초록 ▼

Ⅳ. 연구개발결과
1. 제1세부과제 : 초고압 기술을 활용하여 실버세대를 위한 혈액이행력 우수 고기능성 콜라겐 펩타이드 가공기술 개발
(1차 년도)
연구내용
□ 돼지태반의 성분분석(단백질, 지방, 수분, 비타민, 무기물)
구체적인 내용 및 결과
● 삼우축산에서 제공 받은 돼지 태반을 수분, 조단백, 조지방, 조섬유, 조회분 분석을 통해 조성분 분석
● 아미노산 조성 파악
□ 아임계수 추출 시스템 구축(현재의 초고압장치 reactor내에 가열 및 냉각장치 설치(온도, 압력센서, heater,

Ⅳ. 연구개발결과
1. 제1세부과제 : 초고압 기술을 활용하여 실버세대를 위한 혈액이행력 우수 고기능성 콜라겐 펩타이드 가공기술 개발
(1차 년도)
연구내용
□ 돼지태반의 성분분석(단백질, 지방, 수분, 비타민, 무기물)
구체적인 내용 및 결과
● 삼우축산에서 제공 받은 돼지 태반을 수분, 조단백, 조지방, 조섬유, 조회분 분석을 통해 조성분 분석
● 아미노산 조성 파악
□ 아임계수 추출 시스템 구축(현재의 초고압장치 reactor내에 가열 및 냉각장치 설치(온도, 압력센서, heater, cooler, by-pass valve)
● 1000 bar에서 300~400℃ 사이까지 조절 가능한 reactor를 구축
● Cooler의 기본적인 설계를 완료
□ 아임계수를 이용한 돼지태반의 가수분해 공정 최적화, 콜라겐 단백질 가수분해능 분석
● 돼지 태반의 최적의 압력과 온도 시너지 효과 확립
● 시간에 따른 변화도와 균질에 따른 가수분해능 분석법 확립
□ 유기산 촉매제를 이용한 아임계수 가수분해 공정 최적화
● 유산, 초산, 구연산, 염산을 이용해 pH를 조절하는 분석법 확립
□ 아미노산 및 콜라겐 펩타이드 분획 및 정제
● 분자량 1000 미만의 물질을 분리 할 수 있는 dialysis tube을 통해서 가수분해물의 아미노산을 정제

(2차 년도)
연구내용
□ 고압효소분해기법을 이용한 돼지 콜라겐의 가수분해능 분석 및 최적화: 단백질 분해효소 수준, 반응시간에 따른 유리아미노산, 올리고펩타이드 분석
구체적인 내용
● GPC 분석 결과 대기압 보다 100~200 MPa에서 저분자 펩타이드 확인
● 300 MPa 이상에서는 오히려 불활성 됨을 확인
● Pepsin의 경우 다른 효소의 분해 가수분해능이 낮음
□ 고압효소분해기법을 이용한 아임계수 추출물(올리고 펩타이드)의 가수분해능 분석 및 최적화: 단백질 분해효소, 압력수준, 반응시간에 따른 유리아미노산, 올리고 펩타이드 분석
● 가수 분해 효율이 가장 좋은 Trypsin을 이용하여 아임계수 처리 후 효소 처리와 효소 처리 후 저분자 펩타이드 확인
● 효소반응의 실험 결과 반응 시간에 비례하여 가수분해되는 경향
□ 고압효소분해 및 아임계수 가수분해 통합 공정을 통한 돼지 태반의 가수분해능 분석 및 최적화: 최적의 고압 온도 및 효소반응시간, 아임계수 추출 온도, 시간 및 압력 산출
● Trypsin을 200 MPa에서 반응 시켰을 때 가장 좋은 효소 활성도 보임을 확인
● 24 시간 효소반응 시 분자량 1000 미만의 펩타이드 제조함
● 아임계수 처리 후 효소반응을 하였을 때 가수분해의 극대화됨

