초록 ▼

○ 연구결과
자실체 유래의 crude polysaccharide(CPF)에 대한 중성분획(CPFN)의 수율은 32.1mg/100 mg, 산성분획(CPFA)의 수율은 40.4 mg/100 mg 으로 나타났다. 이 다당체를 Ion exchange chromatography와 Gel filtration chromatography를 실행하여 분자량별로 분획하였다. 자실체 중성분획물은 고분자와 저분자 다당체 분획 총 3종(CPFN-G-I, CPFN-G-II, CPFN-G-III)으로 분자량은 각각 CPFN-G-I: 580kDa, CPF

○ 연구결과
자실체 유래의 crude polysaccharide(CPF)에 대한 중성분획(CPFN)의 수율은 32.1mg/100 mg, 산성분획(CPFA)의 수율은 40.4 mg/100 mg 으로 나타났다. 이 다당체를 Ion exchange chromatography와 Gel filtration chromatography를 실행하여 분자량별로 분획하였다. 자실체 중성분획물은 고분자와 저분자 다당체 분획 총 3종(CPFN-G-I, CPFN-G-II, CPFN-G-III)으로 분자량은 각각 CPFN-G-I: 580kDa, CPFN-G-II: 308kDa, CPFN-G-III: 31kDa 확인되어 각각 수집하였고 단백질은 검출되지 않았으며, 산성분획물은 고분자 한 분획(CPFA-G : 658kDa)이 확인되었다. 고효능의 생리활성분획을 검색하기 위한 총페놀함량 분석과 항산화활성 평가 결과는 페놀함량이 높은 분획에서 항산화활성이 높게 검색이 되었다.
대식세포 유래 세포독성물질 Nitric oxide (NO)의 정량, 대식세포 유래 세포독성물질 Reactive oxygen species (ROS)의 정량, RT-PCR을 이용한 전사수준에서 사이토카인 발현량 조사, 대식세포의 탐식작용 assay를 통해서 높은 활성을 보이는 분획이 선택되었다. 효능과 관련된 세포내 신호전달과정 검토의 결과, 표고버섯 유래 단백다당류에 의한 면역기능 항진 시 NO와 TNF-a 분비에 관여하는 세포내 신호전달체계는 각각 다른 분비유도 경로에 의해 조절되며, 표고 버섯 단백다당류 분획을 LPS와 차이를 보이긴 하지만 뚜렷하게 NF-kB 활성을 유도한 것으로 나타났다. 이것으로, 표고의 단백다당류 분획 약 60 kDa의 단백질의 tyrosine 잔기에 인산화를 유도하는 것으로 확인되었고, LPS와는 뚜렷하게 차이가 나지만 정상군 대비 확실한 phospho-ERK 와 phospho JNK의 양상을 보여 주었다. 따라서 이들 결과는 표고 분획류들이 적어도 복잡한 신호전달 체계 (protein tyrosine phosphorylation과 ERK 및 JNK)를 통해 활성이 유도된 NF-kB를 바탕으로 cytokine 및 chemokine의 발현을 유도하는 것으로 판단된다. 대식세포기능을 조절하는 표면 당단백질 발현 및 그들의 활성 검토에서 표고는 dectin-a 매개와 TLR-2 매개에 의해 NO 생성을 조절하는 것으로 판단이 되었다. 항당뇨, 항콜레스테롤에 대한 실험에서 표고에서 추출한 단백다당체의 효과는 체중에는 별다른 영향을 끼치지 않았지만, 혈중 glucose의 농도 감소나, LDL level 을 감소시키는 효과를 보이는 것으로 나타났다.
마지막으로, 얻어진 효능자료를 근거로 표고버섯추출물을 조청, 전병, 강정 및 기능성 가공 제품화 하는데 필요한 가공기술 검색과 제품화를 위한 적절한 가공방법을 모색하여 고부가가치를 갖는 식품으로의 개발화 하고자 하였다.

