초록 ▼

[2] 주요내용

추진목적
- STING은 세포 내로 침입한 박테리아와 바이러스들의 DNA를 인식하여 제1형 인터페론을 형성하는 선천면역경로의 핵심 단백질임
- STING 경로는 자가면역질환, 과민성면역반응에 관여한다고 알려져 있을 뿐 아니라 최근에는 암세포에 대항하는 면역시스템의 활성, 암의 전이 억제, 암세포의 치료 등에 필수적인 분자로 보고되면서 이를 이용한 새로운 항암백신, 치료제의 제조에 많은 관심이 집중되고 있음
- STING 활성화의 가장 중요한 두 가지 특징은 이형체형성과 위치이동이나, 위치

[2] 주요내용

추진목적
- STING은 세포 내로 침입한 박테리아와 바이러스들의 DNA를 인식하여 제1형 인터페론을 형성하는 선천면역경로의 핵심 단백질임
- STING 경로는 자가면역질환, 과민성면역반응에 관여한다고 알려져 있을 뿐 아니라 최근에는 암세포에 대항하는 면역시스템의 활성, 암의 전이 억제, 암세포의 치료 등에 필수적인 분자로 보고되면서 이를 이용한 새로운 항암백신, 치료제의 제조에 많은 관심이 집중되고 있음
- STING 활성화의 가장 중요한 두 가지 특징은 이형체형성과 위치이동이나, 위치이동을 통한 STING의 활성화 조절 기작은 아직 밝혀지지 않음
- 본 연구에서는 STING의 위치 이동을 조절하여 STING의 활성을 조절하는 단백질을 발굴하고자 함

추진내용
- 기존 연구에서 질량분석기를 이용해 STING과 상호작용하는 단백질들에 대해 보고한 경우가 있었으나 STING 활성화의 가장 중요한 특징인 위치이동에 특이적인 단백질만을 선별할 수 없었음
- 이를 극복하고 위치이동에 특이적인 단백질들을 빠르고 효율적으로 찾아내기 위해 위치이동이 억제된 돌연변이를 찾고자 여러 돌연변이 STING들을 클로닝하고 이들의 위치이동여부와 이형제 형성여부를 확인하여 후보 돌연변이를 선정하였음
- 정상 STING과 위치이동이 억제된 돌연변이 STING을 각각 안정적으로 발현하는 세포주를 제작한 뒤 정량질량분석을 위해 세포 표지 (Labeling)를 진행하였음
- 한국표준과학연구원에서 막 단백질인 STING에 적합한 최적인 정제조건을 선정한 후 표지된 세포주에서 STING을 정제하여 정량질량분석기술로 결합 단백질을 발굴하였음
- 발굴한 후보 단백질에 대한 유전자 클로닝을 진행한 후 이들을 과발현하였을때 STING과의 결합여부를 공침전으로 확인하였음
- 발굴한 후보 단백질의 발현을 억제한 후 DNA 자극에 대한 제 1형 인터페론의 발현 양을 확인하여 STING 경로에 효과를 보인 단백질들을 선발하였음


당초 연구계획서상 계획 성취도

- 연구계획서 목표 및 계획: 성취내용 및 성취도(100 %)
[KAIST]
- 정상 STING과 위치이동 돌연변이 STING을 안정적으로 발현하는 세포주 제작-100%
- 정상 STING과 위치이동 돌연변이 STING을 발현하는 세포주에서 제1형 인터페론 생성 여부 확인-100%
- 정상 STING과 위치이동 돌연변이 STING을 발현하는 세포주에서 정량질량분석을 위한 세포 표지(Labeling)-100%
- 정량질량분석기술로 발굴한 STING 결합 단백질에 대한 유전자 클로닝-100%
- 정량질량분석기술로 발굴한 후보 단백질 유전자를 과발현한 후 STING과의 결합여부를 공침전(co-immuno-precipitation)으로 확인-100%
- 당초 계획에 추가로, 발굴한 후보 단백질의 발현을 억제한 후 DNA 자극에 대한 제 1형 인터페론의 발현 양을 확인-100%

[한국표준과학연구원]
- 정량질량분석기술을 위한 최적조건 선정 100%
- STING 정제를 위한 최적조건 선정 100%
- 정상 STING과 돌연변이 STING을 발현하는 세포주에서 STING을 정제 후 정량질량분석기술로 결합단백질 발굴-100%


성과활용 방안(향후계획)
1) STING 경로를 조절하여 제 1형 인터페론의 형성을 증가시키는 신규 단백질을 발굴하였음
2) 이 단백질의 STING 조절에 대한 분자적 기작을 규명하고자 활발히 연구를 수행중임
3) 본 연구를 통하여 새로운 STING의 조절 기전을 밝힐 것으로 기대하며 논문 투고 및 국제학회에서 발표할 예정임

(출처:요약)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 요약 ... 3
• 목차 ... 6
• 제1장 기획연구의 개요 ... 7
• 제1절 연구개발의 추진배경 및 필요성 ... 7
• 제2절 출연연과의 협력 필요성 ... 8
• 제2장 기획연구 수행내용 ... 10
• 제1절 정상 STING과 위치이동 돌연변이 STING을 안정적으로 발현하는 세포주 제작 ... 10
• 제2절 정상 STING과 위치이동 돌연변이 STING을 발현하는 세포주에서 제1형 인터페론 생성 여부 확인 ... 12
• 제3절 정상 STING과 위치이동 돌연변이 STING을 발현하는 세포주에서 정량질량분석을 위한 세포 표지(Labeling) ... 14
• 제4절 정량질량분석기술을 위한 최적조건 선정 및 STING 정제를 위한 최적조건 선정 ... 15
• 제5절 정상 STING과 돌연변이 STING을 발현하는 세포주에서 정량질량분석기술을 통한 결합단백질 발굴 ... 16
• 제6절 정량질량분석기술로 발굴한 STING 결합 단백질에 대한 유전자 클로닝 ... 18
• 제7절 정량질량분석기술로 발굴한 후보 단백질 유전자와 STING의 결합여부를 공침전으로 확인 ... 19
• 제8절 후보 단백질 발현의 억제 후 DNA 자극에 대한 제 1형 인터페론의 발현 양 확인 ... 21
• 제3장 활용계획 및 기대효과 ... 24
• 제1절 DNA로부터 유도되는 면역계 활성의 전반적인 조절 가능 ... 24
• 제2절 효율적이고 새로운 항암 면역치료제 개발 촉진 ... 24
• 제3절 자가면역질환과 과민성면역반응으로 인한 난치병에 대한 치료제 개발 촉진 ... 24
• 제4절 효율적인 백신 제조에 기여 ... 25
• 제4장 참고문헌 ... 26
• 끝페이지 ... 27