(3차 년도)
연구내용
□ 아임계수 및 아임계 에탄올을 이용한 돈피 및 돈태반의 가수분해
구체적인 내용 및 결과
● 300℃, 80 bar의 아임계수로 가수분해한 결과 1000 Da이하의 가수분해물 생산
● 아미노산 프로파일링 결과, Gly 함량이 높을 비율을 차지함
● 유리아미노산, 분자량 분석 결과, 에탄올 농도에 따른 가수분해 증진효과 및 저해작용은 없는 것으로 확인
□ 실버세대용 기능성 유제품(아이스크림) 개발
● 돈피 콜라겐 펩타이드 첨가 아이스크림 최적의 제조법 확립
● 점도, 색도, 녹는 속도, 관능검사 등 다양한 아이스크림 특성변화를 관찰한 결과 콜라겐 펩타이드 농도 증가에 따라 점도는 감소함
□ 기능성 콜라겐 펩타이드 스파클링 음용수 개발(홍삼농축액 첨가 콜라겐 펩타이드 음료 제조)
● 제조된 콜라겐 펩타이드 스파클링 음용수의 이화학 및 관능적 분석 결과 탄산가스 농도가 증가할 수 록 거품이 발생하여 관능적 품질이 스파클링 음용수로 적절하지 않음
● 돈피 콜라겐 펩타이드의 특유의 이취를 감소시키기 위해 홍삼농축액을 첨가하고, 최적의 콜라겐 음료의 재료조성비를 관능검사 및 물성검사를 통해 확립함

2. 제1협동과제 : 고도 불포화 생리활성 지질류의 가용성 미세캡슐화 기술개발
(1차 년도)
연구범위
□ 고도화 불포화 지방산 함유 지질의 가용화 저탄소·신가공 법을 이용한 고효율 추출기술 개발
구체적인 내용 및 결과
● 유기용매, 초임계 CO₂및 아임계 COsub>2을 이용한 고도 불포화 지질류 최적 추출 공정개발
● 추출된 생리활성지질의 최적 정제기술 개발
● 추출된 생리활성지질의 성분분석
● Global sourcing 고도불포화 지방산 함유 지질의 성분 분석
● 생리활성지질의 항산화능 개선을 위한 항산화제 개발
□ 고도화 불포화 지방산의 가용화
● 생리활성지질의 안정화된 유화액(microemulsion) 개발
□ 미세캡슐화 기술개발
● Biopolymer(WPI, Chitosan) Multiple layer-by-layer 방법을 활용한 fish oil 입자 코팅기술 개발
● Biopolymer(WPI, Pectin)의 hydrogel 입자네 포집방법을 활용한 fish oil 입자 코팅기술 개발 제품별 최적 공정 조건 확립
● 입자의 크기, zeta-potential 측정, 코팅효율, 산화안정성(불포화율), 이취 masking 효율 측정
● Masking 효율증대를 위한 보조재료(레시틴) 첨가에 따른 산화안정성 연구
● 분산매의 종류에 따른 분산정도 측정(turbidity, 가용화 정도, 색 등)
● 제품별 pilot plant type 성립 조건 기초자료 확립
● 동물 실험을 통한 혈행장애 능력개선 검사

(2차 년도)
□ 고도 불포화 생리활성 지질류 가용성 미세캡슐 공정 최적화
● 고도 불포화 생리활성 지질류의 가용성 미세캡슐화 공정 최적화 및 산화 안정성 증진 확인
□ 미세캡슐화 된 고도 불포화 지방산의 유리속도 및 안전성 측정
● 습식: 분산매의 종류(pH, 카페인, 염분 등)에 따른 오일 유리 속도 및 산화안전성 확인
● 건식: 분말화 후 저장조건(온도, 습도 등)에 따른 오일 유리 속도 및 산화안전성 확인
● 재수화 된 입자의 유리속도 및 산화안정성 확인
● 습식/건식 캡슐의 동물 실험을 통한 혈행장애 능력개선 확인

(3차 년도)
□ 가용화된 고도불포화 지방산 강화 제품 개발
● 환자식, 노인식 시제품 제조 후 각 제품의 외관 특성 분석
- 색, 맛, 향기 등
● 재수화 된 입자의 유리속도 및 산화안정성 확인
● 저장시간에 따른 시제품 안정성 특성
- 시제품의 문제점 보완 및 유통기간의 안전성 검증
- 시제품의 관능검사 및 성능 실험
- 제품출시를 위한 계획 수립

