초록 ▼

본 연구과제는 곤충세포를 이용하여 두 개의 서로 다른 항원을 동시에 인지할 수 있는 복합단일항체 곤충세포 발현 시스템을 구축하고, 항체 당구조의 인간화를 통해 항체의 항암활성에 대한 synergisitic effect를 연구하였다. 본 연구과제의 중요성은 곤충세포에서 암 항원을 인지할 수 있는 항체를 발현할 수 있는 가에 대한 가능성을 확인한다는 것과, 인간화 된 당구조를 가지는 항체를 곤충세포에서 발현한 원천기술개발의 선점에 있다. 본 연구의 주요 연구 내용 및 결과로는 대장암을 인지하는 항체 mAb CO17-1A와 유방암을 인지

본 연구과제는 곤충세포를 이용하여 두 개의 서로 다른 항원을 동시에 인지할 수 있는 복합단일항체 곤충세포 발현 시스템을 구축하고, 항체 당구조의 인간화를 통해 항체의 항암활성에 대한 synergisitic effect를 연구하였다. 본 연구과제의 중요성은 곤충세포에서 암 항원을 인지할 수 있는 항체를 발현할 수 있는 가에 대한 가능성을 확인한다는 것과, 인간화 된 당구조를 가지는 항체를 곤충세포에서 발현한 원천기술개발의 선점에 있다. 본 연구의 주요 연구 내용 및 결과로는 대장암을 인지하는 항체 mAb CO17-1A와 유방암을 인지하는 항체 mAb BR55, 그리고 이 항체들의 Large single chain (LSC) 구조형태 발현을 위한 각각의 곤충세포 발현 벡터를 구축 완료하였다. 구축한 벡터들을 이용하여 Sf9 곤충세포주에서 각 항체들의 발현 및 정제에 성공하였고, 항체 당구조의 인간화를 위해 SWT-4 곤충세포주에서도 각 항체들의 발현 및 정제를 성공적으로 수행하였다. 서로 다른 곤충세포주 (Sf9, SWT-4)에서 각각의 항체를 정제하는데에 최적화된 정제 프로토콜을 확립하기 위하여 곤충세포유래 항체들의 특성에 맞는 정제 조건을 세워 정제 최적화를 하였다. 발현 및 정제된 곤충세포 유래 항체들의 각각의 암세포 인지능 및 항암 활성을 확인하기 위하여 Indirect cell ELISA 및 Cancer cell migration test를 이용하여 곤충세포 유래 항체들이 항암 활성을 갖고 이음을 확인하였다. 특히, mAb CO17-1A with KDEL의 대장암세포 Migration assay 결과 대장암 세포에 항암 활성이 있음을 확인 할 수 있었다. 또한 mAb BR55와 LSC BR55 간의 구조적 차이에 따른 암세포 ELISA 비교실험도 수행하였다. 그리고 항체들의 Glycan structure analysis를 통해 ER retention signal인 KDEL sequence를 갖는 항체는 High mannose type, 그렇지 않은 항체는 Insect glycan specific type을 주로 갖고 있음을 확인하였다. 이들 항체의 동시발현을 위한 LSC 형태의 CO17-1A와 BR55를 하나의 곤충세포에서 발현시키기 위한 동시발현벡터도 성공적으로 구축하였다. 이 연구를 통해 곤충에서의 항체생산기술과 곤충유래항체의 당구조 변형 및 당구조분석, 항체의 세포 내의 subcellular compartment로의 localization이 미치는 발현정도 등 항체발현에 관련 있는 응용곤충학, 당단백질학, 세포생물학, 면역학 등의 기술적 발전에 공헌할 것으로 기대된다. 또한 곤충세포 발현시스템을 이용하여 생산하는 다양한 암 예방용 백신 뿐 만 아니라 다른 전염병 및 성인병 백신 단백질 생산 기반 기술로 활용 가능하고, 다양한 암 치료용 항체 뿐 만 아니라 여러 전염병 항체의 단백질 생산최적화시스템기반 기술을 확보할 수 있는 효과도 있을것으로 기대된다.