Abstract ▼

A. Characteristic analysis and purification and isolation process of biological response modifier

The polysaccharides were extracted from fruiting body of Lentinus edodes. The crude polysaccharides were obtained by the ethanol addtion. They were further purified using ion-exchange chromatogra

A. Characteristic analysis and purification and isolation process of biological response modifier

The polysaccharides were extracted from fruiting body of Lentinus edodes. The crude polysaccharides were obtained by the ethanol addtion. They were further purified using ion-exchange chromatography and gel chromatography. Ion-exchange chromatography using DEAE-cellulose column separated neutral and acidic polysaccharides. Neutral polysaccharides were then purified with gel filtration chromatography. For various peaks obtained from gel filtration chromatography, molecular weight was measured with Sepharose CL-6B. Total sugars and protein contents were detected by phenol-sulfuric acid method and Bradford assay, respectively. Crude extracts, crude polysaccharides and crude polysaccharides-free from fruiting body were investigated for their antioxidant capacity in total polyphenolics and 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity.

B. Efficacy analysis of biological response modifier Biological response modifier

extracted from Lentinus edodes was utilized for the effect searching through ethanol precipitation with fruiting body hot-water extraction. we investigated the effects that Lentinus edodes proteo-glycan might regulate the secretion of Nitric Oxide's(NO), cell immunoreaction release cytokine(TNF-α, IL-1b, IL-6, IL-12, IL-23) and chemokine(MCP-1, MIP-1a, MIP-2) etc. There were representative cell
toxicity materials that were removed from realities in Phagocyte that appeared using blocking antibody of TLR-2 and dectin-1 that was the representative receptor By examining the effect whether proteo-glycan affected some costimulatory molecule's revelation, being antigen shearing activity of Phagocyte by proteo-glycan regulation ability, using cell adhesion process(cell-fibronectin adhesion assay) method that used plate that conglutinating homotypic cell aggregation assay department fibronectin cell mobility course of events proeto-glycan fraction's regulation possibility about protein vitality, the possibility of adhesion regulation protein expression was investigated by proteo-glycan fraction. Also, we investigated hyperglycemia to confirm the possibility for regulation function of Lentinus edodes fruiting body. An experiment animals were prepared to search the blood sugar control of Lentinus edodes fruiting body extract for estimating type 1 diabetes model mouse and hyperglycemia effect by streptozotocin(STZ).

