초록 ▼

1. 최종목표
siRNA 신약 및 기타 신약 개발의 원천기술이 되는 암치료용 후보 타겟 유전자를 발굴하고 RNAi 동물 실험을 통해 타겟 유전자의 검증
2. 개발내용 및 결과
I. 암 관련 신규 후보 유전자 선정
1) 생물학적 실험(BT)에 의해 추천된 암 관련 후보유전자 선정
i) 모델세포에 의한 유전자의 암관련성 검증 (22종): 모델세포 S. pombe에 human유전자를 과다 발현시켜 phenotype 변화를 유발시키는 유전자 22 종 발굴
ii) 암세포주에서의 발현 측정 (30종): 66명

1. 최종목표
siRNA 신약 및 기타 신약 개발의 원천기술이 되는 암치료용 후보 타겟 유전자를 발굴하고 RNAi 동물 실험을 통해 타겟 유전자의 검증
2. 개발내용 및 결과
I. 암 관련 신규 후보 유전자 선정
1) 생물학적 실험(BT)에 의해 추천된 암 관련 후보유전자 선정
i) 모델세포에 의한 유전자의 암관련성 검증 (22종): 모델세포 S. pombe에 human유전자를 과다 발현시켜 phenotype 변화를 유발시키는 유전자 22 종 발굴
ii) 암세포주에서의 발현 측정 (30종): 66명 대장암 환자 조직의 microarray 실험을 통해 암조직에서 발현이 증가된 유전자 선별, 특허 논문 database 분석을 통해 신규 유전자를 선정함, RT-PCR을 통해 발현량을 비교후 후보 유전자로 선정
2) siRNA를 이용한 항암 효과 검증 (45종)
i) 해당 유전자의 siRNA 서열을 디자인 및 합성 한 후 다양한 세포주에 도입시켜 siRNA에 의한 유전자의 발현 억제에 따른 세포 성장 억제 효과의 확인 및 세포 성장 억제를 유도 후보 유전자를 발굴.
3) 암치료 후보 신규 타겟 유전자 선정 (10 종)
- siRNA에 의한 성장 억제 효과를 나타내는 유용 유전자를 최종적으로 선정
- 선정된 유전자의 특허 출원 (6건)및 후속 연구 진행
II. 신규 유전자의 타겟 타당성 검증
1) 암치료용 타겟 MI00 및 OI00에 타당성에 대한 검증을 수행함.
i) mammalian cell에서의 증식 비교 : 해당 유전자 MI00 및 OI00를 mammalian 벡터에 클로닝 (Flag tag 및 GFP 또는 RFP fusion 단백질이 발현).
ii) NIH3T3 세포주에 MI00 및 OI00을 transient 발현시킨 후 신호전달 유전자들의 양적 변화를 조사함.
2) siRNA 및 유전자 발현을 위한 adenovirus 제조 및 항암 억제 효과.
- siMI00 및 siOI00를 내는 adenovirus 를 제조하기 위해 siRNA에 해당하는 shRNA DNA를 합성하여 adenovirus 제조용 vector에 클로닝 및 shRNA 발현 adenovirus 제조 후 다양한 암세포주에 infection 및 siRNA의 항암 실험 중.
3) MI00과 상호작용하는 단백질의 발굴
- yeast two-hybrid screening 을 이용하여 MI00과 상호작용하는 단백질을 6종을 발굴 및 상호작용하는 HGS의 클로닝 및 발현 연구를 수행 중
4) MI00유전자의 세포 내 과량 발현, 신호전달 경로 고찰 및 MI00의 기능 규명
- siMI00 처리 후 signaling의 변화 및 MI00 과량 발현 후 signaling의 변화를 고찰하여 MI00 유전자의 기능을 규명 중, 제조된 sh 및 유전자 adenovirus 을 이용한 세포 수준에서의 암과 관련된 유전자의 기능 고찰.
3. 사업성과
○ 기술적 성과 : 신규 타겟 후보 유전자 10종 발굴
○ 경제적 성과 : 2007년 12월 3일 참여기업 (주)삼천리 제약에 기술이전
기술명: MI00 및 OI00 유전자의 암치료 타겟으로의 활용,
계약액 : 130,000,000 원,※선수금 : 30,000,000원)
○ 활용성과 등 : 특허 6건 출원 (해외 1건, 국내 5건)
4. 향후추진계획
○ 검증된 타겟 유전자에 대해서는 siRNA 최적화 및 delivery 연구를 병행하여 항암 siRNA 치료제 개발을 추진하고자 함
○ 발굴된 유전자들에 대한 후속 연구를 통해 타겟 유전자로서의 검증 연구.

목차 Contents

• 과제별 세부 집행내역 ...1
• Ⅰ. 조성 금액 ...1
• Ⅱ. 과제개발비 집행내역 ...1
• 개발결과의견서 ...4
• 최종보고요약서(초록) ...5
• 목차 ...7
• 제1장 서론 ...7
• 제1절 siRNA 및 치료타겟 발굴 기술 ...7
• 제2절 항암타겟 및 siRNA신약의 국내.외 관련 기술 현황 ...8
• 제3절 siRNA 신약 개발 및 본 과제 수행의 필요성 ...9
• 제2장 과제개발 내용 및 방법 ...9
• 제1절 유전자 선정 ...9
• 제2절 암세포주에서 MI00 또는 OI00 유전자 발현 ...11
• 제3절 유전자의 siRNA 효과 검증 ...12
• 제4절 MI00 및 OI00 유전자 클로닝 및 아데노바이러스 제조 ...13
• 제5절 MI00 유전자와 상호작용하는 유전자 발굴 ...14
• 제3장 사업성과 ...14
• 제1절 기술적 성과 암 관련 신규 후보 유전자 선정 ...14
• 제2절 기술적 성과 신규 유전자의 타겟 타당성 검증 ...15
• 제3절 경제적 성과 ...21
• 제3절 기타 성과 ...21
• 제4장 결론 ...21
• 제 1 절 신규 타겟 후보 유전자 발굴 ...21
• 제 2 절 신규 유전자의 siRNA 신약 후보로의 검증 ...22
• 제 3 절 향후 계획 ...22