3. 제2협동과제 : 난용성 칼슘제제의 가용화 기술 및 체내 흡수력이 우수한 칼슘 복합제제 개발
(1차 년도)
연구내용
□ 건식 나노분말화의 공정과 제품의 표준화 (원재료 표준화, 공정 표준화, 완제품 표준화)
□ 굴껍질과 난각을 통해 얻어진 나노분말의 특성
□ 골다공증 치유를 위한 동물실험을 통한 굴껍질 및 난각나노분말의 생체이용성 증진 효과 검증
구체적인 내용 및 결과
● 입자크기 측정, 색도, SEM, TEM, FT-IR, ICP정량분석
● 골다공증 유발 Rat를 통한 동물실험
● 칼슘과 인의 함량(혈중, 신장, 간, 대퇴골, 소변, 변) 생화학적검사: Alkalinephosphate, Osteocalcin, Deoxypyridinoline
● Creatinine 골대사검사: 골밀도, 골강도, 골소주, 골조직

(2차 년도)
□ 키 성장을 위한 동물실험
● 체중변화 측정
● 골성장 측정(골밀도 측정)
● 성장판 관찰(마이크로 시티 사진을 이용하여 측정)
● ICP를 통한 칼슘과 인의 함량(혈중, 신장, 간, 대퇴골, 변)
● 혈중 IGF-1 농도의 측정
□ 나노분말의 수용화
● PGMS의 micelle 형성분석(제타전위 이용)
● 산성조건에서 용해도 측정(Ascorbic acid)
● 나노분말의 분산 최적 조건 확립(PGMS 용액의 농도, 반응시간 조절)

(3차 년도)
□ 나노칼슘을 첨가한 포켓밀크 개발
● 무기/유기 나노칼슘의 환자식, 노인식 최적 영양 조성 및 물성개발, 완제품 개발
● 제품공정의 효율성 증대
● 제품의 가격 경제성
□ 나노칼슘을 첨가한 우유 개발
● 나노칼슘분말을 수용성화하여 최적조건을 확립 후 시유에 첨가하여 개발
● pH, 칼슘함량 및 관능검사를 통하여 나노칼슘분말의 최적함량을 확립
□ 나노칼슘을 첨가한 요구르트 개발
● 나노칼슘분말을 호상요구르트에 첨가하여 개발
● pH, 물성, 유산균 수 및 관능검사를 통하여 나노칼슘 분말의 최적함량을 확립
□ 나노칼슘의 안정성 및 생체이용율
● Caco-2 cell에 나노칼슘을 가하여서 독성확인 (cytotoxicity analysis)
● In vitro와 In vivo를 통하여 생체이용율 확인

4. 제 3협동과제 : 난용성 소재 가용화에 따른 기능성 및 안정성 평가
(1차 년도)
연구내용
□ 칼슘 소재의 생체 이용율 평가
구체적인 내용 및 결과
● 나노화에 따라 나노-A, 나노-B, 나노-C의 흡수율 평가 실시
● 난소 절제로 인해 혈청과 간의 감소된 칼슘 농도를 칼슘 처치로 증가 시 칼슘 형태에 따라 정도의 차이를 보임
● 나노칼슘은 패각칼슘보다 증가 정도 큰 것으로 확인
● 장에서의 흡수율을 보면 회장(pH 7.4)에서 흡수율이 높아짐
● 분획에 따른 칼슘시료의 흡수율을 보면, 십이지장 환경에서 입자의 크기가 작을수록 흡수율이 높아짐
□ 가용화 콜라겐의 흡수율 평가
● Protein의 함량은 시간이 지남에 따라 증가하는 경향을 보였으며, 시간이 흐를수록 콜라겐의 가수분해 시간이 많을수록 피부 투과율이 유의적으로 증가됨
□ 가용화 지방산의 흡수율 평가
● 혈중 지방산의 농도는(특정 지방산 함량/총 지방산 함량 × 100)으로 나타내었다. DA1, DA5, NS5에 비해 DA6, NS6를 투여한 경우가 투여 후 혈 중 지방산의 농도는 4시간째 급격한 차이를 보임(DA: 국내 산어유+항산화제, NS: 일본산어유).
● Crude한 oil 보다는 emulsion된 oil의 장 흡수율이 높았으며, Lecithin만 처리된 DA2(NS2)보다는 Lecithin 외에 Chitosan solution이 첨가된 DA3(NS3)나 Chitosan solution과 Low methoxyl pectin solution이 첨가된 DA4(NS4)에서 유의적으로 높은 투과율을 보임
□ 가용화 콜라겐의 melanocyte를 이용한 활성평가
● HaCaT cell에 Raw collagen의 경우에는 UVB를 처리하지 않은 군에서와 같이 10 μg/mL의 농도부터 세포독성이 나타났으며, 3시간 가수분해 콜라겐과 3시간 가수분해 콜라겐을 소화효소처리 한 군의 경우 유의적인 차이는 없지만 처치 농도가 높아질수록 UVB로부터 세포를 보호하는 경향을 보임
● 농도가 높아질수록 MMP-2의 발현이 감소하기 시작하여 농도 비례적으로 MMP-2의 발현을 저해하는 것을 확인함