C. Process development of Functional product.

L. edodes were used to make Jocheong, Jeonbyeong, Gangjeong, L. edodes extracts and concentrate and powders by separating the crude saccharide from extracts. We investigated the quality characteristics of Jocheong containing various level of Lentinus edodes powder and extracts by adding L. edodes powder in rice, L. edodes powder in saccharide L. edodes extracts in saccharide. Then, we studied the quality characteristics of Gangjeong containing various level of Lentinus edodes, properties of Jeonbyeong containing Lentinus edodes powder and development of
functional food using Lentinus edodes extracts.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 요약문 ... 3
• SUMMARY ... 16
• CONTENTS ... 22
• 목차 ... 25
• 제 1 장 연구개발과제의 개요 ... 28
• 1) 기술적 측면 ... 29
• 2) 경제 산업적 측면 ... 29
• 3) 사회 문화적 측면 ... 30
• 제 2 장 국내·외 기술개발 현황 ... 31
• 1. 국내·외 관련 기술의 현황과 문제점 ... 31
• 2. 앞으로 전망 ... 31
• 3. 기술도입의 필요성 ... 32
• 제 3 장 연구개발 수행 내용 및 결과 ... 33
• 제 1 절 생리활성물질 특성분석 및 분리정제 (제1세부과제) ... 33
• 가. 연구배경 ... 33
• 나. 연구방법 ... 34
• 1) 추출물 제조 및 수율 검토 ... 34
• 2) 추출물의 활성 분획 선별 ... 35
• 3) 생리활성물질 성분 분석 ... 35
• 4) 생리활성물질 분리정제 ... 37
• 5) Polysaccharide 추출 및 함량 ... 39
• 6) Polysaccharide 분리 및 정제 ... 39
• 7) Polysaccharide 성분분석 방법 ... 43
• 8) Polysaccharide 구조분석 ... 47
• 9) 효능분석 ... 47
• 다. 연구결과 및 고찰 ... 50
• 1) 추출물 제조 및 수율 검토 ... 50
• 2) 추출물의 활성 분획 선별 ... 54
• 3) 생리활성물질 성분 분석 ... 56
• 4) 생리활성물질 분리정제 ... 61
• 5) Polysaccharide의 분리 및 정제 ... 65
• 6) Polysaccharide의 이화학적 특성 분석 ... 73
• 7) 효능분석 ... 80
• 제 2 절 생리활성물질 효능평가 (제2세부과제) ... 86
• 가. 연구배경 ... 86
• 나. 연구방법 ... 87
• 1) 실험재료 ... 87
• 2) 세포배양 ... 87
• 3) 세포 생존율 (cell viability) 검정 ... 87
• 4) 대식세포 유래 세포독성물질 Nitric oxide의 정량 ... 88
• 5) 대식세포 유래 세포독성물질 Reactive oxygen species의 정량 ... 88
• 6) 대식세포의 cytokine 분비능 측정: RT-PCR을 이용한 cytokine 발현량 조사 ... 89
• 7) 대식세포의 탐식작용 측정 ... 89
• 8) 신호전달과정 검토 ... 91
• 9) Flow cytometer를 이용한 면역세포의 당단백질 발현성 검증 ... 91
• 10) 세포-세포간 유착반응 정량 ... 91
• 11) 표적 단백질의 발현량 검토 ... 92
• 12) NF-kB activity 확인 ... 92
• 13) 세포-fibronectin간의 유착반응 정량 ... 92
• 14) Flow Cytometry를 이용한 면역세포의 표현형 분석 ... 92
• 15) 급성독성시험 ... 93
• 16) 표고버섯 추출물의 항당뇨능 시험 결과 ... 95
• 다. 연구결과 및 고찰 ... 97
• 1) 세포 생존율 (cell viability) 시험 ... 97
• 2) 대식세포 유래 세포독성물질 Nitric oxide (NO)의 정량 결과 ... 99
• 3) 대식세포 유래 세포독성물질 Reactive oxygen species (ROS)의 정량 결과 ... 99
• 4) RT-PCR을 이용한 전사수준에서 사이토카인 발현량 조사 결과 ... 101
• 5) 대식세포의 탐식작용 assay 결과 ... 101
• 6) 대식세포의 항원공여능력 조절가능성 검토 ... 104
• 7) 세포유착과정 및 세포 이동 유도인자의 발현 조절가능성 검토 ... 106
• 8) 확인된 세표면역학적 효능과 관련된 세포내 신호전달과정 검토 ... 109
• 9) 대식세포 기능을 조절하는 표면 당단백질 발현 및 그들의 활성검토 ... 113
• 10) 분리정도에 따른 단백다당류의 TNF-a 분비에 미치는 효과 ... 116
• 11) Flow Cytometer를 이용한 면역세포의 표현형 분석 결과 ... 116
• 12) 표고버섯 추출물의 마우스에 대한 단회경구독성시험 ... 119
• 13) 표고버섯 추출물의 항당뇨능 시험 결과 ... 122
• 14) 표고버섯 추출물의 콜레스테롤 저하 효능 검토 ... 124
• 제 3 절 기능성 가공제품개발 (협동연구과제) ... 135
• 가. 연구배경 ... 135
• 나. 재료 및 방법 ... 138
• 1) 실험 재료 ... 138
• 2) 조청의 제조 ... 138
• 3) 전병의 제조 ... 139
• 4) 강정의 제조 ... 140
• 5) 건강식품의 제조 ... 142
• 6) 성분분석 ... 142
• 7) 제품의 물성분석 ... 148
• 다. 연구결과 및 고찰 ... 153
• 1) 조청 제품화 ... 153
• 2) 전병 제품화 ... 202
• 3) 강정 제품화 ... 220
• 4) 고부가가치 기능성 식품 제품화 ... 229
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 256
• 제 1 절 연차별 세부과제 평가착안점에 입각한 목표 달성도 ... 256
• 제 2 절 관련분야에의 기여도 ... 259
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획 ... 260
• 제 1 절 활용 계획 ... 260
• 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 261
• 제 1 절 해외과학기술정보 ... 261
• 제 7 장 참고문헌 ... 262
• 끝페이지 ... 273