초록 ▼

본 사업은 말을 실험동물로하여 디프테리아 독소를 면역함으로써 얻어지는 혈청에서 항체를 정제하고 그 역가 등 성능을 평가한 후 이를 디프테리아 항독소 국가표준품 후보물질로서 확보하는데 있음.

디프테리아 독소를 활용한 항원의 종류, 투여경로, 투여횟수 등 말 면역화 관련 기반자료가 부족한 상황에서 효과적인 항체역가를 확보하는데 어려움이 있으나, 이를 극복하기 위하여 불활화된 백신과 실제 독성이 있는 독소를 병행하여 실시하였으며, 항원의 투여경로로서 근육 내 투여와 혈관 내 투여 방법을 혼용하여 역가 상승을 비교평가 하였음.

본 사업은 말을 실험동물로하여 디프테리아 독소를 면역함으로써 얻어지는 혈청에서 항체를 정제하고 그 역가 등 성능을 평가한 후 이를 디프테리아 항독소 국가표준품 후보물질로서 확보하는데 있음.

디프테리아 독소를 활용한 항원의 종류, 투여경로, 투여횟수 등 말 면역화 관련 기반자료가 부족한 상황에서 효과적인 항체역가를 확보하는데 어려움이 있으나, 이를 극복하기 위하여 불활화된 백신과 실제 독성이 있는 독소를 병행하여 실시하였으며, 항원의 투여경로로서 근육 내 투여와 혈관 내 투여 방법을 혼용하여 역가 상승을 비교평가 하였음. 또한 투여횟수도 4회에서 6회까지 실험동물의 상태가 악화되지 않는 한도 내에서 투여하였음. 매회 투여 전에 정맥에서 혈액을 채취하여 항체역가를 평가함으로써 높은 역가에 도달 후 다량의 채혈을 실시하여 항체 정제를 위한 시료를 확보하였음. 이후 이를 protein G column을 활용한 affinity chromatography 방법을 통해 항체를 정제한 후, 농축 및 PBS 완충액을 이용한 투석을 실시하였음. 최종적으로 이를 8IU/vial이 되도록 분병 후 이를 동결건조하고 국가표준품 후보물질로서 그 특성분석 및 타당성을 검토하였음. 이러한 특성분석에는 후보물질의 품질평가, 항체역가산정, 실시간 안정성 및 열안정성 평가 등을 포함하였음. 또한 동결건조 이후 품질 및 안전성, 역가 등 품질평가의 결과 또한 재현성이 있음을 확인하였음.

2,000 vial의 후보물질을 제조하였으며, 이는 디프테리아 항독소 2차 국가표준품 후보물질로서 디프테리아 톡소이드 표준품 역가시험에 활용 될 수 있을 것으로 기대됨. 또한 디프테리아 독소와 관련된 말을 활용한 면역화 관련 기초자료가 부족한 상황에서 향후 관련 연구에 기반을 제공한다는 점(면역화 과정 및 주사 방법, 용량 등)에서 의의가 클 것으로 판단됨.

(출처 : 요약문 6p)

Abstract ▼

This study was focused on the development of the Second National Reference Candidate of Anti-Diphtheria Toxin which quality was evaluated including antibody titer after being purified with equine antisera.

It was difficult to survey the fundamental data related with equine immunization method

This study was focused on the development of the Second National Reference Candidate of Anti-Diphtheria Toxin which quality was evaluated including antibody titer after being purified with equine antisera.

It was difficult to survey the fundamental data related with equine immunization methods with diphtheria toxin which include antigen type, injection routes, and times. So we have used both inactivated toxin(toxoid) and active one as antigen type, and injected those with intravenous and intramuscular route. And also we have injected antigens 4 or 6 times under the condition that the experimental animals can endure during the immunization procedures. Every time before antigen was injected we took the blood sample from the veins to test its antibody titer, and then large volume of serum was collected after its titer was reached to the goal that was thought. Anti-diphtheria toxin was purified with affinity chromatography method with protein G column and then concentrated samples were dialyzed with phosphate-buffered saline. Finally those samples were divided to small volume that have 8IU/vial, and then lyophilized with freeze-drying method. We have tested these candidates on antibody titer, real-time/thermal stability, and so on successfully.

About 2,000 vials of Second National Reference Candidate of Anti-Diphtheria Toxin were submitted, that can be expected to be used for the standard titer test of diphtheria toxoids. and also this study’s data can be refered to the fundamental protocol related with equine immunization for the future researches.

(출처 : Summary 8p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 용역연구개발과제 최종보고서 ... 2
• 제출문 ... 3
• 목차 ... 4
• Ⅰ. 총괄연구개발과제 요약문 ... 6
• 국문 요약문 ... 6
• Summary ... 8
• Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과 ... 10
• 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ... 10
• 제2장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법 ... 14
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ... 37
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 39
• 제5장 총괄주요연구 변경사항 ... 40
• 제6장 총괄참고문헌 ... 41
• 제7장 총괄첨부서류 ... 42
• 끝페이지 ... 43