(2차 년도)
□ 가용화 칼슘 활성 평가
● 난소절제 모델 흰쥐를 이용한 패각칼슘(OS Ca)과 나노칼슘(Nano Ca)의 체내 이용성 및 생리적 기능 평가 실시
● 저칼슘 식이를 이용하여 칼슘 형태에 따른 체내 칼슘의 햠량, ALP 및 osteocalcin 농도, DPD 배설량의 변화를 측정함으로서 확인한 칼슘 이용성은 나노칼슘 처리 시에 더 효과적으로 확인
● 대퇴골 골밀도 및 골함량은 칼슘처리에 따라 증가되는 경향을 나타냈으며, 나노칼슘 처리 시에 가장 좋은 결과를 나타냄
□ 가용화 콜라겐의 활성 평가 실험
● Hairless mouse에 UVB 조사 후 돈태반 가수분해 콜라겐의 경투여, 경피투여, 경구 및 경피 동시 투여를 실시하여 효능평가
● 피부수분보유량 증발량 측정결과 경구투여군에서 유의적인 효과를 나타냄. 또한 멜라닌, 홍반 측정결과 콜라겐의 미백 효과는 미미한 것으로 나타났다.
● 육안으로 Hairless mouse의 주름을 측정한 결과 시료처치군의 주름이 UVB보다 적었으며, 특히 경피투여군의 주름이 적게 하는데 효과적임
□ 가용화 불포화지방의 활성 평가
● Fish oil에 Internal standard 로 Tritridecanoin 을 첨가하여 가용화시킨 fish oil과 raw fish oil 각각을 경구 투여
● 적정시간마다 혈액을 채취하여 전처리 후 GC를 이용하여 혈액 내 조성 성분과 IS 비교 및 평가

(3차 년도)
□ 칼슘 소재 급성/아급성 평가
● 패각칼슘에 대한 독성 실험을 진행한 결과, 체중증가량, 식이섭취의 변화에 control과 실험 평가군 사이에 유의적인 차이가 없음
● Hematological parameters에서의 control과 실험군 사이에 유의적인 차이는 없음
● 혈액학적 지표의 경우 acute와 subacute test에서는 독성이 관찰되지 않음
□ 불포화지방산 소재 급성/아급성 평가
● 체중증가량, 식이섭취의 변화에 control과 실험 평가군 사이에 유의적인 차이가 없음
● 전혈(whole blood)에서의 혈액지표들을 평가한 결과, 모든 Hematological parameters에서의 control과 실험군 사이에 유의적인 차이는 없음
● Acute test 결과 male group에서의 Total protein의 수치에서 DHA 실험군의 수치가 control과 유의적인 차이를 보였으나, 정상범위내의 수치이므로 독성과는 무관
● 간, 신장, 심장, 비장 등의 무게 변화는 control과 실험군 사이에 유의적인 차이는 없음
● 안전성이 확보되어 있고, Acute과 subacute test 결과 독성이 없는 것으로 사료됨
□ 가용화 콜라겐의 피부감작
● 대조군(생리식염수)과 시험군(SPE 10%) 모두에서는 부종과 홍반이 전혀 관찰되지 않음
● Draze법에 의한 1차 피부자극지수(Primary Irritation Index, P.I.I.)를 산출한 결과 대조군은 0.08, SPE 10%군은 0.48로 모두 practically non-irritation로 나타남. SPE의 경우 10%의 고농도로 적용해도 P.I.I.가 0.48로 약간의 자극은 관찰되었으나 이는 비자극성에 해당하는 자극으로 특히 실제로 임상에서는 이보다 낮은 용량을 적용할 경우가 많을 것으로 피부안전성은 충분하다고 판단됨
● SPE로 처리한 군의 경우 약한 홍반과 부종이 관찰되기는 하였지만 평균 감작반응이 6.67%로 생리식염수로 처리한 음성대조군과 같이 grade Ⅰ으로 안전성에 문제가 없는 것으로 판단됨

