보고서 정보
주관연구기관 |
한국소비자보호원 korea Consumer Protection Board |
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2013-11 |
과제시작연도 |
2013 |
주관부처 |
식품의약품안전청 Korea Food & Drug Administration |
등록번호 |
TRKO201400011761 |
과제고유번호 |
1475007532 |
사업명 |
농림수산검역검사기술개발 |
DB 구축일자 |
2014-07-26
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키워드 |
바실러스균.클로스트리디움균.유전자분석.등온증폭.비교분석.Bacillus cereus.Cperfringens.genetic detection methods.Isothermal amplification.Genetic analysis.
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DOI |
https://doi.org/10.23000/TRKO201400011761 |
초록
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바실러스 세레우스(Bacillus cereus)균은 토양세균의 일종으로 호기적, 혐기적조건에서도 증식하는 포자형성 간균으로 야채, 곡류 등의 농작물 및 식품원료 내에서는 주로 포자상태로 존재한다. 클로스트리디움 퍼프리젠스(Clostridium perfringens)은 혐기성세균으로 포자를 생성하며 동물의 장관, 분변, 식품 등에 널리 퍼져있으며 아포의 발아시 독소를 생성한다. B. cereus 및 C. perfringens은 설사, 복통, 구토 등을 일으키는 식중독세균으로 바실러스균의 bceT 유전자와 클로스트리디움의 cpa 유전자
바실러스 세레우스(Bacillus cereus)균은 토양세균의 일종으로 호기적, 혐기적조건에서도 증식하는 포자형성 간균으로 야채, 곡류 등의 농작물 및 식품원료 내에서는 주로 포자상태로 존재한다. 클로스트리디움 퍼프리젠스(Clostridium perfringens)은 혐기성세균으로 포자를 생성하며 동물의 장관, 분변, 식품 등에 널리 퍼져있으며 아포의 발아시 독소를 생성한다. B. cereus 및 C. perfringens은 설사, 복통, 구토 등을 일으키는 식중독세균으로 바실러스균의 bceT 유전자와 클로스트리디움의 cpa 유전자는 대표적인 유전자이다.
본 연구에서는 B. cereus 및 C. perfringens를 신속하고 정확하게 검출하기 위하여 loop-mediated isothermal amplification (LAMP) 방법을 이용하고자 한다. LAMP는 1시간으로 반응을 할 수 있으며, 이의 검출한계는 real-time PCR과 거의 같은 10 cfu 이며, 일반 PCR의 경우는 100 cfu 로 높은 편이다. 햄, 소시지, 쇠고기, 돼지고기, 고춧가루, 간장, 굴소스, 고추장, 된장, 드레싱, 비빔장, 배추김치, 총각김치, 선식 등의 식품에 인위적으로 오염시킨 B. cereus 및 C. perfringens의 검출한계는 식품의 매트릭스에 따라 달라 1,000cfu 이상에만 검출되는 것으로 나타났다. 본 연구에서 LAMP는 식중독균을 검출할 수 있는 신속 정확한 방법 중의 하나로, 식중독 원인조사 검사지침 시험법으로 활용될 것으로 기대한다
Abstract
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Bacillus cereus and Clostridium perfringens are an important pathogen of human gastrointestinal (GI) tract diseases such as food poisoning, antibiotic-associated diarrhea, and sporadic diarrhea as well as nosocomial diarrheal disease outbreaks. Isolates carrying the B. cereus gene (bceT) and C. perf
Bacillus cereus and Clostridium perfringens are an important pathogen of human gastrointestinal (GI) tract diseases such as food poisoning, antibiotic-associated diarrhea, and sporadic diarrhea as well as nosocomial diarrheal disease outbreaks. Isolates carrying the B. cereus gene (bceT) and C. perfringens enterotoxin gene (cpa) on the chromosome or a plasmid rank among the most important food-borne pathogens.
In this study, loop-mediated isothermal amplification (LAMP), were developed and evaluated for their reliability using purified DNA. The LAMP and Real time PCR assays detected bceT or cpa when 10 cells/g of bce T - positive B. cereus or cpa-positive C. perfringens were present, using kit. However, the limit of detection in conventional PCR was 100 cells/g.
For the detection of bceT or cpa-positive strains from artificially contaminated meat samples without preincubation, molecular assays required more than 103 cells per g and showed a wide range of detection diversity among the investigated samples. LAMP requires only a heat block and amplification products can be detected using Sybr Green I rather than an agarose gel.
The LAMP assays achieved accurate detection in 1 hour. In conclusion, the LAMP assay developed in this study is a valuable method for rapid, cost-effective, and simple detection of B. cereus and C. perfringens in foods. The LAMP protocols developed in this study could also be available for epidemiological investigation for foodborne pathogens and reliable methods to detect for Bacillus cereus and Clostridium perfringens
목차 Contents
- 표지 ... 1
- 용역연구개발과제 최종보고서 ... 2
- 제 출 문 ... 3
- 목 차 ... 4
- 총괄연구개발과제 연구결과 ... 5
- Ⅰ. 총괄연구개발과제 요약문 ... 6
- 국문 요약문 ... 6
- Summary ... 8
- Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과 ... 10
- 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ... 10
- 제2장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법 ... 24
- 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ... 38
- 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 63
- 제5장 총괄주요연구 변경사항 ... 64
- 제6장 총괄참고문헌 ... 65
- 제7장 총괄첨부서류 ... 72
- 끝페이지 ... 73
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