분 연구 동향...136
• 3. 국내외 감귤 관련 특허...137
• 4. 이용방안...138
• 제 7 장 참고문헌...139