Abstract ▼

Ⅲ. The Results of Research and Development
1. Development of high functional collagen peptide processing technique by using high pressure technology for the elderly
Research subject
□ Effects of High Pressure/High Temperature (HPHT) Processing on the Recovery and Characteristics of Porcine

Ⅲ. The Results of Research and Development
1. Development of high functional collagen peptide processing technique by using high pressure technology for the elderly
Research subject
□ Effects of High Pressure/High Temperature (HPHT) Processing on the Recovery and Characteristics of Porcine Placenta Hydrolysates
Results
● Placenta was treated at 37.5 MPa of pressure combined with various temperatures (150, 170, and 200℃) or various holding times (0, 30, and 60 min at 170℃).
● Optimum formulation was 170℃ and 30 min processing.
● Insoluble raw placenta collagen was partially solublized (>60% solubility) by the HPHT treatment.
● Free amino group content of placenta collagen was increased from 0.1 mM/g collagen to > 0.3 mM/g collagen after HPHT treatment
● Alanine (Ala), glycine (Gly), hydroxyproline (Hyp), and proline (Pro) contents increased after the HPHT treatments
□ Effect of High Pressure on the Porcine Placental Hydrolyzing Activity of Pepsin, Trypsin and Chymotrypsin
● In particular, the peptide bands of tryptic-digested hydrolysate were not shown regardless of applied pressure levels.
● The peptide bands of hydrolysate treated chymotrypsin showed gradual decreases in molecular weights (Mw) with increasing pressure levels.
● Pepsin also tend to lower the Mw of peptides, while the major bands of hydrolysates being treated at 300 MPa were observed at more than 7,000 Da.
● High pressure could enhance the placental hydrolyzing activities of the selected proteases and the optimum pressure levels at which the maximum protease activity is around 200 MPa.
□ Effect of Sub- and Super-critical Water Treatment on Physicochemical Properties of Porcine Skin
● For the molecular weight distribution analysis, 1 kDa hydrolyzed porcine skin (H-PS) was produced by Super-H₂O or Sub-H₂O treatment.
● The free amino acid content was 57.18 mM and 30.13 mM after Sub-H₂O and Super-H₂O treatment, respectively.
● Determination of amino acid profile revealed that the content of Glu (22.5%) and Pro (30%) was higher after Super-H₂O treatment than Sub-H₂O treatment, whereas the content of Gly (28%) and Ala (13.1%) was higher after Sub-H₂O treatment.
● Sub-H₂O and Super-H₂O treatments were effective processing methods for hydrolysis of PS collagen in a short time and can be regarded as a green chemistry technology.
□ Effect of Porcine Collagen Peptide on Rheological and Sensory Properties of Ice Cream
● Low molecular collagen peptide less than 1 kDa was obtained from sub-critical water hydrolysis with temperature of 300℃ and pressure of 80 bar.
● There was no significant color difference between all kinds of ice creams. Addition of HPS had less effect on increasing apparent viscosity and strengthening shear thinning behavior of ice cream mix.
● At over 0.2% HPS enhanced melting resistance and 0.2% HPS showed lowest storage modulus at -20℃ and second highest loss modulus at 10℃, indicating this combination of hydrocolloids produced relatively softer and creamier chocolate ice cream.
● Ice cream produced by 0.2% HPS and 0.3% gelatin represented the best physicochemical properties among all the seven types of ice creams.
● However, according to sensory evaluation, HPS showed lowest chocolate flavor score and highest off-flavor score compare with 0.5% gelatin added ice cream due to the strong off-flavor of HPS.
□ Effect of Subcritical Ethanol Extraction for Porcine Placenta Hydrolysates
● For the molecular weight distribution, lowest molecular weight of hydrolysates was observed at 434 Da and that peak was shifted to low molecular weight range by DW medium (low ETOH concentration) and longer time (30 min) extraction
● In this subcritical extraction system (170℃, 10 bar), it was successfully carried out to extract below 500 Da molecular weight hydrolysates from porcine placenta but the addition of ETOH was not effective to produce lower molecular weight hydrolysates compare with pure water.

