초록 ▼

연구내용
[1차년도]
‣ siRNA 기반 anti-VEGF 약물을 전달할 다양한 나노입자를 개발함: glycolchitosan 나노입자, hyaluronic acid 나노입자, albumin 나노입자, liposome 기반의 나노입자 등등
‣ 개발된 나노입자의 유리체강내 주입 후 안구 내, 특히 망막에서의 분포 분석을 통한 망막으로의 전달에 최적인 나노입자를 선별함.
[2차년도]
‣ 1차년도 연구에서의 선별된 최적의 나노입자에 siRNA 기반 약물을 켑슐화 하고 켑슐화된 siRNA의 안정성 확인 및 방출

연구내용
[1차년도]
‣ siRNA 기반 anti-VEGF 약물을 전달할 다양한 나노입자를 개발함: glycolchitosan 나노입자, hyaluronic acid 나노입자, albumin 나노입자, liposome 기반의 나노입자 등등
‣ 개발된 나노입자의 유리체강내 주입 후 안구 내, 특히 망막에서의 분포 분석을 통한 망막으로의 전달에 최적인 나노입자를 선별함.
[2차년도]
‣ 1차년도 연구에서의 선별된 최적의 나노입자에 siRNA 기반 약물을 켑슐화 하고 켑슐화된 siRNA의 안정성 확인 및 방출속도를 제어함.
‣ 황반변성 동물모델 (laser-photocoagulation 쥐 모델)을 이용한 siRNA-나노입자의 전달 효능 분석 및 최적화.
‣ H&E immunohistochemistry 와 electroretinography를 이용하여 개발된 siRNA-나노입자의 무독성을 확인함.
[3차년도]
‣ 황반변성 동물모델에서 anti-VEGF siRNA 기반의 약물 주입 전과 후의 유리체와 망막조직에서의 VEGF 분포를 정량적, 정성적으로 분석함.
연구결과
[1차년도]
‣ 양친매성 물질인 5ß-cholanic acid를 이용하여 glycol chitosan 나노입자 (사이즈:229.1±8.7nm, 표면전하:16.4±3.2mV), hyaluronic acid 나노입자(213.4±10.3nm, -26.2±4.0mV), human serum albumin 나노입자(326.3±9.7nm, –20.9±2.0mV) 등의 다양한 anti-VEGF siRNA의 전달체를 제작함.
‣ 다양한 나노입자에 형광을 결합하여 Intravitreal injection을 통한 유리체강내 주사후, vibrotome section을 이용하여 안구단면을 만들어 입자의 거동을 분석함. 분석결과, 음전하를 띄는 hyaluronic acid 와 human serum albumin 나노입자를 안구내 siRNA 전달에 효과적인 전달체로 선출
[2차년도]
‣ polymerized siRNA (poly-siRNA)를 사용하여 brached polyethylenimmine (bPEI) 에 charge to charge interaction으로 결합시킨 후, hyaluronic acid (HA)로 코팅하여 음전하를 띄고 균일한 사이즈분포를 갖는 나노입자를 제작.
‣ 제작된 입자에서의 siRNA loading 여부, 세포내에서의 방출, 유리체 내에서의 siRNA 안정성을 PAGE gel 전기영동으로 확인.
‣ MTT assay로 human ARPE-19 cell line에 제작한 입자가 독성이 없음을 확인. 마찬가지로 mouse 안구내에서 H&E stain 결과 특별한 독성이 없음을 확인.
[3차년도]
‣ Laser-photocoagulation를 이용하여 mouse 안구내의 CNV (맹락막신생혈관생성)을 유도 황반변성 동물모델을 만듬. 2주간 CNV의 크기를 추적하고 재현성을 확보.
‣ 황반변성 동물모델에서 만들어진 입자를 주입하여 CNV 넓이를 분석. 제작한 입자가 CNV 크기증가를 억제함을 확인.