초록 ▼

○ 제1세부연구과제
배반엽단계 수정란에 3D8 scFv 유전자를 가지는 재조합바이러스를 미세주입하여 제1세대, 제2세대 그리고 제3세대 형질전환 체들을 생산하였고, 이들에서 주입한 유전자가 존재함을 PCR 유전분석방법으로 확인함. 그리고 이들 형질전환 닭에서 주입한 3D8 scFv 유전자의 단백질이 또한 발현됨을 닭의 태아섬유아세포에서 확인 함.
○ 제1협동연구과제
3D8 scFv 미니항체가 in vitro상에서 dsDNA, ssDNA, ssRNA, dsRNA 모두를 사용하여 각 1시간 간격으로 샘플을 모아 전기영동

○ 제1세부연구과제
배반엽단계 수정란에 3D8 scFv 유전자를 가지는 재조합바이러스를 미세주입하여 제1세대, 제2세대 그리고 제3세대 형질전환 체들을 생산하였고, 이들에서 주입한 유전자가 존재함을 PCR 유전분석방법으로 확인함. 그리고 이들 형질전환 닭에서 주입한 3D8 scFv 유전자의 단백질이 또한 발현됨을 닭의 태아섬유아세포에서 확인 함.
○ 제1협동연구과제
3D8 scFv 미니항체가 in vitro상에서 dsDNA, ssDNA, ssRNA, dsRNA 모두를 사용하여 각 1시간 간격으로 샘플을 모아 전기영동한 결과 3D8 scFv, VH, 및 VL의 강력한 핵산 분해 능력을 확인 할 수 있었다. 3D8 scFv의 활용성을 높이고자 cell penetrating peptide (CPP)를 융합하였다. 앞에서 구축한 vector를 agrobacteria인 GV3101에 넣었고 GV3101을 이용하여 binary vector 시스템을 통한 leaf disk 형질전환 방법을 통하여 Nicotiana tabacum 형질전환을 하였다. 클로닝한 GV3101을 Molecular farming 시스템을 이용하기 위해 또 다른 식물인 K. pinnata에 형질전환을 하여 형질전환체를 확인하고 있다. pTat와 HgH6를 각각 3D8 scFv와 연결 시켜 K. pinnata에 형질전환하여 발현된 단백질을 IgG sepharose를 이용하여 정제를 수행한 후 double stranded DNA 인 pUC18 plasmid를 기질로 사용하여 정제된 단백질이 DNase 활성을 확인 할 수 있었다. 3D8 scFv 핵산가수분해 항체를 바이러스에 대한 치료제로써 가능성을 알아보기 위해 핵산가수분해 항체를 피부세포주인 B16F10에 처리하였을 때 세포내로 들어가는 것을 confocal microscopy를 통해서 확인하였다. 또한 쥐의 복강에 핵산가수분해 항체를 넣었을 경우 핵산가수분해 항체가 간, 근육, 허파 그리고 뇌까지 전달됨을 확인하였다. Pseudorabies virus(PRV)를 $10LD_{50}$으로 쥐의 대퇴부 근육에 주사한 후 핵산가수분해 항체를 처리한 그룹에서 핵산가수분해 항체를 처리하지 않은 그룹에 비해 5배에서 6배의 생존율을 보임 따라서 3D8 scFv 항체 항-바이러스 효과가 있음을 보여줌.

Abstract ▼

In present study, we planned to produce transgenic chickens resistant to aVIan influenza virus and develop antiviral drugs. The 3D8 gene used in this study was isolated from the mouse hybridoma cell and the single chain variable fragment (scFv) of the isolated monoclonal antibody showed an activity

In present study, we planned to produce transgenic chickens resistant to aVIan influenza virus and develop antiviral drugs. The 3D8 gene used in this study was isolated from the mouse hybridoma cell and the single chain variable fragment (scFv) of the isolated monoclonal antibody showed an activity of nucleic acid digestion.
In order to identify antiviral activities and mechanism of the nucleic acid digestion of the 3D8 scFv protein, we generated the transgenic chicken and plants expressing the 3D8 scFv gene, performed studies of the antiviral activities of the 3D8 scFv protein in vitro to examine the possibility of the antiviral drug and cloned monoclonal antibodies that have affinity to hemagglutinin (HA) protein of the avian influenza virus.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 3
• 요약문 ... 4
• SUMMARY ... 8
• CONTENTS ... 9
• 목차 ... 10
• 제1장. 서 론 ... 11
• 1. 연구개발의 필요성 ... 11
• 제2장. 국내외 기술개발 현황 ... 15
• 1. 국내 연구 현황 ... 15
• 2. 국외 연구 현황 ... 15
• 제3장. 연구개발수행 내용 및 결과 ... 18
• 제1절 : 연구개발 목표 ... 18
• 제2절 : 1년차 연구결과 ... 18
• 제3절 : 2년차 연구결과 ... 40
• 제4절 : 3년차 연구결과 ... 99
• 제4장. 연구개발목표 달성도 및 대외기여도 ... 134
• 제1절 : 목표대비 대외달성도 ... 134
• 제2절 : 정량적 성과 ... 135
• 제5장. 연구개발결과의 활용계획 ... 139
• 제6장. 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 140
• 제7장. 기타 중요 변동사항 ... 141
• 제8장. 국가과학기술종합정보시스템에 등록한 연구장비 현황 ... 142
• 제9장. 참고문헌 ... 143
• 끝페이지 ... 144