2. Development of nano- or microencapsulation technology for physiological polyunsaturated lipids to improve their availability
□ Development of Efficient Extraction Techniques by New Processing Method of Solubilizing Low-Carbon Unsaturated Fatty Acid-Containing Lipid
● Optimization of optimal extraction process with highly unsaturated lipids by using organic solvents, supercritical CO₂ and CO₂ (supercritical carbon dioxide extraction conditions (50℃, 25 gCO₂/min)
● Tuna eye oil was extracted with optimum condition at 5 0℃ and 300 bar
● Analysis of lipid active composition by extraction with optimal processing
● Analysis of global sourcing highly unsaturated fatty acid-containing lipid composition
● Comparative POV values of bioactive lipids (before/after antioxidant added) under 30℃, aerobic condition: 4 times better antioxidant activity
● The improvement of physiological active lipid’s antioxidant capacity
□ Formulation Development of Multilayered Fish oil Emulsion by Using Electrostatic Deposition of Charged Biopolymers
● The selected concentrations of coating materials were 1.25% Tween 20 (primary layer), 0.1% chitosan (secondary layer), and 0.2% low methoxyl pectin (tertiary layer).
● All Fish oil (FO) emulsions were physically stable resulting in small particles below 300 ㎚ with a narrow size distribution. Furthermore, the oxidation stability of multilayered FO emulsions decreased with decreasing number of membrane layers because FO was released from layered emulsions.
● The physical and oxidation stability of FO can be improved by using multilayered emulsions containing Tween 20, chitosan, and low methoxyl pectin.
□ Changes in Quality Characteristics of Food System Containing Multilayered Fish Oil Emulsion during Refrigerated Storage
● Multilayered FO (‑primary, ‑secondary, ‑tertiary) emulsions were prepared using a layer-by-layer deposition technique with Tween 20, chitosan, and low methoxyl pectin, and were added to pork patties at the same concentration.
● Lipid oxidation was higher in treated patties than in control patties during storage. In addition, lipid oxidation and total viable bacterial count in patties decreased as the number of coating layers increased.
● Fish oil emulsion did not affect the texture characteristics of the fresh patties, indicating that it could be used to improve the quality of pork patties by contributing high-quality fat such as unsaturated fatty acids.
□ Production of Microcapsules in Food System Containing Polyunsaturated Fatty Acids Enhanced Solubility
● Microcapsule produced at previous study was applied into food system such as milk, yogurt, orange juice, nutrition food, coffee creamer and then Sensory evaluation scores of all foods with microencapsulated lipid containing polyunsaturated fatty acids.
● During storage, the stability of microcapsule added food was stable.
● There were no change of appearance in all foods but fish oil microcapsule generated specific off-flavor derived from fish.
● Therefore microcapsule affected overall preference of foods except coffee creamer.

