보고서 정보
주관연구기관 |
식품의약품안전평가원 National Institute of Food and Drug Safety Evaluation |
연구책임자 |
이철현
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참여연구자 |
정혜주
,
안준익
,
반상자
,
이석배
,
김관수
,
김정환
,
김형욱
,
이선미
,
강소영
,
이완희
,
최선림
,
배현아
,
박제연
|
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2016-12 |
과제시작연도 |
2016 |
주관부처 |
식품의약품안전청 Korea Food & Drug Administration |
등록번호 |
TRKO201700017598 |
과제고유번호 |
1475009371 |
사업명 |
의약품등안전관리 |
DB 구축일자 |
2017-11-25
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키워드 |
정제백일해백신.역가시험.백일해 항원.백일해 항혈청.국가표준품.acellular pertussis vaccine.potency test.pertussis antigen.pertussis antiserum.national reference.
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DOI |
https://doi.org/10.23000/TRKO201700017598 |
초록
▼
현재 정제백일해백신의 역가시험에 사용되고 있는 항체가시험법의 경우, 각 제품 모두 자사 표준품을 사용하고 있어 국내 수급 문제로 인한 국가출하승인 기한 연장이 종종 발생하고 있고, 일관된 품질관리에 어려움이 있다. 또한 국내 제조사에서 DTaP백신을 개발하고 있어 이에 대한 대비가 필요한 실정이다. 백신의 일관된 품질관리 및 백신 제조사의 개발 진입 장벽을 낮추기 위해서는 항체가시험용국가 표준품이 반드시 필요하다. 이러한 이유로 1차년도에 항체가시험에 필수적인 코팅항원을, 2차년도에는 검체의 항체가 산정에 필요한 항혈청을 제조하고
현재 정제백일해백신의 역가시험에 사용되고 있는 항체가시험법의 경우, 각 제품 모두 자사 표준품을 사용하고 있어 국내 수급 문제로 인한 국가출하승인 기한 연장이 종종 발생하고 있고, 일관된 품질관리에 어려움이 있다. 또한 국내 제조사에서 DTaP백신을 개발하고 있어 이에 대한 대비가 필요한 실정이다. 백신의 일관된 품질관리 및 백신 제조사의 개발 진입 장벽을 낮추기 위해서는 항체가시험용국가 표준품이 반드시 필요하다. 이러한 이유로 1차년도에 항체가시험에 필수적인 코팅항원을, 2차년도에는 검체의 항체가 산정에 필요한 항혈청을 제조하고 함량 설정 등을 수행하여 향후 국가표준품으로 등록, 분양하고자하였다.
항원 후보물질 제조를 위한 백일해 균주는 Bordetella pertussis Tohama Ⅰ을 사용하였다. 균주 배양에 대한 온도, pH, 용존산소량 등에 대한 최적 조건을 탐색하여 배양공정을 최종 확립하였다. 그리고 PT, FHA, PRN 항원에 대한 정제 최적 조건을 탐색하여 확립하였다. 최종 완제품 각 1,000 바이알을 제조하였다. 제조된 각 항원에 대한 단백질 정량 결과, PT는 170.2 ug/ml, FHA는 158.5 ug/ml, PRN은 184.4 ug/ml의 농도를 나타내었다. 각 항원 후보물질에 대한 품질 검사로 순도시험 및 무균시험을 수행하였으며, 모두 적합한 결과를 얻었다. 제조된 각 항원 후보물질에 대한 확인시험으로 Western blot 및 total mass 분석을 수행하여 제조된 항원 후보물질이 PT, FHA, PRN임을 확인하였다.
항혈청 생산을 위한 백신은 PT, FHA, PRN 항원을 포함하고 있는 백신을 사용하였고, 최적 항혈청제조를 위한 면역 횟수 및 기간을 설정하기 위해 pilot 시험을 수행하여 최적의 면역 조건을 확립하였다. 확립된 면역 조건에 따라 면역을 수행하여 항혈청을 수집하고, protein G 컬럼을 이용하여 수집된 항혈청을 정제하였다. 정제 항혈청은 동결건조과정을 거쳐 최종 완제품 1,500 바이알이 제조되었다. 제조된 항혈청 후보물질에 대한 품질 검사로 순도시험 및 무균시험을 수행하였으며, 모두 적합한 결과를 얻었다. 제조된 항혈청의 항체가를 설정하기 위해 4개 기관이 참여하는 다기관 공동연구를 수행하였고,기관 당 6회 반복을 수행하였다. 국제표준품(97/642) 대비 항혈청 후보물질의 최종 항체가는 PT 57 EU/ml, FHA 338 EU/ml, PRN 45 EU/ml 이었다.
본 연구를 통해 제조된 항혈청 3종 및 항혈청은 향후 국가표준품으로 등록 및 분양될 예정이며, 정제 백일해 역가시험 국가검정에 활용될 것이다.
( 출처 : 요약문 3p )
Abstract
▼
Regulatory authority performs the lot release test including a potency test before the products release on the market. Immunogenecity assay is used for the potency test of acellular pertussis (aP)vaccine. In Korea, the immunogenecity assay is currently tested for imported aP vaccines and performed u
Regulatory authority performs the lot release test including a potency test before the products release on the market. Immunogenecity assay is used for the potency test of acellular pertussis (aP)vaccine. In Korea, the immunogenecity assay is currently tested for imported aP vaccines and performed using in-house reference materials. Therefore, domestic supply problem of in-house materials occasionally causes delay of national lot release. The aim of the present study is manufacturing of pertussis antigens (PT, FHA, PRN) and antiserum as a national reference material.
Bordetella pertussis Tohama I was used for manufacturing of antigens. The most suitable conditions in strategies of bacterial fermentation and purification of antigens were established. We produced 1,000 vials of the final product, respectively. The protein concentration of antigens was determined by BCA assay. The protein concentration of manufactured antigens was 170.2 ug/ml of PT, 158.5 ug/ml of FHA and 184.4 ug/ml of PRN. The 3 antigens were shown the purity over 95% from analysis of SDS-PAGE. Through the test including Western blot and total mass analysis,antigens were identified as a PT, FHA and PRN protein, respectively.
The candidate antiserum was obtained by immunizing ICR mice with a three component acellular pertussis vaccine: PT, FHA and PRN. Immunoglobulins were purified by chromatography and dialyzed against phosphate buffered saline. Immunoglobulin solution was diluted in 10% normal mouse serum in PBS. The solution was dispensed in 0.5 ml aliquots into glass vials and freeze dried under vacuum(1,500 vials). Further analysis of the outcome of collaborative study enabled to assign to the pertussis candidate antiserum a potency of 57, 338 and 45 ELISA unit/ml,respectively, to its anti-PT, anti-FHA and anti-PRN antibody contents.
Thus, the 3 antigens and antiserum might be used for lot release test of acellular pertussis vaccine products in Korea.
( 출처 : SUMMARY 4p )
목차 Contents
- 표지 ... 1
- 자체연구개발과제 최종보고서 ... 2
- 국문 요약문 ... 3
- Summary ... 4
- 목차 ... 5
- 제1장 연구개발과제의 개요 ... 6
- 제1절 연구개발과제의 목표 ... 6
- 제2절 연구개발과제의 필요성 ... 6
- 제2장 연구개발과제의 국내·외 연구개발 현황 ... 9
- 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 11
- 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 53
- 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 56
- 제6장 연구개발과제의 연구개발 결과 활용계획 ... 57
- 제1절 연구성과 및 활용계획 ... 57
- 제7장 참고문헌 ... 58
- 제8장 첨부서류 ... 59
- 끝페이지 ... 60
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