초록 ▼

○ 연구결과
1. 청피 및 플라보노이드 류의 in vivo, in vitro 항암효과기전 연구; 사람의 암세포를 이용하여 청피 성분들은 탁월한 항암효과를 나타내는 것으로 확인되었다.
2. 새로운 추출법에 의한 물질의 분리 및 구조분석을 통한 검증; 새로운 추출법을 적용하여 청피에서 neoeriocitrin과 구조적으로 유사한 물질을 분리하였고, HJ001로 명명하였다.
3. 추출물(HJ001)의 항암 효과 확인
- HJ001의 항산화효과 확인
- 암 세포 배양을 통해서 HJ001이 항암효과를 나타내는 것으

○ 연구결과
1. 청피 및 플라보노이드 류의 in vivo, in vitro 항암효과기전 연구; 사람의 암세포를 이용하여 청피 성분들은 탁월한 항암효과를 나타내는 것으로 확인되었다.
2. 새로운 추출법에 의한 물질의 분리 및 구조분석을 통한 검증; 새로운 추출법을 적용하여 청피에서 neoeriocitrin과 구조적으로 유사한 물질을 분리하였고, HJ001로 명명하였다.
3. 추출물(HJ001)의 항암 효과 확인
- HJ001의 항산화효과 확인
- 암 세포 배양을 통해서 HJ001이 항암효과를 나타내는 것으로 확인되었다.
- 세부연구결과 첨부.

Abstract ▼

Citri Reticulatae Viride Pericarpium (CR) has been used traditionally in Korea to promote the Liver Qi activity and the function of digestive system. We investigated whether the immature peels of Citrus reticulata Blanco (Rutaceae) induced cell-death on SNU-668, human colon cancer cells. Cytotoxici

Citri Reticulatae Viride Pericarpium (CR) has been used traditionally in Korea to promote the Liver Qi activity and the function of digestive system. We investigated whether the immature peels of Citrus reticulata Blanco (Rutaceae) induced cell-death on SNU-668, human colon cancer cells. Cytotoxicity of CR was assessed by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay. To determine apoptotic cell death, 4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) staining, terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) assay, reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), Western blotting, Protein array and caspase-3 enzyme assay were performed. The expression of pro-apoptotic gene, Bax, was increased and the expression of anti-apoptotic gene, Bcl-2, was decreased by CR-treatment. The expression and activity of major apoptotic gene, caspase-3 was significantly increased by CR-treatment. Considering the above results, CR could induce the apoptosis on SNU-C4, human colon cancer cells via Bax-related caspase-3 activation. And it might provide the experimental data for the future clinical use of CR on colon cancer. JH001(I-a-2-2), was isolated by Cold-water Extraction, is similar to structure of neoeriocitrin through 1H-NMR & 13C-NMR Data