3. Development of calcium solubilization techniques and soluble calcium complex
□ Physicochemical Properties of Nanopowdered Eggshell
● The average particle sizes of NPES and powdered eggshell (PES) were 202.3 28.9 ㎚, 113.89 ㎚ and 79.37 ㎚, respectively. Zeta-potentials of NPES (15.41 mV) suggested an incipient instability of the colloidal system.
● Moisture sorption analysis indicated a higher water adsorption capacity of NPES than that of PES. X-ray diffractometer (XRD) analysis confirmed the presence of calcite in both NPES and PES.
● The chemical compositions of the NPES and PES particles were strongly associated with the presence of calcium carbonate, as determined by the Fourier transform infrared (FT-IR) spectra.
● Eggshell nanopowder has a great potential to be utilized as a component for biomedical applications.
□ Effects of Nanopowdered Eggshell on Postmenopausal Osteoporosis: A Rat Study
● Rats fed NPES and powdered eggshell (PES) exhibited 6.6 and 2.2% greater bone mineral densities (BMD) than ovariectomized (OVX) rats.
● Investigation of the trabecular bone in NPES fed rats revealed a 12.4% higher bone volume (BV/TV), 7.5% higher trabecular number (Tb.N.), and 14.5% lower trabecular separation (Tb.Sp.), compared with OVX rats.
● Serum analysis demonstrated that NPES fed rats showed a significantly (p<0.05) higher (22.4%) osteocalcin level than OVX rats.
● Urine analyses in NPES fed rats revealed 43.7% lower deoxypyridinoline (DPD) and 87% lower Nteleopeptide levels of type I collagen (NTX) than in OVX rats. NPES attenuated the bone loss induced by ovariectomy in rats.
□ Physicochemical, Microbial, and Sensory Properties of Nanopowdered Eggshell-Supplemented Yogurt during Storage
● The pH and mean lactic acid bacteria counts of NPES-added (0.15~0.45%, wt/vol) yogurt ranged from 4.31 to 4.66 and from 6.56 × 10⁸ to 8.56 × 10⁸ CFU/mL, respectively, whereas these values ranged from 4.13 to 4.44 and 8.46 × 10⁸ to 1.39 × 10⁹ CFU/mL respectively, for the control samples during storage at 5℃ for 16d, which indicates a prolonged shelf-life with NPES-supplemented yogurt.
● Sensory evaluation revealed that NPES-added yogurt showed a notably less sourness score and a higher astringency score than the control. An earthy flavor was higher in 0.45% NPES-supplemented yogurt compared with the control.
● Based on the results obtained from the current study, the concentration (0.15~0.30%, wt/vol) of NPES can be used to formulate NPES-supplemented yogurt without any significant adverse effects on the physicochemical, microbial, and sensory properties.

4. Assessment of function, availability and safety of processed insoluble functional food ingredients
□ Skin Permeability of Porcine Placenta Extracts and Its Physiological Activities
● The skin permeability and various biological activities of porcine homogenate of placenta (HP) with the highest protein contents (452.89 μg/㎎).
● The content of protein in subcritical extract of HP (SPE) was decreased from the initial content of 452.9 μg/㎎ to 262.7 μg/㎎ at 3 h subcritical extract.
● SPE-3 showed highest skin permeation and the permeability was significantly higher than that of HP. SPE-2 also showed significantly higher permeation than HP after 4 h. As expected, increase of extraction time significantly increased skin permeability in the subcritical extract of HP (SPE).
● In terms of cost and source availability, porcine placenta extracted with subcritical extraction has advantages over untreated PE and have potential as a cosmetic ingredient.
□ Nano-Calcium Ameliorates Ovariectomy-Induced Bone Loss in Female Rats
● Increased body weight, which is one of the physiological effects of ovary removal, was significantly recovered by Nano-Ca treatment (p<0.05).
● The reduced calcium level in the liver in ovariectomised rat was increased significantly with OS-Ca and Nano-Ca treatment (p<0.05), suggesting improved calcium bio-availability. Alkaline phosphatase (ALP), osteocalcin, and deoxypyridinoline (DPD) were analysed as biochemical markers of bone metabolism and health in the presence or absence of OS-Ca and Nano-Ca.
● The tested calcium treatments, especially using Nano-Ca, enhanced the bioavailability or absorption of calcium and positively affected bone metabolism in ovariectomised rats
□ Antioxidant Effect and Functional Properties of Hydrolysates Derived from Egg-White Protein
● Treatment with Neutrase yielded the most α-amino groups (6.52 ㎎/mL). Alcalase, Flavourzyme, Protamex, and Ficin showed similar degrees of α-amino group liberation (3.19~3.62 ㎎/mL).
● Neutrase treatment also resulted in the highest degree of hydrolysis (23.4%). Alcalase and Ficin treatment resulted in similar degrees of hydrolysis.
● All hydrolysates, except for the Flavourzyme hydrolysate, had greater radical scavenging activity than the control.
● Neutrase was identified as the optimal enzyme for hydrolyzing egg-white protein to yield antioxidant peptides.
● During Neutrase hydrolysis, the reaction rate was rapid over the first 4 h, and then subsequently declined.
● The active peptides released from egg-white protein showed antioxidative activities on ABTS and DHHP radical. Thus, this approach may be useful for the preparation of potent antioxidant products.