초록 ▼

본 연구는 인플루엔자 백신의 주요항원인 헤마글루티닌 항원 함량 측정에 사용되는 표준 시험법인 SRID(Single Radial Immunodiffusion) Assay를 대체하기 위해 다양한 종류의 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 항원 중 conserved domain을 타깃하는 유니버설 항체를 이용하여 ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)를 기반으로 한 인플루엔자 백신 헤마글루티닌 함량측정 시험법 개발에 대한 연구이다.

유니버설 항체를 만들기 위한 유니버설 항원 개발을 위하여 본 연

본 연구는 인플루엔자 백신의 주요항원인 헤마글루티닌 항원 함량 측정에 사용되는 표준 시험법인 SRID(Single Radial Immunodiffusion) Assay를 대체하기 위해 다양한 종류의 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 항원 중 conserved domain을 타깃하는 유니버설 항체를 이용하여 ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)를 기반으로 한 인플루엔자 백신 헤마글루티닌 함량측정 시험법 개발에 대한 연구이다.

유니버설 항체를 만들기 위한 유니버설 항원 개발을 위하여 본 연구팀은 헤마글루티닌의 아미노산 서열의 library approach를 통한 in silco analysis 을 통하여 인플루엔자 A group1, A group2, B 바이러스 각각에 대한 conserved 헤마글루티닌 항원을 디자인하였다.

이에 해당 항원을 본 연구팀의 독특한 단백질 발현기술인 RNA binding protein fusion technology를 이용해 E. coli에서 soluble 하게 발현하고 정제하였다. 정제 항원을 쥐에 접종을 통해 마우스 유래 단클론항체를 제작하였다. 이를 ELISA assay 1차 항체로 사용하여 미지의 백신 샘플 내 헤마글루티닌 함량 측정에 사용될 수 있는 ELISA assay방법을 구축하였다.

특히 이번연구에서는 A group 1에 대한 유니버설 단클론항체를 평가한 결과 동일 그룹 내 다양한 인플루엔자 헤마글루티닌에 결합함을 확인하였으며 다른 그룹에는 결합하지 않는 그룹 특이적 유니버설 항원임을 확인하였다. 또한 이를 통한 ELISA 반응을 통계적으로 분석한 결과 항원 양에 비례한 양의 상관관계를 보임을 확인하였다. HA 종류마다 binding affinity 가 달라질 수 있음을 확인하였으며 이에 따라 항원의 전처리과정 최적화의 중요성을 확인하였다.

본 연구를 통해 제시된 새로운 역가시험법은 기존의 시험법보다 효율적인 방법으로 바이러스 변이와 상관없이 적용가능하며 신속 정확한 백신 역가측정이 가능할 것으로 기대된다. 또한 국내의 독자적인 시험법이 마련되면서 해외 의존도 감소 인플루엔자 백신 생산 및 관리에 있어 세계적 선도 기술로의 제시가 가능할 것으로 예상된다. 또한 인플루엔자 외에 다양한 바이러스 및 병원균들의 항원 검증 및 백신함량 측정 기술발전에 파급효과를 줄 것으로 기대된다.

( 출처: Ⅰ. 총괄연구개발과제 요약문(국문) 6p )

Abstract ▼

The goal of this research project is developing an alternative assay for SRID(Single Radial Immunodiffusion) assay which is a standard test for quantification of hemagglutinin antigen in influenza vaccine. We introduced a quantitative ELISA based on universal monoclonal antibody which can bind with

The goal of this research project is developing an alternative assay for SRID(Single Radial Immunodiffusion) assay which is a standard test for quantification of hemagglutinin antigen in influenza vaccine. We introduced a quantitative ELISA based on universal monoclonal antibody which can bind with hemagglutinin from various influenza drifting strains.

In this study, in silco analysis was conducted to design universal antigen to be targeted by an universal antibody. Universal antigens for influenza A virus group 1, A virus group 2 and B virus were designed through the analysis.

Next, we expressed the universal influenza hemagglutinin antigens from E. coli as soluble form using our RNA binding protein fusion technology that enables soluble expression of target antigens as properly folded form. The antigens were purified and used for the immunization of mouse.

Monoclonal antibodies were screened for specific interaction with the target antigens. Employing the monoclonal antibody as the 1^st antibody for ELISA, developed a prototype ELISA assay for the quantification of hemagglutinin in influenza vaccine.

The designed monoclonal antibody was specific for various subtypes and drift strains of influenza virus group 1. We also confirmed that the ELISA response was proportional to the quantity of hemagglutinin antigen.

The new hemagglutinin quantification assay was more sensitive and efficient than the current SRID-based assay, and have a potential to present a rapid and accurate vaccine antigen quantification. The results could be utilized as a platform for further discussion with WHO as an international standard for the quantification of influenza vaccines.

( 출처: SUMMARY 8p )

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 용역연구개발과제 최종보고서 ... 2
• 제출문 ... 3
• 목차 ... 4
• Ⅰ. 총괄연구개발과제 요약문 ... 6
• 국문 요약문 ... 6
• Summary ... 8
• Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과 ... 10
• 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ... 10
• 제2장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법 ... 22
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ... 40
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 128
• 제5장 총괄주요연구 변경사항 ... 130
• 제6장 총괄참고문헌 ... 130
• 제7장 총괄첨부서류 ... 132
• 끝페이지 ... 133