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 3
• 요약문 ... 4
• SUMMARY ... 11
• CONTENTS ... 12
• 목차 ... 13
• 표목차 ... 17
• 그림목차 ... 18
• 제 1 장 연구개발과제의 개요 ... 21
• 제 1 절 연구개발의 필요성 ... 21
• 1. 연구배경 ... 21
• 가. 플라보노이드 ... 21
• 2. 연구개발의 필요성 ... 26
• 가. 기술적 측면 ... 26
• 나. 경제.산업적 측면 ... 27
• 다. 사회.문화적 측면 ... 27
• 제 2 절 연구개발의 목표 ... 28
• 1. 연구개발 목표 ... 28
• 가. 연구개발의 목표 ... 28
• 나. 연구개발 내용 ... 28
• 2. 연차별 연구개발 목표와 내용 ... 29
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황 ... 29
• 제 1 절 플라보노이드 연구동향 ... 29
• 1. 국내.외 연구동향 ... 29
• 2. 국내.외 관련기술의 현황과 문제점 ... 31
• 가. 본 연구기관이 수행한 연구 개발 내용 및 결과 ... 31
• 나. 현 기술상태의 취약부분 ... 36
• 3. 앞으로의 전망 ... 36
• 가. 항암 의약품 시장의 확대 ... 36
• 나. 천연 자원 및 식물에서의 약품 및 기능성 식품의 개발 추세 ... 36
• 다. 약품 개발 및 가공 기술의 발전 ... 36
• 4. 기술도입의 타당성 ... 37
• 제 3 장 연구 개발 수행 내용 및 결과 ... 37
• 제 1 절 청피 및 플라보노이드 류의 생리활성 분석 및 항암 효과기전 연구 ... 37
• 1. 실험의 의의 ... 37
• 2. 실험방법 ... 38
• 가. 재료 ... 38
• 나. 세포 배양 및 약물 처치 ... 38
• 다. MTT 분석 ... 38
• 라. DAPI 염색법 ... 39
• 마. TUNEL ... 39
• 바. RNA 추출 및 RT-PCR ... 39
• 사. Western Blotting ... 40
• 아. NO assay ... 40
• 3. 실험결과 ... 41
• 가. 청피의 in vitro 항암효과 연구 ... 41
• 1) Human gastric cancer cell (SNU-668 cell) ... 41
• 2) Human colon cancer cell (SNU-C4 cell) ... 53
• 나. 청피추출물 성분의 in vitro 항암효과 연구 ... 58
• 1) Human gastric cancer cell (SNU-668 cell) ... 58
• 2) Human colon cancer cell (SNU-C4 cell) ... 62
• 다. 청피의 생리활성 분석 ... 67
• 1) MMP-3, 9 activity assay ... 67
• 2) NO measurement ... 68
• 3) Glucose uptake ... 70
• 라. 청피 추출물의 in vivo 생리활성물질 평가 및 탐색 ... 72
• 제 2 절 생리활성물질의 추출 및 구조분석 ... 76
• 1. Flavonoid의 연구동향 ... 76
• 가. Flavonoid의 정의 ... 76
• 나. Flavonoid의 물리적 화학적 특성 ... 76
• 2. 진피류의 연구 ... 77
• 가. 진피 ... 78
• 나. 청피(靑皮) ... 78
• 3. Citrus속에 들어있는 flavanone의 종류와 구조 ... 80
• 가. Neohesperidose glyxosides ... 80
• 나. Rutinose glycosides ... 81
• 다. Aglycones ... 83
• 4. 실험방법 ... 86
• 가. 실험의 목적 및 의의 ... 86
• 나. 약재 ... 86
• 다. 실험기기 및 기구 ... 86
• 라. 시약 ... 86
• 5. Fraction method ... 87
• 가. 1단계-추출 및 흡착 ... 87
• 나. 2단계-Praction ... 89
• 다. 얇은 막 크로마토그래피 (TLC) ... 90
• 라. NMR 구조분석 ... 95
• 마. 구조분석 ... 98
• 제 3절 청피에서 기능성 물질의 생리활성 및 항암 효과 확인 ... 99
• 1. 실험의 의의 ... 99
• 2. 실험 방법 ... 99
• 가. 세포 배양 및 약물 처치 ... 99
• 나. MTT 분석 ... 99
• 다. DAPI 염색법 ... 99
• 라. TUNEL ... 100
• 마. 사이토카인 분석 ... 100
• 바. RNA 추출 및 RT-PCR ... 100
• 사. Western Blotting ... 101
• 아. 항산화 효과 분석 ... 101
• 3. 실험 결과 ... 102
• 가. 암 세포 배양을 통한 항암효과 확인 ... 102
• 1) 청피 추출물에서 추출된 물질을 사용한 아포토시스 실험 ... 102
• 2) 청피 추출물에서 추출된 물질의 위암세포에 대한 사이토카인 분석 실험 ... 120
• 3) 아포토시스 관련 유전자 (BCL2, BAX and CASP3)의 mRNA 발현관찰 ... 123
• 4) caspase 활성 분석 ... 124
• 5) 아포토시스 관련 유전자 (BCL2, BAX and CASP3)의 단백질 발현관찰 ... 124
• 나. 청피 추출물에서 추출된 물질 (HJ001)의 항산화 효과 분석 ... 124
• 제 4 절 연구 개발 결과 ... 129
• 1. 관련 연구 결과 논문 ... 129
• 2. 특허출헌 중인 기술 ... 133
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 134
• 제 1 절 목표달성도 ... 134
• 1. 1차년도 계획대비 목표달성 ... 134
• 제 2 절 관련분야에의 기여도 ... 136
• 1. 기술적 측면 ... 136
• 가. 생명공학 기술관련 ... 136
• 나. 감귤의 생산 및 저장 기술관련 ... 137
• 2. 경제 . 산업적 측면 ... 137
• 가. 제주 지역 경제 활성화 ... 137
• 나. 산업적 측면 ... 137
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획 ... 137
• 제 1 절 생리활성 유효 성분의 활용 방안 ... 137
• 1. 청피 추출물 중 항암성을 갖는 기능성 식품으로의 활용 ... 137
• 2. 청피 추출물 중 효과가 큰 것은 항암 의약품의 후보 물질로서의 활용 ... 138
• 3. 기타 항염증 등의 효과를 규명하여 다각도로 탐색 ... 138
• 제 2 절 성과물 활용의 유형 ... 140
• 1. 현장과의 연계 ... 140
• 2. 산업화 계획 ... 141
• 3. 기술 이전 방안 ... 143
• 4. 특허 및 논문 제출 ... 143
• 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술 정보 ... 144
• 1. 귤껍질에서의 색깔변화의 당 자극 : 영양과 호르몬의 기전 관계 ... 144
• 2. 간환자에서의 Kampo와 함께 임상, 약물 실험 ... 145
• 3. 폐암환자에서의 중국처방의 효과 ... 145
• 4. 피부염증, 스트레스, 그리고 암이 진행 중인 쥐에서의 citrus nobiletin 의 억제 효과 ... 146
• 5. beta-cryptoxanthin and hesperidin 이 풍부한 mandarin juices 에 의한azoxymethane-induced colon carcinogenesis in male F344 rats 억제 ... 147
• 6. citrus에서의 탄수화물 결핍에 의한 작은과실의 호르몬 기전 ... 148
• 7. 과일 성숙기간동안의 특유의 발현- citrus에서의 homologue of dad-1 gene 의 분자클로닝 ... 148
• 8. 청피로부터 정제된 limonoid glycosides의 분리와 특징 ... 149
• 9. 청피에서의 추위에 견디는 cDNA의 시퀀스와 발현 ... 149
• 제 7 장 참고문헌 ... 150
• 끝페이지 ... 153