초록 ▼

연구결과
필요성 및 목표
○현재 사용되고 있는 인플루엔자 백신 중 헤마글루티닌 함량시험법인‘단일방사면역확산법(SRID)'은 표준항원, 표준항체가 필요하며, 많은 시간과 노동력이 요구됨
○인플루엔자 대유행을 대비하여 국제기관으로부터 표준항원과 표준항체를 공급받지 않고 헤마글루티닌 함량을 측정할 수 있는 시험법 마련을 위한 연구 진행(‘11~13년)
○개발된 시험법이 실제 대 유행 시 사용되기 위하여 시험법간의 비교평가연구와 다양한 종류의 인플루엔자 백신에 대한 모니터링 연구 필요
○인플루엔자 백신 중 헤마글

연구결과
필요성 및 목표
○현재 사용되고 있는 인플루엔자 백신 중 헤마글루티닌 함량시험법인‘단일방사면역확산법(SRID)'은 표준항원, 표준항체가 필요하며, 많은 시간과 노동력이 요구됨
○인플루엔자 대유행을 대비하여 국제기관으로부터 표준항원과 표준항체를 공급받지 않고 헤마글루티닌 함량을 측정할 수 있는 시험법 마련을 위한 연구 진행(‘11~13년)
○개발된 시험법이 실제 대 유행 시 사용되기 위하여 시험법간의 비교평가연구와 다양한 종류의 인플루엔자 백신에 대한 모니터링 연구 필요
○인플루엔자 백신 중 헤마글루티닌 함량시험법간 비교연구 및 검증을 통한 시험법 확립
방 법 및 결 과
○A형 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌을 trypsin처리한 후 Q-TOF MS로 확인하여 적절한 표적 펩타이드를 선정
○표적 펩타이드를 이용하여 Isotope Dilution Tandem Mass Spectrometry법으로 헤마글루티닌 함량 측정
○DR(Deglycosylated and Reduced) SDS-PAGE를 이용하여 인플루엔자 백신 중 헤마글루티닌 함량측정
○기 확립된 RP-HPLC 시험법을 이용하여 인플루엔자 백신 중 헤마글루티닌 함량측정
○위의 세가지 시험법과 SRID 시헙법과의 비교 및 각 시험법의 장단점 비교 사용
○대 유행 시 가능한 인플루엔자 백신 항원함량신속시험법 확립 및 방안 제시
기대성과
○인플루엔자 대유행시 표준항원 및 표준 항체없이 인플루엔자 백신의 신속 품질관리가 가능한 시험법 확립

Abstract ▼

Influenza is a virus that infects 15 % of the world population, causing 500,000 deaths annually. Haemagglutinin(HA) is a major antigen of this virus, and the potency of influenza vaccine is based on the content of HA. Although Single Radial Immunodiffusion(SRID) is a very specific and unique method

Influenza is a virus that infects 15 % of the world population, causing 500,000 deaths annually. Haemagglutinin(HA) is a major antigen of this virus, and the potency of influenza vaccine is based on the content of HA. Although Single Radial Immunodiffusion(SRID) is a very specific and unique method that can be used to measure the HA content in influenza vaccine visually, it needs a long time and is very labor-intensive. Also, this method can be a hindrance to develop influenza vaccine rapidly because it takes several months to prepare standard antigen and antibody used in SRID. Against this backdrop, Isotope-Dilution Liquid chromatography Mass Spectrometry(ID-LC/MS) was developed to measure the HA content in 2 types of influenza A strains. To show the validity of this method, the linearity, accuracy, precision and limit of quantification were measured. The established testing method used for determining the content of hemagglutinin in 20 lots of vaccine bulk produced in 2014. Deglycosylation Reduced SDS-PAGE method is usually used for measuring of hemagglutinin in influenza standards. We also established the optimization of this method and measured hemagglutinin content in the same vaccines. The Reversed-Phase Liquid Chromatography method is based on the calibration of the HA1 area. This method was established in our lab in 2012. We also measured the hemagglutinin content in 20 lots of influenza vaccine by RP-HPLC. The each results were compared. The total RSD of the results showed 2.2∼8.3% and the recovery for the SRID result showed 85∼120%. In according to these results, these three method can be used in influenza pandemic as a fast and substitute method for SRID. Here, we propose a model for rapid antigne measuring process.
1. measure the hemagglutinin content of influenza vaccine produced
2. influenza vaccine which is known its hemaggglutinin content as a national reference standard
3. RP-HPLC method can be used for measuring hemagglutinin content using reference standards
4. Other lots of influenza vaccine can be mearued its antigen content
5. Clinical test can be started
6. enabling rapid influenza vaccination

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 자체연구개발과제 최종보고서 ... 2
• 요약문 ... 3
• Summary ... 4
• 목 차 ... 5
• 연구개발과제 연구결과 ... 6
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 6
• 제1절 연구개발과제의 목표 ... 10
• 제2장 연구개발과제의 국내·외 연구개발 현황 ... 11
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 14
• 제1절. ID-LC/MS (Isotope DilutionLiquid Chromatography/MassSpectrometry) 시험법을 이용한 헤마글루티닌 함량측정시험법 개발 ... 14
• 제2절. Deglycosylated-Reduced SDS-PAGE시험법을 이용한 인플루엔자 백신 중 헤마글루티닌 함량시험법 ... 28
• 3절. 역상크로마토그래피법을 이용한 인플루엔자 백신 중 헤마글루티닌 함량측정 ... 32
• 4절. 인플루엔자 백신 모니터링 연구결과비교 및 시험법 비교 ... 36
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 39
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 41
• 제1절 연구개발과제의 목표달성도 ... 41
• 제2절 관련분야에의 기여도 ... 41
• 제6장 연구개발과제의 연구개발 결과 활용계획 ... 42
• 제1절 활용성과 ... 42
• 제2절 활용계획 ... 42
• 끝페이지 ... 43